不同产地川泽泻质量比较研究

代仕梅 李华仙 高宇明 何 琴 吴秀清

四川省资阳市食品药品检验检测中心,四川 资阳 641399

泽泻为泽泻科植物泽泻Alismaorientale(Sam.)Juzep．的干燥块茎，其药材呈类球形、椭圆形或卵圆形，具有利水渗湿、泄热、化浊降脂之功效[1]，临床上可用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高脂血症等。化学研究表明，泽泻的化学成分主要为三萜和倍半萜，其中三萜为主要活性成分[2-3]。药理学研究表明，泽泻的水浸物、醇浸物及三萜类成分，如泽泻醇A、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B等具有利尿[4]、抗结石[4]、降血糖[6]、降血脂[7]和抗氧化损伤[8]等多种作用。由于产地泽泻的栽培技术及生态环境不同，药材生长性及内在品质也有差异[9]。泽泻在温带、亚热带地区均可生长，被广泛种植于江西、广东、广西、福建、四川等地，是川、闽的道地药材[10]。目前关于全国各地泽泻药材对比的报道较多[11]，四川省内不同产地泽泻药材质量对比的较少。为此，本研究收集了34批四川的4个主要泽泻产地的栽培泽泻样品，对其水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰泽泻醇B的含量进行分析，以评价不同产地川泽泻的质量，为保证川泽泻药材质量稳定提供技术依据。

1 仪器与试剂试药

1.1 仪器 MS205DU电子分析天平(梅特勒托利多)；高效液相色谱仪(Agilent Technologies 1260 Infinity)；电热鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；紫外-可见分光光度计(上海汗诺仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(北京中兴伟业世纪仪器有限公司)。

1.2 试剂试药 23-乙酰泽泻醇B对照品(中国食品药品检定研究院111846-201705)，乙腈、甲醇为色谱纯(Fisher公司)，水为注射用水，其他为分析纯。

1.3 药材 药材采集于四川省内眉山、乐山2个产地共34批，由资阳市食品药品检验检测中心吴秀清主任中药师鉴定为泽泻Alismaorientale(Sam.)Juzep．，采样信息见表1。

表1 不同产地泽泻基本信息

2 方法

2.1 水分、灰分、浸出物测定方法 参照《中国药典》(2015年版)四部通则0832项下第二法测定各样品的水分[12]103；参照《中国药典》(2015年版)四部通则2302项下的灰分测定法测定各样品的灰分含量[12]204；参照《中国药典》(2015年版四部通则2201) 项下的醇溶性浸出物测定法热浸法以乙醇为溶剂测定醇溶性浸出物含量[12]202。

2.2 含量测定方法 参照《中国药典》(2015年版)一部中泽泻含量测定项下测定法测定23-乙酰泽泻醇B的含量[1]。

2.2.1 对照品储备液制备 取23-乙酰泽泻醇B 对照品适量，加乙腈制成每1 mL含100 μg的储备液。

2.2.2 供试品溶液制备 取泽泻粉末(过五号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 选用XselectR Hss T3 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，乙腈-水(73∶27)为流动相，等度洗脱；流速1.0 mL·min-1，检测波长208 nm，柱温：30 ℃，进样量10 μL。23-乙酰泽泻醇B含量测定图谱如图1所示。

2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取取2.2.1项下储备液1、1、5、8、10 mL，置于100、10、10、10、10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，配制成浓度为1 μg/mL、10 μg/mL、50μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的系列标准溶液，按上述色谱条件测定，以峰面积与对照品浓度进行线性回归，得回归方程为Y=0.4219x+0.6691，相关系数r=0.9997，线性范围：0.99 ～98.80 μg/mL，表明对照品与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度考察 精密吸取23-乙酰泽泻醇B对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积积分值，计算23-乙酰泽泻醇B峰面积的RSD为0.20%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性实验 取1号泽泻样品按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照2.2.3项下的方法，分别在在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h进样测定，计算23-乙酰泽泻醇B峰面积的RSD为1.34%，表明样品溶液在8h内稳定。

