1例先天性中性粒细胞减少症患儿产生类抗-Ce合并类抗-A抗体的血清学研究与交叉配血策略*

瞿 珍 包安裕 许婷婷 沈 钢 何鸣镝，△

Rh血型系统抗体是临床输血中仅次于ABO血型系统的常见抗体，若配血不合有潜在诱发输血反应的可能[1]。不规则抗体筛查中如检出同种抗体应对其相应抗原进行检测验证，以确定其特异性，若产生的抗体与其抗原一致，称之为产生了同种特异性自身抗体，简称类抗体。类抗体既具有选择性的针对相应红细胞上的血型抗原、类似于同种抗体的性质，又有针对自身红细胞血型抗原的自身抗体的性质。类抗体是影响交叉配血不合的原因之一，在红细胞输注时需慎重选择[2]。一般多次输血后，患者体内会产生一种类抗体，本报告发现一例移植前后多次输血的低龄患者产生了两种类抗体，类抗-A抗体和类抗-Ce抗体，临床上较为罕见，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

患者，男性，1岁7月，血型：A，Rh(D)阳性。临床诊断：先天性中性粒细胞减少症；A，Rh(D)阳性型脐带血干细胞移植术后6个月。输血史：移植前后多次输注红细胞；药物史：免疫抑制剂环孢素。因患者之前多次输注红细胞效果不理想，并且此次交叉配血抗体筛查发现阳性，遂送武汉血液中心进行进一步鉴定。

1.2 仪器与试剂

抗-A(批号：102154)、抗-B(批号：204150)为Dominion公司产品；A细胞(批号：190313)、B细胞(批号：190313)为本中心自制，O细胞(批号：197007)、抗-C(批号：183001)、抗-c( 批号：183101)、抗-E(批号：183202)、抗-e(批号：20183302) 、多特异性抗人球蛋白试剂多抗IgG-C3d (批号：175002)、单抗IgG(批号：185101) 、单抗-C3d(批号：185201)为上海血液生物公司产品；聚凝胺试剂 (批号：118071) 为Baso公司产品；谱细胞(批号：8000255521)为Sanquin公司产品；抗人球蛋白卡(批号：50531.31.14)为Bio-rad公司产品。KUBOTA(KA-2200)离心机为日本久保田公司产品。

1.3 抗体鉴定

ABO、Rh血型、直接抗人球蛋白试验采用盐水介质法检测；血清抗体鉴定同时采用盐水介质法和微柱凝胶介质法；红细胞放散液抗体鉴定用微柱凝胶介质法；血清、红细胞放散液交叉配血试验同时采用盐水、凝聚胺、微柱凝胶介质法检测。以上检测的步骤流程均按照临床输血技术规范进行。

1.4 输血后疗效评价

输血开始至输血6h后密切关注患儿各项体征，判断有无发生输血反应。输血前及输血后24h检测患儿血红蛋白含量评价输血效果。

2 结 果

2.1 ABO血型鉴定及Rh表型

患者 ABO 表型：正定型为A型，反定型中A细胞和自细胞呈现弱凝集，见表1。患者Rh表型为CCDee，见表2。

表1 患者ABO血型鉴定

表2 患者Rh血型系统分型

2.2 直接抗人球蛋白试验

患儿血清直接抗人球蛋白试验结果显示，该患儿多抗IgG-C3d阳性，单抗IgG阳性，单抗C3d阴性，见表3。

表3 患儿血清直接抗人球蛋白试验结果

2.3 血清和红细胞放散液抗体鉴定

患者血清抗体盐水介质法鉴定为阴性，排除IgM类不规则抗体。1-16号为Sanquin公司谱细胞，覆盖范围为谱细胞内Rh、Kell、Duffy、Kidd、lewis、P、MNS、Luther血型系统的抗体检测。1-16号Sanqiuin谱细胞在微柱凝胶介质下，仅3号、6号、15号细胞阴性，呈阳性反应的细胞1、2、5、11、13凝集强度为3+，而4、7、8、9、10、14、16号凝集强度为1+，12号为弱阳性，在反应强度上存在明显的强弱差异，这提示患者血清中可能存在类抗-Ce抗体。患者红细胞放散液鉴定反应结果进一步证实患者红细胞上致敏的IgG抗体为类抗-C抗体。见表4。

