降脂胶囊的质量标准提升研究

曾芳俐 张磊 冯华

【摘 要】 目的： 建立降脂胶囊的质量标准研究。方法： 采用薄层色谱法鉴别制剂中的葛根及葛根素;采用高效液相色谱法对制剂中的活性成分葛根素进行含量测定，用DiamosilC18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，甲醇-水（30∶70）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为250 nm，柱温35 ℃。结果： 在薄层鉴别色谱中，葛根和葛根素斑点清晰分离，效果好，Rf值达到要求，阴性对照无干扰。含量测定中葛根素在32.32～290.88μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999;专属性强、重现性好，平均回收率为99.15%、RSD为0.66%（n=6）。结论： 所建立的鉴别方法操作简单，专属性强;定量方法稳定灵敏，重现性良好，该标准可以作为降脂胶囊的质量控制。

【关键词】 降脂胶囊;薄层色谱法;高效液相色谱法;质量标准

【中图分类号】R268 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）17-0035-04

Abstract：Objective To establish the quality standard of Jiangzhi capsule.Methods Radix puerariae and puerarin in the preparation were identified by TLC， and the content of Puerarin in the preparation was determined by HPLC. Diamosil C18 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） was used as the column， methanol water （30∶70） as the mobile phase， the flow rate was 1.0mL/min， the detection wavelength was 250nm， the column temperature was 35 ℃. Results In TLC， the spots of puerarin and puerarin were separated clearly， the effect was good， RF value met the requirements， and negative control had no interference. In the content determination， puerarin has a good linear relationship with peak area in the range of 32.32-290.88 μg，r=0.9999; It has strong specificity and good reproducibility， with an average recovery of 99.15% and RSD of 0.66% （n=6）. Conclusion The established identification method is simple and specific， and the quantitative method is stable， sensitive and reproducible， which can be used as the quality control of Jiangzhi capsule.

Keywords：Jiangzhi Capsule;TLC;HPLC;Quality Standard

降脂膠囊主要由葛根、何首乌、银杏叶、山楂、水蛭、海藻六味中药材组成[1]，具有消食除痰，活血祛瘀功效。用于脾运失常所致的头晕、头痛、胸闷、四肢沉重及高血脂等症。目前，该制剂已应用于临床治疗中，由于该中药复方制剂具有药味较多，成分复杂等特点，现行标准难以保证降脂胶囊质量。为有效控制降脂胶囊的生产质量，本文对其质量标准进行了系统的研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津 LC-20AD高效液相色谱议（包括二元泵，紫外检测器，柱温箱，自动进样器，Shimadzu分析仪器工作站和处理软件），DiamosilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱;AB265-S型梅特勒电子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料 葛根对照药材、葛根素对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号分别：121551-201103，110752-201806 ），甲醇为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20180409），水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，3批降脂胶囊（批号分别为：161201、180309、180901）遵义市中医院购买，阴性样品自制。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别[2-6] 取样品约2.0 g，加甲醇10 mL，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取葛根对照药材1 g，同法制成对照药材溶液，再取葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液，同样品制法制成阴性样品溶液。吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶3∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰，见图1。

2.2 含量测定[2-9]2.2.1 色谱条件 DiamosilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱，甲醇-水（30∶70）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为250 nm，柱温35 ℃。进样量10 μL，相连两峰分离度应符合规定，理论塔板数按葛根素峰计，应不低于4000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取葛根素照品适量，加甲醇溶解制成含葛根素16.16 μg/mL的对照品溶液，摇匀，用0.45 μm 的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 供试品溶液制备 取内容物约1.0 g（批号：180901），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，超声处理30 min，取出，放冷至室温，用甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性溶液制备 取缺葛根药材处方下自制阴性样品，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在葛根素相应的保留时间无干扰峰，详见色谱图2。

