HPLC 同时测定食品中7 种添加剂

2020-12-02马小涵淄博市疾病预防控制中心

食品安全导刊 2020年36期

□ 高慧汪洋邢燕马小涵朱莎淄博市疾病预防控制中心

糖精钠、阿斯巴甜、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、咖啡因也是常用的添加剂，上述7 种添加剂在诸多产品中都有使用。上述7 种添加剂的测定均有国家标准方法，但较为分散，且每种添加剂的前处理方法均不一致，需分别测定，使得检测过程繁琐。本研究建立的方法将各项目的前处理方法和检测条件整合在一起，可以使用同一个方法检测7种添加剂，以达到高效、简便、快速测定的目的。

1 实验方法

1.1 材料与试剂

安赛蜜标准溶液、糖精钠标准溶液、苯甲酸标准溶液、山梨酸标准溶液、脱氢乙酸标准溶液、咖啡因标准溶液、阿斯巴甜标准溶液浓度均为1 000 μg/mL，北京海岸鸿蒙有限公司。

1.2 仪器与设备

Waters e2695 高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，冷冻高速离心机，涡旋振荡器。

1.3 方法

1.3.1 样品处理

1.3.1.1 液体样品

准确称取1.000 g 于15 mL 离心管中，加入0.1 mol/L 硫酸锌溶液5 mL、0.2 mol/L 氨水5 mL，涡旋混匀后，超声5 min，以5 000 r/min 离心5 min。将上清液过滤到25 mL 容量瓶中，沉淀加色谱流动相洗涤2 次，每次6 mL，洗涤液也过滤到同一容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀后，离心取上清液经0.22 μm 滤膜过滤后进样测定。

1.3.1.2 固体样品

准确称取2.000 g，加水10 mL，涡旋混匀后同液体样品处理。

1.3.2 仪器条件

色谱柱：Waters X—Bridge C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇+磷酸盐缓冲溶液（0.1 mol/L 磷酸二氢铵溶液用氨水调节至pH=5）=18+82，流速1.0 mL/min；柱温：30 min；测定波长（nm）：糖精钠210、安赛蜜225、阿斯巴甜210、苯甲酸222、山梨酸250、脱氢乙酸228与咖啡因272。

1.3.3 标准系列溶液

配制7 种添加剂浓度在1.00 ～50.0 μg/mL 的标准系列溶液，按照上述色谱条件进行测定，以保留时间和二极管阵列的响应值建立校正曲线。

2 结果与讨论

2.1 前处理方法的优化

本研究分别比较了亚铁氰化钾和乙酸锌、三氯乙酸、硫酸锌和氨水3种试剂沉淀蛋白质的效果，结果表明使用传统的亚铁氰化钾和乙酸锌、三氯乙酸分别为沉淀蛋白质试剂时，其在210 nm 处产生的紫外吸收较为明显，出峰时间跟目标物保留时间一致或较接近，干扰目标物的测定，故选用了硫酸锌和氨水作为沉淀蛋白质试剂，不会干扰目标物的测定。

2.2 色谱条件的优化

2.2.1 pH 的优化

pH 是影响目标物分离的主要条件，本研究分析的7 种目标物，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸属于弱酸性物质，糖精钠、安赛蜜属于强酸性物质，咖啡因属于弱碱性物质，阿斯巴甜属于两性物质，随着流动相pH 的变化，其保留时间也会随之发生改变。本实验比较了pH 在4 ～6 时的检测效果，pH 增大时，相关盐的比例变高，保留时间变小，分离效果不好；pH 变小时，目标物以羧酸形式为主，因此保留时间会增大，有些目标物会拖尾。研究表明，在pH 为5 时7 种目标物的分离效果最为理想。

2.2.2 检测波长的选择

用二极管阵列检测器进行定性检测，找出7 种目标物的最大吸收波长，其中糖精钠和阿斯巴甜的最大吸收波长都在较低波段，易受到样品基质和试剂背景吸收的影响，故选用了210 nm 作为其测定波长，虽然灵敏度有所下降，但消除了干扰，满足检测灵敏度的需要。

2.2.3 标准曲线的绘制与加标回收实验

按照1.3.3 方法绘制标准曲线，其相关系数均在0.999 5 以上，检出限均小于0.1 μg/mL。分别进行了0.5、1.0、2.0 g/kg 3 个添加水平的加标回收实验，其回收率在95.5%～101.2%，以3 倍信噪比计算，检出限均小于0.1 μg/mL，结果满意。