不同产地苦荞的质量评价研究

宾 婕 张 郴 晏 通 胡建林

1.红河卫生职业学院，云南 红河 661199；2.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500

苦荞[Fagopyrumtartaricum(Linn)Gaench]属蓼科荞麦属双子叶植物，多产于云贵高原、黄土高原两地[1]。其根、茎、叶、花、种子及籽壳中都含有大量黄酮类化合物，如芦丁、槲皮素、肌醇。传统医学和现代医学都证实苦荞具有降血糖、降血脂、降尿糖、防便秘等功效[2-3]，被权威专家称为“三降食品”和“21 世纪人类的健康食品”。因此苦荞中芦丁、槲皮素及肌醇含量是评价苦荞功能性优劣的重要指标之一。此外，苦荞中蛋白质含量也较高，有极高的营养和医药价值[4]。荞麦蛋白除能显著降低血液胆固醇浓度，其效果优于大豆蛋白质[5]，还具有抗衰老、抑制大肠癌的发生等作用。随着其临床研究和应用越来越广泛，制订苦荞的质量标准迫在眉睫。由于水分过多会导致霉变，引入安全性问题，且影响食药价值。有效成分的含量多少也直接影响疗效。且有专家提出：重金属、农药残留量检查是中药材走向世界，创立绿色中药名牌产品的中药标志之一[6]。为此，本试验对苦荞中有效成分进行测定，及对水分，浸出物，重金属、砷盐和农药残留进行了检查，旨在为制订苦荞的质量标准提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-2010型高效液相色谱仪(包括四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器和蒸发光散射检测器，日本岛津)，ODS柱(4.6 mm×150 mm，5μm，岛津)， Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm，Phenomenex公司)，SK3200H超声提取器(上海仪器制造厂)，CP-224S电子天平(德国赛多利斯)。

1.2 材料 甲醇(色谱纯，美国TEDIA天地试剂公司)，乙腈(色谱纯，美国Mallinckrodt Baker公司)，水(娃哈哈饮用纯净水)，其余试剂均为分析纯。芦丁(批号：09072231)、槲皮素(批号：09120411)对照品购自上海同田生物技术有限公司，肌醇对照品(纯度>98%，鼎瑞化工(上海)有限公司)。苦荞样品分别来自云南和四川。

2 方法与结果

为了对苦荞的内在质量有个全面的认识，分别对产自于云南及四川的16个样品进行了系统性研究，方便对我们的生产使用提供一定的参考依据。

2.1 芦丁、槲皮素、肌醇的含量测定

2.1.1 色谱条件

2.1.1.1 芦丁与槲皮素 岛津ODS柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，以乙腈-水(含2%的冰醋酸)为流动相，洗脱梯度为：0～18 min，乙腈浓度17%～40%，流速：1 mL/min，柱温：25 ℃，检测波长：360 nm。

2.1.1.2 肌醇 HPLC：甲醇- 水(含0.1%的冰醋酸)为流动相， 洗脱梯度为：0～5 min，甲醇浓度10%～30%，色谱柱：Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm)，流速：1 mL/min，进样量：6 μL，室温操作。ELSD: 漂移0；管温度5 ℃，载气压力40 psi。

2.1.2 对照品溶液的制备

2.1.2.1 芦丁与槲皮素 精密称取芦丁对照品4.6 mg，槲皮素对照品4.0 mg，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，再分别取1 mL至10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得芦丁和槲皮素对照品溶液浓度分别为0.046 mg/mL和0.04 mg/mL。

2.1.2.2 肌醇 精密称取肌醇对照品6.7 mg置于25 mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度，摇匀，再精密移取0.5 mL至10 mL的容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液浓度为13.4 μg/mL。进样前取适量溶液用0.22 μm微孔滤膜过滤。

2.1.3 供试品溶液的配制

2.1.3.1 芦丁供试品溶液的制备 取苦荞粉末(过60目筛)约100 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入80%乙醇5 mL，在常温下超声(59 KHz)提取30 min，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。进样前取适量溶液用0.45 μm微孔滤膜过滤。

2.1.3.2 槲皮素供试品溶液的制备 取苦荞粉末(过60目筛)约100 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入50%乙醇4 mL，在常温下超声(59KHz)提取30 min，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。进样前取适量溶液用0.45 μm微孔滤膜过滤。

