污泥中粪大肠菌群测定的方法验证

2020-11-05章维维顾其波

绿色科技 2020年18期

章维维，顾其波

(1.杭州嘉澍环境监测有限公司，浙江杭州 311100;2.杭州市交通运输行政执法队，浙江杭州 310004)

1 引言

随着经济发展和环保意识的增强，我国城镇污水处理以及各类型工业污水处理事业不断发展，随之产生的污泥量也日益增加。污泥是在污水处理厂净化污水过程中产生的沉淀物，其中含有大量需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌[1]。污泥中的病原物进入环境后，会污染周围环境，威胁人类健康[2]。USEPA和欧盟(EU)都以粪大肠菌群数量为标准判断污泥是否适用于土地利用[3]，同时粪大肠菌群菌值也是城镇污水处理厂的污泥稳定化控制指标[4]。本文以杭州嘉澍环境监测有限公司创新课题《污泥特性分析与分类处置技术研究》为依托，开展污泥中粪大肠菌群新项目验证，按要求完成相关试验分析，在此与同行做个简单交流。

2 实验部分

2.1 仪器和设备

采样瓶(500 mL带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶)；高压蒸汽灭菌器(115 ℃、121 ℃可调)；恒温培养箱或水浴锅(允许温度偏差36 ℃±1 ℃、44 ℃±0.5 ℃)；天平(感量0.001 g)；革兰氏染色用有关器材；显微镜；振荡器；一般实验室常用仪器和设备。注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min备用。

2.2 试剂

乳糖胆盐培养基(广东环凯微生物科技有限公司)；乳糖复发酵培养基(青岛海博生物技术有限公司)；伊红美蓝琼脂、革兰氏染色套装(北京路桥技术股份有限公司)。

2.3 样品采集、运输与保存

用于粪大肠菌群测定的采样瓶，应用可耐灭菌处理的广口玻璃瓶。灭菌前，把具有玻璃塞的采样瓶用铝箔或厚的牛皮纸包裹，瓶顶和瓶颈都要裹好，在115 ℃经高温灭菌20 min。采得的泥样应立即送检，时间不超过2 h，如不能立即送检，应置于冰箱内，时间不超过24 h，否则将影响检验结果[5]。

2.4 检测方法

称取充分混匀污泥样品10 g，放于装有90 mL灭菌生理盐水(.8%)的三角瓶内，充分摇匀，制成1∶10均匀稀释液。用1 mL灭菌吸管吸取1∶10菌液，注入9 mL灭菌试管内，摇匀，制成1∶100均匀菌液。另取一支1 mL吸管，按照上述操作步骤，依次制10倍稀释菌液，如此每递增稀释一次，即换用一支1 mL灭菌吸管。不同的污泥样品，要选择适宜的稀释度。

分别用1 mL灭菌吸管吸取4个稀释度污泥样品，接种于乳糖胆盐发酵管内，置(44±0.5)℃培养箱中培养24 h，此为初发酵试验。将培养后，产酸产气或只产酸的发酵管，用接种环取发酵液，划线接种于伊红美蓝琼脂平板，置(36±1)℃培养24 h。培养后，用接种环挑取粪大肠菌群可疑菌落的一小部分，进行革兰氏染色，镜检。经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，挑取盖该可疑菌落的另一部分接种乳糖发酵管，置(44±0.5)℃培养箱中培养24 h，如产酸产气，即证实有粪大肠菌群存在。通过查粪大肠菌值表，报告样品粪大肠菌值/g(mL)。