T细胞型急性淋巴细胞白血病患者HOX11L2基因的表达及其临床意义

郭晓波，蔺 京，史 敏，杨 乐，张养民，杨瑞利

（1.西安交通大学附属西安市中心医院a.血液科；b.肿瘤科；c.输血科，西安 710004； 2.西安培华学院医学院，西安 710065；3.西安长安医院检验科，西安 710016）

急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia，ALL）是由于早期淋巴细胞在造血组织中异常增殖，并浸润各组织器官的恶性克隆性疾病，是儿童最常见的白血病类型之一，在成人发病率较低，其中80%为B细胞型ALL（B-ALL），约20%为T细胞型ALL（T-ALL）[1-3]，其临床表现主要为出血、贫血、发热和感染症状，以及肿瘤细胞对全身各组织器官的浸润引起的症状和肝、脾、淋巴结肿大等体征。近年来的研究表明，大约有20%儿童T-ALL由于t(5;14)(q35;q32)从而导致HOX11L2基因激活表达，此基因定位在1号染色体短臂3区2带，是最常见的T-ALL分子生物的异常，同时也是儿童T-ALL中最常见的特征性分子生物学改变之一[4-5]。

本研究通过对50例T-ALL患者临床资料的收集，分析HOX11L2基因与性别、年龄、白细胞数量、FAB分类以及生存率之间的关系，为临床在T-ALL的鉴别诊断、分型、预后以及白血病的微小残留检测中提供有力帮助。

1 材料和方法

1.1 研究对象 所有T-ALL患者均为2009年1月～2020年1月西安市中心医院血研所住院的患者，其中男性27例，年龄0～42岁，中位年龄19岁；女性23例，年龄0～38岁，中位年龄16岁。以上所有病例的诊断均符合世界卫生组织修订的急性淋巴细胞白血病的分类和诊断标准[6]。所有患者均经实时荧光定量PCR行分子生物学检测。

1.2 仪器与试剂 实时荧光定量PCR检测仪为美国伯乐CFX96产品，总RNA提取试剂为德国凯杰公司生产，HOX11L2基因检测试剂为厦门至善生物科技有限公司生产，瑞士-吉姆萨染色试剂盒为南京沐赛生物技术有限公司生产。血细胞分析仪采用迈瑞BC-5800，试剂为迈瑞公司配套试剂。

1.3 方法

1.3.1 HOX11L2基因检测：抽取 EDTA-K2抗凝的骨髓或者外周血2～5ml，按照RNA提取试剂说明书提取有核细胞RNA，并利用CFX96实时荧光定量PCR对HOX11L2基因进行定性检测。PCR仪循环参数：50℃×20min→95℃×10min；按95℃×15sec→65℃×1min（每个循环下降1℃）→72℃×1min,循环10次；再按95℃×20sec→56℃×32sec（4通道采光，FAM，HEX，ROX，CY5）→72℃×1min,循环40次。通过收集荧光信号的变化来实时检测PCR扩增反应过程中每一个循环扩增产物的变化量，进一步通过Ct值对起始模板进行定性分析。整个实验操作过程均严格按照标准的操作规程进行，同时做阳性、阴性对照和内参，结果均在室内质量控制范围。

1.3.2 形态学检查：骨髓及外周血涂片经瑞士-吉姆萨染色分类，并同时做过氧化物酶化学染色（myeloperoxidase,POX）。

1.3.3 白细胞计数：所有研究对象均采集2ml EDTA-K2抗凝外周静脉血，充分混匀，及时送检，采集后的标本均在2 h内进行测定，测定前再次颠倒充分混匀。研究样本检测前对血细胞仪采用标准血浆进行测定，要求结果在室内质量控制范围，方可进行研究样本测定。