1.23-乙酰泽泻醇B；A.对照品溶液；B.样品溶液图1 23-乙酰泽泻醇B含量测定图谱

2.2.7 重复性实验 取1号泽泻药材样品6份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，采用2.2.3项下液相色谱条件，分别进样测定，计算23-乙酰泽泻醇B含量，分别为：0.2508%、0.2493%、0.2511%、0.2499%、0.2516%、0.2480%，RSD为0.53%，表明该方法的重复性良好。

2.2.8 加标回收率实验 精密称取1号泽泻药材样品6份，每份约0.25 g，分别精密加入23-乙酰泽泻醇B标准储备溶液5.80 mL，再精密加入乙腈24.20 mL，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，用2.2.3项下液相色谱条件，分别进样测定，计算23-乙酰泽泻醇B含量，结果23-乙酰泽泻醇B平均回收率为100.77%，RSD为1.90%，表明该方法准确可靠，可用于泽泻的含量测定。加标回收率结果见表2。

表2 泽泻加标回收率实验 (n=6)

3 结果与分析

3.1 结果与分析 不同产地泽泻水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰泽泻醇B含量结果见表3。

《中国药典》(2015年版)一部规定泽泻药材水分不得过14.0%，灰分不得过5.0%，醇溶性浸出物不得少于10.0%，23-乙酰泽泻醇B不得少于0.050%[15]。各产地泽泻中水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰泽泻醇B含量如表2。结果表明，四川省内各产区泽泻的灰分和23-乙酰泽泻醇B含量无显著差异，水分和醇溶性浸出物差异较大，水分范围为7.3%～12.3%，灰分范围为2.2%～3.3%，醇溶性浸出物含量范围为13.6%～28.4%，23-乙酰泽泻醇B含量范围为0.209%～0.334%，其主要含量均达到药典标准，且各产区泽泻的醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B均远远高于药典标准要求。

表3 34批泽泻水分、灰分、浸出物、23-乙酰泽泻醇B含量

图2 泽泻醇溶性浸出物含量比较图

将34批泽泻醇溶性浸出物含量和23-乙酰泽泻醇B含量结果导入SPSS17.0软件，进行简单分布散点分析，结果如图2、图3所示。从图2和图3可以看出，眉山东坡区白马镇样品醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B含量较低；乐山夹江甘霖镇样品浸出物含量较高，但23-乙酰泽泻醇B含量较低；夹江县产泽泻整体23-乙酰泽泻醇B含量低于眉山彭山区和乐山五通桥区。

图3 泽泻23乙酰泽泻醇B含量比较图

3.2 川泽泻浸出物含量和指标成分含量聚类分析 采用SPSS17.0软件中K-均值聚类法，结合34批川泽泻药材中醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B含量进行聚类分析，结果见表4。根据聚类分析结果，可把药材分为2组，第1组包括1～9、11～23、25～28、30、32～34号样品，第2组为10、24、29、31号样品，主要包括彭山谢家镇、夹江三洞镇、夹江黄土镇、夹江甘霖镇。

表4 34批川泽泻醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B含量的聚类分析距离

续表4

4 讨论

本次研究分别对四川眉山东坡区、眉山彭州区、乐山夹江县、乐山五通桥区所产泽泻中水分、灰分、醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B含量进行测定。研究结果显示，按药典标准评判，本文所检测四川省4个产区川泽泻整体质量水平较高，仅23-乙酰泽泻醇B含量最低者也为药典标准的4倍左右。同时也可以发现，不同产地样品质量存在较大差异，其中眉山市彭州区泽泻的灰分低于其他产区，眉山市东坡区泽泻水分低于其他产区，眉山东坡区白马镇样品醇溶性浸出物和23-乙酰泽泻醇B含量较低；乐山夹江甘霖镇样品浸出物含量较高，但23-乙酰泽泻醇B含量较低；夹江县产泽泻整体23-乙酰泽泻醇B含量低于眉山彭山区和乐山五通桥区。聚类分析结果表明，东坡、彭州、夹江、五通桥产川泽泻指标成分含量存在一定差异，34批样品有4批单独聚为一类，其中3批产自夹江，说明夹江产泽泻有一定地域特点。以上可能是土壤、水质、气候、种植习惯等因素影响的结果，具体影响程度还有待进一步研究。