不同方式核黄素-蓝光交联对兔眼巩膜组织生物力学和成纤维细胞影响分析

韩宝雁，米强，贾冠美

（1.廊坊爱尔眼科医院，河北 冀州 065000；2.定州市人民医院，河北 定州 065000；3.保定市第二中心医院，河北 涿州 065000）

0 引言

近视是全球范围内都非常常见的一种眼部疾病，该疾病所产生的危害性会对患者的日常生活、工作、学习等产生诸多不便[1]。近年来，随着电子产品的广泛应用，不合理的使用方式使得越来越多的人患有近视，而且近视发生率逐渐年轻化。随着临床研究不断发展，国外的一些学者发现通过核黄素-A 波紫外线（UVA）交联法，可以增加角膜基质的机械强度，从而阻止圆锥角膜的病理进程，成为新型治疗圆锥角膜的非手术方法[2]。

当前国际上通用的兔眼虹膜交联术普遍采取370 nm 的A 波紫外线，照射时间30 min，功率为3 mW/cm2。本次研究中，对两种总能量相同但是方式不同的照射方式进行分析，以了解不同方式核黄素-蓝光交联对兔眼巩膜组织生物力学以及成纤维细胞的影响，以下是详细内容。

1 资料与方法

1.1 实验材料

取新西兰大白兔24 只作为研究样本，研究时间为：2019 年1 月到2019 年5 月。所有大白兔均无眼疾，而且雌雄均有，应用随机分组法将24 例大白兔分组：A、B 组，每组大白兔12 只。将每组左眼视为实验眼、右眼视为对照眼。

1.2 方法

2组均使用波长为370 nm的紫外线灯进行照射，A 组的照射时间为30 分钟，功率为3.0 mW/cm2，B组的照射时间为9 分钟，功率为10.0 mW/cm2。具体的方法步骤如下：①术前麻醉：向实验兔腹腔内注射水合氯醛合剂3 mL/kg。②将实验大白兔置于实验台，摆好头部位置，使用开睑器开睑，加入丁卡因眼液（5 mg+生理盐水注射液5 mL）[3]。③充分分离球结膜与筋膜，并在上方角膜缘使用6-0 缝线做一条牵引线，拉向颞下方，暴露鼻上方巩膜后，使用薄棉片覆盖角膜，并在巩膜暴露位置滴加0.1%核黄素5-磷酸钠溶液，浸润5 min。④照射时间隔2 min 滴加一次0.1% 5-磷酸核黄素溶液，保证巩膜湿润。⑤去除牵引缝线，让筋膜、结膜复位，滴加氯霉眼药水，涂抹红霉素眼膏。

1.3 观察指标

分别于术后早期1 d、7 d、30 d，耳缘静脉注射空气处死兔子，每次处死4 只。在无菌条件下立即摘除实验眼球及对照眼球，实验眼球摘除前用6/0无菌缝线做交联照射部位标记。取实验眼交联部位及对照眼相应部位的巩膜组织提取并培养巩膜成纤维细胞，用免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞后，进行细胞微管吸吮实验检测交联术后早期不同时间巩膜成纤维细胞生物力学变化。

1.4 统计学处理

所有数据均进行准确核对和录入，采用SPSS 22.0 软件分析数据。计量资料使用t检验；计数资料使用χ2检验。P＜0.05 为对比差异有统计学意义。

2 结果

两组大白兔眼巩膜生物力学参数均在治疗后提高，但是1、7、30 d 大白兔眼巩膜生物学力度参数比较并无统计学意义：P＞0.05，详细见表1。

表1 比较A、B 组大白兔眼巩膜生物力学参数（±s）

注：*表示与A 组比较：P＞0.05。

经免疫细胞化学法鉴定显示虹膜成纤维细胞Vimentin 染色呈阳性，而Desmin 染色、Keratin、S-100 染色均为阴性。

3 讨论

目前临床上治疗高度近视的主要方法是采取传统的巩膜加固术进行治疗，这种治疗方式往往会对患者产生较大的风险，而且部分患者术后可能还会出现并发症。针对近视非手术治疗方式，有关学者也作出了大量的实验和研究，利用动物试验进行巩膜胶原交联，证实了该治疗方式能够增加巩膜生物力学性能，为高度近患者的治疗提供新的思路[4]。

如今，诸多研究表明胶原交联法能够增强生物组织力学强度，随着核黄素A-波紫外线的角膜胶原交联治疗圆锥角膜研究不断的深入，胶原交联法逐渐被证实具有较高的安全性和有效性。因为巩膜与角膜结构相似，因此采取该方法对巩膜胶原进行交联以治疗高度近视，能够成为新的研究方向[5-6]。

从在本次研究中，可以看出巩膜交联能够对各组功能成纤维细胞的生物力学特性进行改变，表明了巩膜成纤维细胞的力学特点改变必然会对其形态、结构、组成功能产生影响。

总之不同方式的核黄素-蓝光交联能够提高兔眼巩膜组织纤维生物力学性。