佛山市顺德区孕前优生检查人群地中海贫血的产前筛查及产前诊断研究

钟 华，欧阳辉，赵卓姝，吴海燕，刘凤芝，麦富巨 （广东医科大学顺德妇女儿童医院/佛山市顺德区妇幼保健院，广东佛山 528300）

地中海贫血(简称地贫)是一种珠蛋白基因的缺失或点突变使珠蛋白基因的表达受到抑制，引起相应的珠蛋白肽链合成减少甚至完全不能合成，导致血红蛋白合成缺陷，红细胞易破裂从而引起轻重不等的慢性进行性溶血性贫血[1]。本病广泛分布于世界许多地区，我国的广东、广西、海南等省是地中海贫血的高发区，受累人口超过 2 亿，是全球最大的单基因遗传性疾病[2]。由于至今本病尚无法根治，通过产前的血液学表型的筛查、血红蛋白组分及DNA分析技术对携带有同种类型地贫基因的高风险夫妇所孕胎儿进行产前基因诊断以淘汰重症地贫患儿，是现今预防本病的最有效方法[3]。广泛开展地中海贫血的产前筛查及早期产前诊断，选择性终止重型地中海贫血胎儿的妊娠，降低新生儿出生缺陷率，是目前国际上公认的首选办法，对提高人口素质具有重要社会意义[4]。本文通过调查佛山市顺德地区孕前优生检查人群地中海贫血产前筛查及产前诊断的情况，分析顺德区的孕前优生检查人群地中海贫血的基因类型分布和携带率，为我区科学制定适合本地区的地贫防控策略提供重要的数据支持。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选择2016年1月-2019年10月在我院进行孕前优生检查的30 868对夫妇(共61 736人)作为研究对象，年龄20～48岁，平均(26.8±4.5)岁。纳入标准：(1)佛山顺德区户籍人口或持有顺德居住证的非户籍人口；(2)有完整的人口学资料。排除标准：近期患有急性感染、慢性失血或服用了影响血细胞参数药物者。本研究符合医学伦理学规定，所有产前优生系列检查均经受检者本人知情同意。

1.2 方法

为方便参加孕前优生检查的夫妇避免多次抽血，每个受检对象采集3管抗凝静脉血，其中1管EDTA-K2抗凝血2 mL，用于血常规分析；另2管枸橼酸钠抗凝血各2 mL用于血红蛋白电泳分析及基因检测。

1.2.1 地贫血细胞分析筛查 使用迈瑞BC 6600全自动血细胞分析仪对孕前优生检查的夫妇进行血细胞分析，以平均红细胞容积(MCV)＜82 fl和平均红细胞血红蛋白量(MCH)＜27 pg作为判断地贫血液学表型阳性的初筛指标，如受检夫妇任何一方 MCV＜82 fl和(或)MCH＜27 pg则做血红蛋白电泳分析。

1.2.2 地贫血红蛋白电泳筛查 使用法国Sebia CAPILLARY2毛细管电泳仪进行血红蛋白组分分析，将HbA2＜2.5%(判为α-地贫表型)、HbA2＞3.5%(判为β-地贫表型)、HbF＞2.0%或出现异常血红蛋白带(HbH、HbE等)均判定为筛查阳性，对血红蛋白电泳筛查异常者进行基因检测。

1.2.3 地贫基因诊断 采用跨跃断裂点PCR(gap-PCR)检测 --SEA/、-α3.7/ 、-α4.2/3种 α-珠蛋白基因缺失突变；采用PCR-反向点杂交技术(PCR-RDB)检测αCSα、αQSα、αWSα 3种非缺失型α地贫基因点突变和17种β-珠蛋白基因突变。对表型异常的疑似少见地贫者进行基因测序，以明确其基因型。地贫基因诊断仪器为德国Biometra PCR 仪、亚能YN-16杂交仪、NextSeq CN500基因测序仪，深圳亚能生物技术有限公司提供地中海贫血基因诊断试剂盒，相关检测严格按照说明书进行操作和结果判断。