2.2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，分别以葛根素浓度（μg）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，计算，回归方程为：Y=63415X-301.5，R = 0.9999;在32.32～290.88 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定6次，记录峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为1.33%%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 分别吸取（批号180901）同一供试品溶液于0、4、8、12、16、20、24 h，精密吸（批号180901）样品制备的供试品溶液10 μL进样，测得峰面积，RSD均值为0.12%，表明在24 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品（批号180901）6份，精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液。测定峰面积，计算葛根素平均含量为0.36 mg/g，RSD为0.13%，结果表明重复性好。

2.2.9 加样回收试验取（已知含量含葛根素0.36 mg/g）的样品6份，每份约0.5 g，精密称定，精密称取葛根素对照品适量，按“2.2.3”项下的方法操作，计算回收率，葛根素平均回收率为99.15%、RSD为0.66%，见表1。

2.2.10 3批样品含量测 结果详见表2。

3 讨论

葛根和葛根素的薄层鉴别研究中分别比较了含4%醋酸钠的硅胶G薄层板、聚酰胺薄层板、硅胶G薄层板和硅胶 GF254 薄层板的效果，结果发现硅胶G薄层板清晰圆整和，硅胶GF254薄层板展开的斑点次之，Rf值到不到要求，而聚酰胺层析板和4%醋酸钠的硅胶 G 薄层板的斑点分离不理想，所以鉴别过程中选择硅胶G板用。试验过程中，对不同的展开剂进行了对比研究，分别尝试了以二氯甲烷-甲 醇-水（7∶2.5∶0.25）、三氯甲烷-甲醇（8∶2）、三氯甲烷-甲醇-水 （10∶2.5∶0.25）、三氯甲烷-甲醇-水 （10∶3∶0.1）4 種展开剂。结果表明，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶3∶0.1）为展开剂的斑点与周围杂质斑点分离较好。

降脂胶囊为复方制剂，为了制定出一种适合降脂胶囊的科学、合理、可行的质量控制分析方法，本论文作了如下研究工作：本实验使用甲醇-水（15∶85）、甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）、乙睛-水（15∶85）作为流动相，但是葛根素分离效果不好，并且样品峰不能回到基线上，所以最后确定以甲醇-水（30∶70）为流动相，不但分离效果最好，并且样品峰能回到基线。

综上所述，本试验对降脂胶囊中的葛根分别进行了薄层鉴别和含量测定研究，所建立的方法稳定可靠、重复性好、专属性强，阴性无干扰，可以有效控制降脂胶囊中葛根药材的质量，适用于降脂胶囊的质量控制。

参考文献

[1]国家食品药品监督管理局标准.降脂胶囊Z20030209[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].2015年版：北京：中国医药科技出版社，2015：333.

[3]杨金颖，翁蓓，孙芳芳，等.HPLC法测定回春颗粒中葛根素的含量[J].天津药学，2018，2（30）：20-22.

[4]肖楠，王路宏，赵磊，等.HPLC法测定五味子膏中葛根素的含量[J].中国药物评价，2018，4（35）：267-270

[5]苏丹.HPLC法测定含化上清片中葛根素的含量[J].世界最新医学信息文摘，2018，92（19）：250，252.

[6]李哲，李菲，郭华静，等.精乌颗粒薄层鉴别方法[J].中国民族民间医药，2019，19（28）：30-33.

[7]冯穗芬，等.HPLC法测定益气活血通络颗粒中葛根素的含量[J].中国民族民间医药，2018，5（27）：17-19.

[8]刘佳，韦巧玲.金葛感冒颗粒质量标准研究[J].中国民族民间医药，2018，9（27）：13-14.

[9]JEON Y D，LEE J H，LEE Y M，et al.Puerarin inhibits inflammation and oxidative stress in dextran sulfate sodium-induced colitis mice model[J].Biomedicine & Pharmacotherapy，2020，124（2020）：109847.

（收稿日期：2020-04-15 编辑：刘斌）