QuEChERS法结合高效液相色谱-串联质谱法测定茶叶中12种农药残留量

孔玉婷，陶志成，朱丹倩，丁献荣

（1.浙江金正检测有限公司，浙江义乌 322000；2.赞宇科技集团股份有限公司，浙江杭州 310009）

茶叶是我国的一种常见出口农产品，在农业生产中占有重要地位。目前，我国是世界第二大茶叶出口国，但是近年来随着茶叶进口国对茶叶食品安全要求的提高，我国茶叶的出口量正在呈现逐渐下降趋势，因此亟须建立一种便捷、快速、高效的检测方法用于测定茶叶中多种农药残留。

茶叶由于基质复杂，其中含有的色素、茶碱和茶多酚等物质会造成净化困难，因而其农残检测净化方式多采用传统方法，如磺化、SPE 及GPC 技术，但这些前处理技术存在过程繁琐耗时、实际用量大、检测成本高等问题。而QuEChERS前处理方法是近年来在国际上新发展起来的一种样品前处理方法，具有便捷、快速、高效及可靠安全等优点。因此本文采用QuEChERS 法结合高效液相色谱-串联质谱法，建立了一种可同时测定茶叶中甲萘威、涕灭威、克百威、灭多威等12种农药的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

茶叶：市售。

甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯，均购于美国大地公司；甲酸，色谱纯，购于阿拉丁。

QuEChERS SPE：15mL PSA/C18 净 化 管，100mgPSA，100mgC18，300mg MgSO4，购于岛津。

甲萘威、涕灭威、克百威、灭多威、茚虫威、抗蚜威、氯唑磷、内吸磷、灭线磷、吡虫啉、多菌灵和氧乐果标准品：100mg/L，均购于农业部环境保护科研监测所。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260 高效液相色谱仪串联6460C 三重四极杆质谱仪（美国Agilent 公司）；3-18KS 高速冷冻离心机（德国Sartorius 公司）；纯水净化仪（杭州永洁达净化科技有限公司）；MS 3 basic 振荡器（IKA 公司）。

1.3 方法

1.3.1 标准溶液的配制

标准储备液：分别移取各标准溶液至10mL 棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成10μg/mL，置于4℃下避光保存。

混合标准工作液：分别精密吸取各农药标准储备液1mL于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀释成1μg/mL 的混合标准工作液，置于4℃下避光保存。

基质标准工作液：分别精密吸取适量混合标准工作液于10mL 容量瓶中，用阴性基质溶液进行定容，现配现用。

三是现代技术。现代技术的涌现和日新月异，加之现代分析与研究方法的出现，带动了电气自动化向更高级方向的发展。

1.3.2 样品提取与净化

（1）提取

称取2g 样品（精确到0.001g）于50mL 离心管中，加入20.0mL 0.1%甲酸乙腈溶液，2g 氯化钠，超声提取30min，6 000r/min 离心4min，收集上清液待净化。

（2）净化

上清液中加入QuEChERS SPE 粉包净化，涡旋振荡1min，6 000r/min 离心3min，取上清液4.0mL 于40℃水浴氮吹至近干，残渣用50%甲醇水复溶并定容至2.0mL。最后经0.22μm 微孔滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。

1.3.3 质谱与色谱条件

（1）质谱条件

（2）色谱条件

色 谱 柱：Poroshell 120 EC-C18 柱（150mm×3.0mm，2.7μm）；柱温35 ℃；流速0.3mL/min；进样量5μL；流动相A 为5mmol/L 乙酸铵-0.1%甲酸水溶液，流动相B 为乙腈，梯度洗脱程序：0～1min，95%A；1～4min，95%～40%A；4～14min，40%～0%A；14～18min，0%～95%A。

2 结果与分析

2.1 色谱条件优化

为选取最优的流动相体系，分别考察了流动相A（0.1%甲酸水-乙腈）、B（0.1%甲酸水-甲醇）、C（5mmoL 乙酸铵水溶液-乙腈）、D（5mmoL 乙酸铵水溶液-甲醇）、E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸铵水溶液-乙腈）和F（0.1%甲酸5mmoL乙酸铵水溶液-甲醇）6种流动相体系，在同一浓度下进行峰面积比较。结果表明，当选取流动相E 时，其灵敏度和峰形达到最佳，因此最终选择流动相E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸铵水溶液-乙腈）作为最优流动相体系。

2.2 提取剂的选择

为选取最优的提取剂，本试验分别对甲醇、丙酮、乙腈的提取效果进行了考察。在相同条件下，作为提取剂，甲醇较难分层，丙酮和乙腈均能得到较好的回收率，但丙酮提取出的杂质和色素高于乙腈，因此选择乙腈。而乙腈中添加1%甲酸作为混合提取剂，因甲酸可抑制目标物在水中的电离，回收率与之前相比有了较明显的提高。因此选择1%甲酸乙腈作为最适提取剂。

2.3 QuEChERS的影响

为进一步降低基质效应，减少杂峰干扰，提高回收率，选取QuEChERS SPE 进行净化。净化前，各个目标物的回收率为30%～70%，净化后，回收率有了明显的提高，平均回收率在72.5%～118.8%。表明QuEChERS 净化可行性，因此采用QuEChERS 法对茶叶进行净化处理。

2.4 方法线性、检出限与定量限

在上述最优条件下，分别以浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线得到线性方程；3倍信噪比为检出限（LOD），10 倍信噪比为定量限（LOQ），结果见表1。12种化合物在2.0～100ng/mL 范围内线性良好，相关系数r2均大于0.999。

表1 12种农药的检出限、定量限

2.5 方法精密度和回收率

在茶叶基质样品中进行低中高3个浓度水平加标回收试验，考察方法精密度和回收率，结果见表2。加标回收率和精密度均符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》的要求。

表2 12种农药的回收率和精密度

续表

2.6 方法应用

应用本方法对市场上所售的茶叶进行随机抽取检测，共计40个批次，涉及红茶、绿茶、普洱茶和乌龙茶4大类。其中有2个批次的红茶检出多菌灵和氧乐果，绿茶、普洱茶和乌龙茶均未检出这12种农药残留。

3 结束语

本文建立一种QuEChERS 法结合高效液相色谱-串联质谱法同时测定茶叶中12种农药残留量的方法，样品经1%甲酸乙腈溶液提取，QuEChERS 法净化，MRM 监测方式测定。12 种药物在2～100ng/mL 浓度范围内线性良好，相关系数r2均大于0.999，低中高浓度三个水平加标试验平均回收率在72.5%～118.8%，RSD 在1.3%～8.1%，方法检出限为0.260～ 11.5μg/kg，定量限为0.864～38.5μg/kg，符合农药残留分析的要求，该方法适用于大量茶叶样品农药残留的快速筛选和定量分析检测。