2.1.3.3 肌醇供试品溶液的制备 取苦荞粉末(过60目筛)约100 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入40%甲醇溶液4 mL，在常温下超声提取20 min，用相应的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。进样前取适量溶液用0.22 μm微孔滤膜过滤。

分别取10 μL进高效液相色谱仪，记录峰面积，由线性方程计算各自含量，结果见表1。

2.1.4 线性关系考察

2.1.4.1 芦丁与槲皮素 分别精密吸取2.1.1项下的芦丁和槲皮素对照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25 μL和0.5、1、5、10、15 μL, 注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，以进样量X(μg)为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，芦丁和槲皮素的回归方程和相关系数分别为：Y= 1703415X+9229.6,r=0.9996；Y=3833824X-11994.2,r= 0.9999。

2.1.4.2 肌醇 精密吸取2.1.2项下的肌醇对照品溶液2、4、6、8、10 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图， 测定其峰面积，以进样量X(μg)为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，得：Y=156739X+43.2,r=0.9997。

2.1.5 样品含量测定 取不同来源的苦荞粉末适量，精密称定，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，按1项下色谱条件进行测定，分别记录芦丁、槲皮素及肌醇的峰面积，由线性方程计算各自含量，测定结果见表1。

2.2 水分的测定 按照《中国药典》(2020年版)中水分测定法(四部通则0832)第二法[7]，根据减失的重量，计算苦荞样品含水量(%)，结果见表1。

2.3 浸出物的测定 按照《中国药典》(2020年版)中浸出物测定法(四部通则2201)[7]，分别计算苦荞样品中水溶性浸出物及醇溶性浸出物的含量(%)，结果见表1。

2.4 重金属、砷盐残留 按照《中国药典》(2020年版)中重金属检查法(四部通则0821)[7]第二法检查重金属；按砷盐检查法(四部通则0822)[7]第二法检查砷盐，检测结果见表1。

2.5 农药残留 本试验结合荞麦生长期的病害特点和针对性的用药，发现吡虫啉和多菌灵是种植荞麦最常用的农药，故本试验对吡虫啉和多菌灵进行残留量检查，用液-质联用方法进行检测。液相条件：Waters ACQUITY UPLC -MS/MS(API 3200)，色谱柱为ACQUITY UPLC ODS柱(2.1 mm× 100 mm，7 μm)，以乙腈-水为流动相梯度洗脱：0～2 min，乙腈浓度为15%，2～6 min，乙腈浓度15%～90%，柱温30 ℃，流速0.3 mL/min，进样1 μL。质谱条件：气体为高纯氮气，离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正离子扫描，检测方式：多重反应监测，电喷雾电压：5500 V，雾化气压力：0.414 MPa，辅助加热气压力：0.345 MPa，气帘气压力：0.069 MPa，离子源温度：600 ℃。

对照品和供试品的定性结果见图1，检测结果见表1。

A

BA.对照品；B.供试品；1.多菌灵；2.吡虫啉图1 定性离子对色谱图

(n=3)

3 讨论

研究考察了16个产地苦荞样品的有效成分，其中芦丁含量最高，在1.02%～2.55%，肌醇含量最低，在0.15%～0.51%；且不同产地苦荞中芦丁、槲皮素及肌醇含量有一定差异，说明产地的气候、土壤特性等生态因子及产地加工方式对药材质量影响很大。同产地的苦荞，因加工方式不同含量也有明显差异。根据测定情况和一般养护经验，规定本品水分不得过10%。浸出物含量反映了植物体内生物活性物质的积累情况，与药材质量密切相关[8]。按照测定结果适当下浮来设定指标限度比较符合实际情况，规定本品水溶性浸出物不得少于10%，醇溶性浸出物不得少于5%。

按照国际市场对无公害绿色药材的要求，对不同产地的苦荞进行了重金属、砷盐及农药残留检测，结果表明，苦荞样品符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》[9](中华人民共和国对外贸易经济合作部)规定，及中国药品生物制品检定所《中药中铅、镉、砷、汞测定方法起草说明》[10]中提出的四元素的限量标准，即铅不高于5 ppm，镉不高于0.5 ppm，砷不高于2 ppm，汞不高于0.2 ppm。

本实险对云南及四川地区苦荞的芦丁、槲皮素、肌醇含量、水分、浸出物、重金属、农残进行测定，为科学评价苦荞内在质量积累了科学资料，提供了实验数据。