乳腺癌组织中lncRNA PVT1的表达与患者临床特征及总体生存率的关系

牛智平，王 娟，汪富涛，成 勇，舒俊伟，杜嘉源

(1.安康市人民医院普外科，陕西安康 725000，2.西安大兴医院妇产科 西安 710014)

乳腺癌是全球范围内女性中最常见和死亡率最高的恶性肿瘤。全球每年新增乳腺癌病例约167.1万，死亡人数约52.2万[1]，并且近年来其发病率总体呈上升趋势。目前乳腺癌的分子诊疗发挥着至关重要的作用[2-4]。PVT1是一个长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)，其位于染色体8q24“基因沙漠”区。lncRNA PVT1被认为是癌症相关基因的结合区，WANG等[5]在肝细胞癌组织中发现PVT1高表达，并促进肝癌细胞系增殖、细胞循环及干细胞样改变，且PVT1的升高与较差的预后相关。YANG等[6]在非小细胞肺癌中发现PVT1高表达，并且体外癌细胞敲除PVT1后可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。目前关于lncRNA PVT1与乳腺癌的文献报道较少，本研究通过分析乳腺癌中lncRNA PVT1的表达水平及其与患者临床特征和总体生存率(overall survival，OS)间的关系，以期为乳腺癌的预后和诊疗提供新的有价值的生物学指标。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2010年1月～2014年12月期间安康市人民医院收治并经病理学检查确诊的乳腺癌患者148例为研究对象，患者均为女性，年龄28～83岁，平均年龄55.22±10.96岁。病理类型均为浸润性癌。手术治疗中留取乳腺癌组织和癌旁正常组织(距病灶2 cm)。本研究经我院伦理委员会批准通过，所有患者均自愿参加且签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 TRIzol Reagent购自美国Invitrogen公司，RNA反转录试剂盒和RT-PCR试剂盒均购自TAKARA公司，PCR引物的合成和设计由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，PCR仪为ABI Prism 7900HT型。

1.3 方法 采用TRIzol法提取乳腺癌组织及其相应癌旁正常组织中的总RNA，然后采用RNA反转录试剂盒和RT-PCR试剂盒将RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增。结果采用2-ΔΔCt法进行分析。GAPDH作为内参基因，如果癌组织中的表达量高于相应的癌旁组织则为高表达，反之是低表达。lncRNA PVT1的引物设计为：5’GTCTCCCTATGGAATGTAAG-3’，3’AGTGTCCTGGCAGTAAAAG-5’。GAPDH的引物设 计 为：5’GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3’，3’GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-5’’。

1.4 统计学分析 采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，采用配对t检验分析乳腺癌组织及其癌旁正常组织中lncRNAPVT1的相对表达量。分别采用χ2和独立样本t检验分析lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者临床特征之间的关系。采用logrank检验lncRNA PVT1表达水平对乳腺癌患者总体生存率的影响。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 lncRNA PVT1在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量 探究lncRNA PVT1在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量，结果显示lncRNA PVT1在乳腺癌组织（0.075）中的相对表达量显著高于癌旁正常组织（0.003），差异具有统计学意义(P=0.018 6)。

2.2 lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者临床特征的关系 见表1。根据2.1的结果，lncRNA PVT1高表达60例，lncRNA PVT1低表达88例。探究lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者临床特征的关系，结果显示lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者的年龄（P=0.015）、临床分期(P=0.006)、淋巴结转移(P＜0.001)、远端转移(P=0.021)和Her2(P=0.022)显著相关。

表1 lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者临床特征的关系[n(%)]

2.3 lncRNA PVT1表达水平对乳腺癌患者总体生存率的影响进一步分析lncRNA PVT1表达水平对乳腺癌患者总体生存率的影响，结果发现lncRNA PVT1低表达组患者的中位生存时间为70个月，而lncRNA PVT1高表达组患者的中位生存时间为54个月。lncRNA PVT1高表达组患者的OS显著低于lncRNA PVT1低表达组，并且其差异具有统计学意义(P=0.036)，见图1。

图1 lncRNA PVT1表达水平对乳腺癌患者总体生存率的影响

3 讨论

近年来，伴随着我国社会经济的飞速发展，加之人们生活方式的改变，恶性肿瘤的发病率和死亡率不断攀升，严重威胁着人们的健康。乳腺癌是全球女性中死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其严重威胁女性的健康，有分析预测指出乳腺癌发病仍将呈上升趋势。目前乳腺癌的早期诊断和分子治疗发挥着至关重要的作用。PVT1是一个lncRNA，lncRNA PVT1位于染色体8q24“基因沙漠”区。该沙漠区域涵盖了1.8万缺少转录活性的碱基，是基因变异的偏好位置且包含了与疾病相关的高危基因位点，曾经被认为是癌症相关基因的结合区。已有文献报道指出lncRNA PVT1在胃癌[7]、非小细胞肺癌、肝细胞癌、大肠癌[8]和结直肠癌[8]等中均有高表达，但是关于lncRNA PVT1与乳腺癌的研究相对较少。本研究通过分析乳腺癌中lncRNA PVT1的表达水平及其与患者临床特征和OS间的关系，以期为乳腺癌的预后和诊疗提供新的有价值的生物学指标[9-10]。结果显示lncRNA PVT1在乳腺癌组织中的相对表达量显著高于癌旁正常组织，其表达水平的高低与患者的年龄、临床分期、淋巴结转移、远端转移和Her2显著相关。并且lncRNA PVT1高表达组患者的OS显著降低。这就提示了lncRNA PVT1是一种可预测乳腺癌患者预后的有潜力的生物学指标。下一步本课题组将在此研究的基础上，进一步深入研究lncRNA PVT1在乳腺癌中的作用机制，为临床应用奠定更深入的理论研究基础。