血清糖化清蛋白检测方法学评价、临床性能验证及其在糖尿病监测的应用研究

赵淑珍，郑锦仁，陈 媛，茅夏铭（乌鲁木齐市中医医院检验科，乌鲁木齐 830000）

糖尿病（diabetes mellius,DM）是一种以血糖升高为特征的代谢紊乱性疾病，长期高血糖，可引起血管、肾、眼组织等系统器官损伤及功能障碍，严重危害患者健康。有效控制血糖水平是预防DM并发症的关键措施[1]。《中国公民健康素养66条》中专门提出要关注血糖变化，改变糖尿病危险因素，糖尿病患者要加强自我健康管理，血糖监测是糖尿病管理中的重要组成部分，目前临床上血糖监测方法有空腹血糖测定，反映2～3周平均血糖水平的糖化清蛋白（glycaed Albumin,GA）及2～3个月平均血糖水平的糖化血红蛋白（glycaled hemolobin,HbA1c）检测等[2]。

HbA1c是反映长期血糖控制水平的金标准[3]；而GA是反映近期血糖的控制水平，在2～3周总体血糖水平的评估、初步诊断糖尿病患者及近期降糖疗效评价等方面较HbA1c更有优势。本文旨在探讨GA性能评价与HbA1c相关性及在糖尿病管理中的应用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取乌鲁木齐市中医医院2018年11月～2019年11月收治的首次确诊156例DM患者为观察组,其中男性86例，女性70例，年龄31～75岁，平均年龄52.1±6岁。纳入标准：糖尿病所有患者均符合1999年世界卫生组织（WHO）诊断标准[4]：①具有糖尿病症状，且空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1mmol/L；②无糖尿病症状者，空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1mmol/L，重复测定1次，无改变者；③无糖尿病症状者，空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1 mmol/L，并且糖耐量试验2h血糖≥11.1mmol/L三者中任意2条标准或符合同一标准2次者可诊断为糖尿病。排除条件：妊娠、贫血、肝脏疾病及甲状腺疾病患者、应用激素等影响因素。同时选取我院体检中心同期健康体检者150例作为对照组，纳入标准：①无糖尿病病史；②无高血压、肾脏疾病、心脑血管疾病；③神经系统疾病；④无贫血疾病。其中男性80例，女性70例，年龄29～70岁，平均年龄51±5岁。

1.2 试剂和仪器

1.2.1 试剂：GA试剂盒、标准品、质控品均使用迈克生物公司产品，批号分别为2019042101，2019040103，2019032402。血清清蛋白试剂盒（北京九强生物技术股份有限公司，批号19-0311）。糖化血红蛋白试剂使用伯乐公司产品，洗脱缓冲液A、洗脱缓冲液B、清洗液批号分别为：64296650，64293406，64294501。

1.2.2 仪器：贝克曼AU5800全自动生化分析仪。伯乐D-20高效液相色谱仪。

1.3 方法

1.3.1 采集观察组和对照组血清进行GA（胴胺氧化酶法）与清蛋白（Albumin，Alb溴甲酚绿法）两项目测定，将血清GA浓度除以血清Alb浓度，计算出GA（%），采集观察组156例DM患者血浆进行HbA1c测定（高效液相色谱法）。并将测定的GA和HbA1c浓度进行相关性分析。

1.3.2 对酶法测定GA的精密度、准确度、线性范围进行性能验证参照文献[4]方法进行。

1.3.2.1 精密度验证:精密度包括批内和批间精密度，精密度使用变异系数来表示。批内精密度：将3个浓度的样品同时测定，连续检测20次；使用统计描述程序计算均值（x）、标准差（s）和变异系数（CV）；当CV值小于1/4允许总误差时结果可接受。批间精密度：每天同一时间检测1次3个浓度的评价标本，测定20天，同批内精密度方法计算其x，s及CV；以批间CV小于1/3允许总误差为结果可接受。

1.3.2.2 精密度验证：它的性能以误差的大小来评价，通过测定已知浓度的校准品，计算校准品的相对偏倚。计算公式为相对偏倚=(靶值-测定值)/靶值×100%，如果相对偏倚在允许的偏倚范围内结果可接受。

1.3.3.3 线性范围的验证：选取1份高浓度标本（H）和低浓度标本（L），其浓度接近厂家提供的测定上限与下限，按照5L，4L+1H，3L+2H，2L+3H，1L+4H和5H的比例混合成6个不同浓度的样品。把实测值（Y）与理论值（X）进行比较，使用Y=bX+a计算其回归方程及线性范围。相关系数（r）、b值及截距a要符合下列条件，r≥0.975,b值范围在1±0.05内,截距a要小于检测上限的5%。

1.3.3.4 临床的性能验证：临床的性能验证能力使用灵敏度和特异度两个指标来评价。灵敏度就是由金标准明确诊断为DM的观察组内所检测出的阳性病例数比率（%），也就是实验诊断的真阳性率。灵敏度=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100%。

1.4 统计学分析 所有原始数据采用SPSS17.0统计学软件处理数据，计量资料使用均值±标准差（±s）表示，观察组与对照组数据之间比较使用两独立样本t检验；计数资料采用百分率（%）表示，两组间的比较进行卡方（χ2）检验。用Pearsom进行指标间相关性分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。指标诊断价值的评价采用ROC曲线分析，检验水准设为0.05。