1.3.4 患者其它临床资料：包括年龄、性别以及随访预后等指标通过病案室病例查阅收集，本研究均取得医院伦理委员会批准和患者家属知情同意。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0统计软件进行统计学数据分析。计数资料采用百分率（%）表示，组间的比较采用χ2检验，生存率之间的比较用Kaplan-Meier法和log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HOX11L2基因的表达在T-ALL患者不同临床特征中的比较 见表1。50例T-ALL患者，检测结果显示HOX11L2基因阳性患者12例（24%），HOX11L2基因阴性患者38例（76%）。阳性患者中，男性7例（58.3%），女性5例（41.7%），HOX11L2基因阳性患者在男女性别方面，差异无统计学意义（χ2=0.119，P=0.730）。表 达HOX11L2基因患者年龄在5～10岁间居多，表达率为58.3%，与其它年龄组之间比较，差异有统计学意义（χ2=11.577，P=0.018）。白细胞计数≤50×109/L的患者10例（83.3%），＞50×109/L的患者2例（16.7%），两组间比较差异有统计学意义（χ2=5.469，P=0.019）。FAB分类中，有75%的HOX11L2基因表达者为L1型，与L2，L3组相比较，差异有统计学意义（χ2=8.766，P=0.008）。

表1 HOX11L2基因在T-ALL患者不同临床特征中的表达情况[n（%）]

2.2 HOX11L2基因表达者与非表达者生存率比较 34例患者获随访资料，随访率为68.0%，中位随访时间为20（6～120）个月，死亡23例。12例HOX11L2基因表达者死亡8例，存活4例，中位生存期为8个月，1年生存率为14.4%。22例HOX11L2基因非表达者死亡19例，存活3例，中位生存期为11个月，1年、2年生存率分别为46.8%和8.9%，两组病例生存率进行比较，差异具有统计学意义（log-rankP=0.026）。

3 讨论

急性淋巴细胞白血病是血液肿瘤中最常见的疾病之一，约60%～75%的ALL患者可以被发现特征性的遗传学异常和分子生物学改变，比如染色体的增减所导致的低二倍体和高二倍体，染色体易位所形成的融合基因，以及引起抑癌基因失活和基因表达失控等[7]。血液肿瘤中分子生物的异常，可作为血液病诊断、分型的重要依据，也可作为微小残留病变的分子标志[8]。同源盒基因HOX11L2是表达于T-ALL的原癌基因，由t(5;14)(q35;q32)形成，可使T细胞发育停滞在某一阶段，从而导致T-ALL的发生[9-11]。还有研究表明T-ALL是未成熟T细胞或者祖细胞过度增殖所导致的恶性造血系统疾病，通常伴有白细胞数量增高、纵隔肿块，以及中枢神经系统浸润和预后差等特征[12]。

此研究结果中50例T-ALL患者HOX11L2基因表达患者为24%（12/50），HOX11L2基因在男女性别组间差异无统计学意义。HOX11L2基因表达患者主要分布在5～10岁年龄范围，1～5岁年龄范围次之，而且以L1型ALL为主，组间差异具有统计学意义。HOX11L2基因表达者白细胞计数以≤50×109/L为主，与＞50×109/L的患者比较，组间差异有统计学意义（χ2=5.469，P=0.019）。上述研究结果与西方研究者[13-14]的结果相似。

本研究显示HOX11L2基因表达者与非表达者在生存率方面比较，差异有统计学意义，这与国内研究者左文丽等[15]对HOX11L2基因表达对儿童T-ALL预后影响观察的结果相吻合。研究表明同源盒HOX11L2基因可能是通过甲基化的修饰来影响白血病其它基因的表达，从而来改变可能影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，进一步影响白血病的预后。也有一些研究者认为中枢神经系统白血病的发生与HOX11L2基因的表达存在相关性[2，16]。因此，HOX11L2基因的表达作为T-ALL MICI分型必不可少的分子生物学标记，已成为T-ALL诊断和治疗以及预后观察中的重要指标，其结果对于临床进行明确诊断、分型判断，以及预后具有非常重要的意义。

综上所述，T-ALL具有其特有的细胞与分子生物学特征，HOX11L2基因主要表达于T-ALL，并且以L1型儿童T-ALL为主，HOX11L2基因表达可能是T-ALL独立不良预后因素。临床上通过HOX11L2基因检测结果与常规细胞形态学、遗传学、荧光原位杂交等技术检测结果相结合，将对急性淋巴细胞白血病的鉴别诊断、分型、预后及微小残留病（MRD）检测等具有十分重要的意义。