ANCA不同检测方法对慢性支气管炎患者早期诊断的价值研究

于红博 王海波

1.吉林省吉林市中心医院检验科，吉林吉林 132000；2.吉林医药学院附属医院检验科，吉林吉林 132013

慢性支气管炎是气管、支气管黏膜及周围组织的一种慢性非特异性炎症，是我国老年人群的一种常见病和多发病，据相关医学统计，发病率约为15%[1-3]。患者病后，初期症状仅表现为咳痰、咳嗽和喘息等，随着病情的进展，后期可导致肺气肿等多种并发症，甚至引起呼吸衰竭和窒息等，直接危及患者生命[4-5]。因此慢性支气管炎患者的早期诊断，是改善和提高患者康复质量的重要前提。近年来，随着检验医学的发展，抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的检测逐步成为慢性支气管炎患者早期诊断的一个新的研究方向。常规的检验方法包括线性免疫分析法和间接免疫荧光法等，为了进一步探讨不同检测方法的准确性，我院检验科根据慢性支气管炎患者患病程度的不同，分为轻症组和重症组两组，分别采取线性免疫分析法、间接免疫荧光法和联合检测的方法加以检测。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2019年9月～2020年1月检验科收集的281份血清样本作为研究对象。男151例，女130例，年龄19～76岁，平均（51.1±6.2）岁。69例为确诊的慢性支气管炎患者，其中39例为轻症支气管炎患者，30例为重症慢性支气管炎患者。其余212例为体检中心体检的健康人群。慢性支气管炎的诊断标准参照符合中华医学会呼吸学分会制定的《慢性阻塞性肺炎诊治指南》中的相关标准。另外根据患者支气管炎患病程度的不同，将患者血氧分压检测结果和动脉血二氧化碳分压检测结果分别≥60mm Hg和≤55mm Hg定义为轻症患者，将检测结果分别＜60mm Hg和＞55mm Hg的患者定义为重症患者。

1.2 检验方法

研究对象均清晨空腹采血5mL，分离血清后，放入-20℃冰箱中保存。然后分别采取线性免疫分析法、间接免疫荧光法和联合检验的方法检测ANCA。在线性免疫分析法检测方面，试剂盒购自德国IMREC公司。实验步骤为检验医师首先将核抗原印迹于硝化纤维膜上，将非特异反应区封闭，切割纤维膜为膜条。结合膜条上的抗原与特异性抗体，然后剔除未结合蛋白。加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG二抗与之结合，加入TMB底物，结合抗体表现蓝色的免疫复合物。ANCA阳性的判定标准为：实验完成后，将膜条与试剂盒配套的Cut-Off、PR3、MPO三条带进行颜色比较。若颜色比Cut-Off同色或偏深，则判断ANCA为阳性，反之判断为阴性[6]；在间接免疫荧光法检测方面，试剂盒购自欧盟公司。检验师先将生物载片从试剂盒中取出。用磷酸缓冲盐溶液1∶100稀释血清和抗体。然后将加样板置于泡沫板上，滴加稀释后的血清样本25μL于加样板的反应区中，开始第一次温育，时间为30min。温育完成后，用磷酸盐缓冲液冲洗载片1s后，浸入脱色缸浸洗5min。加异硫氰酸荧光素标记羊抗人IgG，再次温育，用磷酸盐缓冲液冲洗和脱色缸浸洗，最后使用盖玻片将样本封片，实验操作结束。在荧光显微镜下判断结果。ANCA的阴性判断标准为中性粒细胞无特异性荧光。胞浆型抗中性粒细胞抗体（cANCA）阳性的判定标准为整个中性粒细胞胞浆中，均匀分布颗粒型荧光，细胞核未显示荧光。核周型抗中性粒细胞抗体（pANCA）阳性的判定标准为在中性粒细胞核周呈现出外观为带状且光滑的荧光。在联合检验方面，样本同时采用线性免疫分析法和间接免疫荧光法检验，其中任何一种方法检验结果为阳性，则判断结果为阳性。