2 结果

2.1 方法学性能验证

2.1.1 精密度验证：低、中及高值3个不同浓度的批内与批间精密度数值均低于CLIA’88分析质量规定的1/3允许误差时，两者精密度均为可接受。见表1。

表1 GA糖化清蛋白精密度

2.1.2 准确度验证：测定与当前检测系统使用校准的校准品，重复测定3次，结果分别为497.21，498.46和496.62μmol/L，其均值为497.43μmol/L，理论值（厂家给出的靶值）为490μmol/L，计算出的相对偏倚数值为1.51%,该值小于1.67%〔CLIA’88分析质量规定所要求的低于1/3允许误差（5%）〕，结果可以接受。

2.1.3 线性范围：取足够量的GA低值（L）与高值标本（H）各1份，浓度含量分别为125μmol/L和935μmol/L。按照1.3.3.3线性范围的验证方法，混合成6个不同浓度的样本，编号分别标记为1，2，3，4，5，6。实际测定值Y为纵坐标，理论值X作为横坐标做散点图，并且计算回归方程式Y=bX+a中b及a值，得出线性方程为Y=1.001X+1.120，r=0.989 0，说明GA在125～935μmol/L范围内呈良好线性。见表2及图1。

表2 糖化清蛋白线性范围评价

图1 GA线性曲线图

2.1.4 临床的性能验证：检测观察组与对照组的GA浓度，当GA＞16%时为阳性。GA的DM患者灵敏度、特异度分别为91.02%和95.1%。

2.2 DM患者GA与HbA1c结果比对

2.2.1 GA与HbA1c阳性率分析：见表3。GA＞16%（参考区间上限）和HbA1c＞6.5%（参考区间上限）判定为阳性。在156例确诊为糖尿病的患者中，GA超过参考区间上限的阳性142例（91.2%）,HbA1c超过参考区间上限的阳性149例(95.51%)。GA和HbA1c的总一致性为90.38%，经配对资料χ2检验，P=1.060,说明两种方法差异无统计学意义。

表3 GA与HbA1c一致性分析[n=156,n（%）]

2.2.2 GA和HbA1c检测结果相关性分析:以GA为纵坐标,以HbA1c为横坐标,做散点图,GA和HbA1c回归方程为Y=1.04X+1.51，r=0.994 1，P＜0.01。见图2。

2.3 观察组与对照组测定值比较：见表4。观察组156例糖尿病人GA，HbA1c的测定结果明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。

图2 GA和HbA1c相关性

表4 观察组与对照组GA（%），HbA1c测定 结果比较（±s）

表4 观察组与对照组GA（%），HbA1c测定 结果比较（±s）

指标 观察组（n=156）对照组(n=150) t P FPG（mmol/L） 9.11±2.8 4.92±1.13 11.01 0.000 GA(%) 26.13±4.91 11.56±1.69 17.31 0.000 HbA1c(%) 8.31±3.12 5.01±1.52 9.59 0.000

2.4 GA和DM的诊断价值 ROC曲线显示GA诊断DM的曲线下面积（AUC）为0.919，敏感度为91.02%，特异度为95.01%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图3。

图3 GA对GM的ROC曲线

3 讨论

3.1 血糖监测是糖尿病（DM）管理的重要组成部分，在DM的诊断和治疗中具有重要地位。帮助评估DM患者代谢紊乱的程度、制订合理除糖方案、降低DM引起并发症风险、同时反映疗效并指导治疗方案的调整，因此控制血糖水平显得尤为重要。HbA1c是反映血糖水平长期控制的金标准，表示2～3个月的平均血糖水平[6]。而GA是反映2～3周平均血糖水平，它反映近期血糖控制水平，是对HbA1c这个长期控制指标的有效补充。GA/HbA1c比值现在也作为了血糖控制的一个新指标，它不仅反映平均血糖水平，而且与血糖波动呈明显的相关性[7]。上海第六人民医院包玉倩[8]团队近期发现，中心性肥胖人群GA和GA/HbA1c比值低于非肥胖人群，GA和GA/HbA1c比值与中心性肥胖负相关，然而相关的机制尚未明确。有观点认为肥胖属于慢性低度炎症性疾病，而炎症会降低清蛋白生成率，增加其分解代谢率，进而导致肥胖人群GA水平下降[6]。

3.2 GA是在糖化血清蛋白（GSP）基础上进行的检测，GSP是测定蛋白中糖化物的绝对值，GA则是测定清蛋白的糖化率，故不受血清中蛋白浓度、胆红素、妊娠、贫血及低分子物质等因素的影响[9]，能反映体内真实的血糖水平，可作为近期血糖水平的监测指标，针对特殊人群的血糖评估时具有显著优势[10]。患有糖尿病或GDM的孕妇存在缺铁性贫血，导致HbA1c升高，但不影响GA，因此GA被认为是妊娠期血糖控制的最佳指标[11]。近期有研究还证实GA对糖尿病并发症之一的视网膜病变具有更高的诊断效能[12]。

3.3 本研究对GA进行了方法学评价及临床的性能验证，对酶法测定GA的批内精密度、批间精密度、准确度、线性范围进行验证均符合要求，保证了测定结果的稳定性和准确性。本研究证实观察组GA（%）和HbA1c阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。对GA和HbA1c进行相关分析得出，GA与HbA1c浓度水平呈强正相关性。本实验结果说明观察组与正常对照组相比，GA与HbA1c浓度水平明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。通过分析ROC曲线表明GA（%）对GM的诊断具有较高的诊断价值。综上所述，GA将成为集糖尿病筛查、诊断、监测、预后为一体的综合评价指标。简言之，GA的未来与展望是一个具有发展潜力的血糖监测指标，GA正不断丰富着我们的认知并揭示许多新现象[13]。