1.3 统计学处理

采用SPSS20.0统计软件处理数据，计数资料以率(%)表示。

2 结果

2.1 血细胞分析与血红蛋白电泳的筛查

地贫初筛阳性率为15.46%(9 546/61 736)，其中α-地贫表型7 515例(占78.72%)；β-地贫表型2 031例(占21.28%)。

2.2 地贫基因诊断

通过基因检测地贫基因携带阳性率为14.92%(9 208/61 736)，其中单纯α-地贫基因携带率为76.25%(7 021/9 208)；单纯β-地贫基因携带率为22.71%(2 091/9 208)，αβ-复合型地贫基因携带率为1.04%(96/9 208)。

2.2.1 单纯α-地贫基因检出结果 单纯α-地贫中以--SEA基因类型构成比最高占60.28%(4 232/7 021)，其次为-α3.7 占 20.15%(1 415/7 021)，见表1。

2.2.2 单纯β-地贫基因检出结果 共检出12种β-地贫基因突变类型，其中以 CD41-42 位点的突变基因构成比最高占36.68%(767/2 091)，其次为β-28占17.50%(366/2 091)，IVS-Ⅱ-654 占17.12%(358/2 091)，详见表2。

2.2.3 96例αβ-复合型地贫基因检出结果 共检出 10种αβ-复合型地贫基因突变类型，其中以--SEA/CD 41-42突变基因构成比最高，占36.46%(35/96)，其次为--SEA/IVS-Ⅱ-654占17.71%(17/96)，详见表3。

2.3 地贫产前诊断结果

表1 α-地中海贫血基因携带率、频率与构成比 (%)

30 868对夫妇中双方为同型地贫基因携带者且可能生育中、重型地贫儿的高危夫妇共284对(568例)，其中α-地贫214对，β-地贫70对，全部于孕16～22周时行羊膜腔穿刺术取羊水进行胎儿地贫产前诊断，检出中间型α-地贫18例(3.17%)，重型α-地贫36例(6.34%)，重型β-地贫20例(3.52%)。

3 讨论

地中海贫血为单基因遗传病，根据其临床特征可分为地中海贫血携带者、中间型地中海贫血、重型地中海贫血[5]。地贫携带者多数无明显的临床症状，中间型地贫的症状则轻重不一，而重型地贫者可出现严重的贫血，并出现黄疸、肝脾肿大、生长发育迟缓等，目前临床对重型地贫尚无有效治疗方法，仅能靠长期输血并以铁螯合剂治疗，对患儿的家庭以及社会造成沉重的负担[6-7]。佛山市顺德区位于广东省中心地带，人口密集，地贫防控形势严峻，因此，进行地中海贫血产前筛查及产前诊断的研究具有重要意义。

本文通过对佛山市顺德区61 736人孕前优生检查者进行血常规加血红蛋白电泳进行初筛，地贫初筛阳性率为15.46%，其中α-地贫表型占78.72%，β-地贫表型占21.28%。地贫基因携带阳性率为14.92%，其中单纯α-地贫基因携带率为76.25%，以--SEA基因类型构成比最高占60.28%；单纯β-地贫基因携带率为22.71%，以CD41-42位点的突变基因构成比最高占36.68%；αβ-复合型地贫基因携带率为1.04%，以--SEA/CD41-42突变基因构成比最高占36.46%。同时30 868对夫妇中筛查出双方为同型地贫基因携带者且可能生育中、重型地贫儿的高危夫妇共284对，其中α-地贫214对，β-地贫70对，全部行羊膜腔穿刺术取羊水进行胎儿地贫产前诊断，检出中间型α-地贫18例，重型α-地贫36例，重型β-地贫20例，重型地贫均终止妊娠，流产物基因型分析与羊水相符。上述筛查结果显示佛山市顺德区孕前优生检查人群地贫基因类型复杂，以单纯α、β及αβ-复合型地贫基因为主。96例αβ-复合型地贫的检出提示在对孕前优生检查人群进行地贫筛查时，对于β-地贫携带者，建议常规筛查α-地贫的相关基因，以防止αβ-复合型地贫的漏检。特别是对夫妇双方为同型地贫基因携带者且可能生育中、重型地贫儿的高危夫妇追踪进行胎儿地贫产前诊断，以降低重型地贫患儿的出生率和提高地贫产前诊断的准确性。

表2 β-地中海贫血基因携带率、频率与构成比 (%)

表3 αβ-复合型地中海贫血基因携带率、频率与构成比 (%)