1.3 观察指标

（1）不同检测方法检查患者ANCA阳性率结果比较；（2）不同检测方法检测结果的敏感度比较。

1.4 统计学方法

采用SPSS22.0统计学软件对本研究数据进行分析。计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各种检测方法检测ANCA的阳性率结果比较

轻症患者ANCA阳性率结果，见表1，三种检测方法总阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；重症患者ANCA阳性率结果见表2，三种检测方法总阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 不同检测方法的敏感度比较

轻症患者和重症患者检测结果的敏感度比较见表3。对于轻症患者，联合检验的敏感度高于线性免疫分析法和间接免疫荧光法，差异有统计学意义（P＜0.05）；对于重症患者，联合检验的敏感度高于线性免疫分析法，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。

表1 轻症患者ANCA阳性率检测结果[n（%）]

表2 重症患者ANCA阳性率检测结果[n（%）]

表3 不同检测多法的敏感度比较

3 讨论

慢性支气管炎是老年患者最为常见的一种疾病，据相关医学统计，发病率约为15%，而且随着我国老龄化社会的到来，慢性支气管炎患者的数量将会进一步增长[7-9]。慢性支气管炎的致病因素较为复杂，如吸烟、空气污染和过敏等，均是主要的致病因素。如在吸烟方面，香烟的烟雾中包含尼古丁和焦油等多种有害物质，当人体主动或被动吸入后，会对支气管黏膜上皮造成不同程度的损害；在空气污染方面，其原理与香烟类似，都是由于毒害物质的吸入而损伤支气管；在过敏方面，患者内源或外源抗体可引起变态反应，导致支气管痉挛或产生炎症等[10-13]。患者发病后，典型的症状表现如咳嗽和咳痰等，持续时间长，一般在3个月以上，且容易反复。若干预方法不当，后期还可出现支气管扩张症和肺气肿等并发症，甚至导致窒息等，从而严重威胁患者的健康。

在慢性支气管炎患者的治疗方面，已经形成了较为系统且完善的治疗体系，主要是控制感染、镇咳祛痰和平喘等[14]。但由于患者病程较长，越早对患者加以治疗干预，患者后期的预后越好。因此慢性支气管炎患者的早期诊断工作，成为检验科等科室研究的核心问题之一。

ANCA是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆中溶酶体酶发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶物质及白细胞抗原生成，刺激机体而产生ANCA。近年来，随着检验医学的发展，经临床医学证实ANCA的上升，会激活人体内的NF-κB炎症性信号通路，从而导致支气管炎的发生及加重。如刘宁宁等[15]在临床工作中发现，慢性支气管炎患者ANCA检测数值明显高于健康人群等。

在相关研究的背景下，ANCA的相关检验工作，逐步成为各医院检验科工作的重点。现阶段主要的检测方法包括线性免疫分析法和间接免疫荧光法等，为了进一步探讨ANCA与慢性支气管炎之间的关系，我院首先将慢性支气管炎患者分为轻症组和重症组，并采取以上两种方法独立检验和联合检验的方法，分别加以研究。

在研究结果方面，首先对于轻症慢性支气管炎患者，发现线性免疫分析法和间接免疫荧光法两种方法检测结果无差异，但采取联合检验后，检验结果的敏感度优于以上两种检测方法，说明联合检验的方法，对慢性支气管炎患者可以起到良好的早期诊断的效果；对于重症慢性支气管炎患者，同样未见线性免疫分析法和间接免疫荧光法两种方法的区别，采取联合检验后，敏感度高于线性免疫分析法，其他各项结果比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。提示联合检验方法效果优于线性免疫分析法。

综上所述，采取线性免疫分析法和间接免疫荧光法联合检验的方法，对于早期慢性支气管炎患者具有较为理想的诊断效果，建议对疑似患者尽早检验其ANCA水平，以尽早发现和治疗。而对于重症患者，采取间接免疫荧光法和联合检验的方法，可以达到基本相同的检验效果，尽量不选择线性免疫分析法进行检验。