表4 患者血清及红细胞放散液抗体鉴定结果

2.4 交叉配血试验

将患者血清和红细胞放散液分别与表型为ccDEE的A型悬浮红细胞和O型洗涤红细胞交叉配血。表5、表6结果显示，将患者血液与3袋表型为ccDEE的A型悬浮红细胞交叉配血，患者血清主侧在盐水介质、凝聚胺介质和微柱凝胶介质下均有凝集，红细胞放散液主侧在盐水介质无凝集，在凝聚胺介质和微柱凝胶介质下均有凝集；而与表型为ccDEE的O型洗涤红细胞交叉配血，患者血清主侧在盐水、凝聚胺和微柱凝胶介质下均无凝集。

表5 患者血清、红细胞放散液与A型悬浮红细胞主侧交叉配血试验

表6 患者血清、红细胞放散液与O型洗涤红细胞主侧交叉配血试验

2.5 输血后疗效跟踪评价

经临床随访，该患儿输注1 U经交叉配血合格后的O型洗涤红细胞后，血红蛋白浓度由输血前的88g/L提升到96g/L，未出现输血不良反应。

3 讨 论

在临床输血患者的血型血清学检测中，同种抗体和自身抗体是导致交叉配血不合较常见的原因。但实际工作中也会遇到兼有同种抗体和自身抗体两种特性的类同种自身抗体，简称类抗体，该类抗体既具有选择性的针对相应红细胞上血型抗原的类似于同种抗体的性质，又有针对自身红细胞抗原的自身抗体的性质[3]。类抗体的产生与相应抗原存在与否无关，在以往的研究报道中有因妊娠、输血或免疫系统发生紊乱而产生的，也有由造血干细胞移植后免疫介导的，类抗体产生的机理目前尚不明确[4]。目前尚未见关于中性粒细胞减少症患者产生两种以上类抗体引起交叉配血不合的报道，本文报告的病例对临床输血工作具有重要的参考价值，值得深入探索。

本研究中该患者多次输注红细胞，在低年龄阶段接受干细胞移植术，这些都可能是导致产生类抗体的相关因素[5]。本文对患者的血清进行了卡式抗人球蛋白的抗体鉴定，发现除自身抗体阳性外，谱细胞呈现明显的阴阳反应结果，且有明显强弱差异，初步显示患者血清中可能存在抗-Ce抗体，红细胞放散液抗体鉴定结果提示，患者红细胞上致敏的IgG抗体为类抗-C抗体，这可能是由于抗-C抗体与红细胞的亲和能力强于抗-e抗体。

交叉配血试验中患者血清与随机3个A型(ccDEE)供者悬浮红细胞在盐水、凝聚胺、微柱凝胶卡介质下均有凝集，这与血型鉴定反定型A细胞存在弱凝集结果一致，推测患者在产生类抗-Ce同时产生类抗-A抗体；患者红细胞放散液与随机3个A型(ccDEE)供者红细胞在盐水、凝聚胺、微柱凝胶卡介质下均有凝集，进一步佐证患者在产生类抗-Ce同时产生类抗-A抗体，并且致敏了红细胞。但是，患者血清和红细胞放散液在与O型(ccDEE)供者洗涤红细胞在盐水、凝聚胺、微柱凝胶卡介质下均无凝集，这进一步证实该患儿产生了抗-A类抗体。这类同时合并多系统类抗体的情况并不常见，同时给交叉配血带来困难。

对于输血后产生类抗体的血液病患者，往往需要一段时间内频繁输血治疗，如何筛选合适的血液制品值得注意，这时红细胞的输注以相容性输注为原则，而不是以相同抗原表型作为选择红细胞的依据[6]。有研究表明避开类抗体特异性的红细胞输注，而不考虑患者自身相应血型，可以明显延长该红细胞的体内存活时间[7]。在本病例中为患者选择O型(ccDEE)洗涤红细胞进行输注，密切关注患者输血过程和健康状态，输注后回访未发生任何输血不良反应，且输注后血红蛋白浓度增高了7g/L。有研究提示类抗体在体内衰减较快，建议等待类抗体减弱或消失后选择同型红细胞输注[8]。本研究中由于患者血液标本量不足，并未进行抗体滴度检测，在后续的工作中需要完善该检测，对于需要多次输血并且已产生类抗体的患者，通过制作个性化的量表进行抗体滴度比较观察，将为患者提供精准的临床输血治疗方案。

本文共同第一作者简介：

瞿 珍(1981-)，女，汉族，硕士，主治医师，研究方向：血液免疫学与疑难输血

包安裕(1981-)，男，汉族，博士，副主任医师，研究方向：临床化学检验