常见消毒剂消毒效果评价

2020-10-26刘杰韩薇崔雪志吴蕾常海霞韩帅琪张向奎刘振林李文锋李建和李超许传田

家禽科学 2020年9期

刘杰韩薇崔雪志吴蕾常海霞韩帅琪张向奎刘振林李文锋李建和李超许传田

摘要：为评价规模化养殖场常用消毒剂的消毒效果，用规模化养殖场分离鉴定的三株细菌（大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌）作为标准菌株，用菌悬混合液定量杀菌法分别对13种消毒剂的杀菌效果进行比较。在相同实验室条件下，将大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌分别与消毒剂按不同稀释比例混匀后作用15 min，培养并计数杀菌后的菌落总数。结果显示：A、B、I 比例为1∶2000;C、D比例为1∶1000;H比例为1∶800;G比例为1∶600;E、F、L、M浓度为0.3%（其中L和M以碘含量计）;J浓度为0.05%;K浓度为0.02%;以上浓度均可达到100%杀菌效果。

关键词：大肠杆菌;沙门氏菌;葡萄球菌;消毒剂

中图分类号：S859.79+9.1 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2020）9-0003-05

规模化养殖场疫病爆发多是由于外界病原微生物入侵或者内环境病原微生物污染扩散造成的[1]，消毒能效阻断传染病病原体传播[2]，通过消毒可将病原微生物隔离在养殖场和动物体外。因而选择高效安全的消毒剂产品是做好消毒工作的关键，亦是做好生物安全工作的重中之重。目前市场上消毒剂种类繁多、效果各异，养殖场人员在选择消毒剂时无所适从。本试验通过对13种消毒剂分别对大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌的杀菌效果比较，并结合每种消毒剂的使用成本和消毒机制，筛选消毒效果较好、性价比高的产品，为养殖场合理选择选消毒剂提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 消毒剂及主要成分戊二醛苯扎溴銨溶液（A），戊二醛苯扎溴铵溶液（B），戊二醛苯扎溴铵溶液（C），复方戊二醛溶液（D），复合酚（E），复合酚（F），过硫酸氢钾复合物粉（G），过氧乙酸、过氧化氢溶液（H），戊二醛苯扎溴铵、甲醛、乙二醛（I），三氯异氰尿酸粉（J），癸甲溴铵溶液（K），10%聚维酮碘溶液（L），10%聚维酮碘溶液（M）。

1.1.2 试验菌株试验用大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌均来自养殖现场。

1.1.3 器材 MHB和平板计数琼脂均为陆桥产品;苏净牌超净工作台、一恒37 ℃恒温培养箱、申安牌高压灭菌锅、100～1000 μL单道移液器、吸头、18 mm×180 mm试管（带塞子）、酒精灯等。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养将养殖场分离鉴定的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌复苏后，加入到已灭菌MHB溶液，37 ℃恒温培养箱培养24 h。

1.2.2 计算MHB溶液中菌落含量室温条件下（25℃）将培养24 h的MHB溶液在超净工作台中用灭菌生理盐水作10倍倍比稀释，稀释至108，再分别从已稀释好的梯度（104～108）中分别取0.1 mL菌液加入到灭菌的90 mm平皿中，倒入平板计数琼脂，凝固后置于37 ℃恒温培养箱培养18～24 h，计算三种菌株的菌落总数。

1.2.3 消毒剂与菌悬液作用室温条件下（25 ℃），根据厂家推荐消毒浓度设置消毒剂的稀释比例（见表1）将A、B、C、D、G、H和I分别用蒸馏水进行1∶200、1∶400、1∶600、1∶800、1∶1000、1∶2000倍稀释;E和F作0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1.2%稀释;J稀释至0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%;K稀释至0.008%、0.016%、0.02%、0.035%、0.04%、0.05%;L、M稀释至0.1%、0.3%、0.5%、1%、2%（以碘含量计）。震荡混匀后，在超净工作台中将相应菌株加入到不同稀释倍数的消毒剂中，消毒剂与菌悬液的比例为10∶1（10 mL消毒剂∶1mL菌液）混合均匀，反应15 min。在超净工作台中分别取0.1 mL反应后混合液加入平皿中，倒入平板计数琼脂、混匀，凝固后倒置于37 ℃恒温培养箱中培养18～24 h，计算不同平皿中的菌落总数。试验过程中设阳性对照（灭菌蒸馏水∶菌悬液=10∶1）和阴性对照（灭菌蒸馏水）。

2 试验结果

2.1 MHB溶液中细菌含量试验结果见表2。

由表2计算可知，三种菌株菌悬液中含菌量：大肠杆菌为6.8×109 CFU/mL，沙门氏菌为7.2×108 CFU/mL，葡萄球菌为4.5×108 CFU/mL。

2.2 各种消毒剂杀菌效果消毒剂对三种细菌的杀菌效果见表3。结果显示，13种消毒剂的不同稀释比例对菌悬液（大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌）作用15 min，并菌落计数100 μL。A、B、I 比例为1∶2000，C、D比例为1∶1000，H 比例为1∶800，G比例为1∶600，E、F、L、M浓度为0.3%，J浓度为0.05%，K浓度为0.02%，以上浓度对三种菌均可达到100%杀菌效果。

2.3 不同消毒剂的成本比较在实验室条件下，13种消毒剂推荐使用比例与市场价格计算得出其消毒成本，由低到高依次为K

3 讨论

在实验室条件下，13种消毒剂按厂家推荐比例对大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄糖球菌均可达到100%杀菌效果。比较各种消毒剂消毒效果和成本，消毒剂K性价比较高，其主要成分为癸甲溴铵，是一种双链季铵盐消毒剂，杀菌普广，对多数细菌、真菌、病毒有杀灭效果，为中效消毒剂，无色、无味、无刺激和腐蚀性，但受有机物影响大，对芽孢和无囊膜病毒效果较差，可带禽和饮水等消毒[3，4]。

消毒剂J主要成分为三氯异氰尿酸粉，可杀灭各种微生物，主要对细菌、芽孢、病毒及真菌杀菌作用强，属于高效消毒剂;但其药效持续时间较短，有较强的刺激性和腐蚀性，种禽场多用于空舍期及其车辆消毒[5]。

消毒剂A、B、C、D、I主要消毒成分为戊二醛苯扎溴铵或者复方戊二醛，均为醛类消毒剂，杀菌作用和渗透力强，对任何细菌、病毒、霉菌及顽固的芽孢等有杀灭作用，可用于空栏、用具、运输车辆等的消毒，还可用于熏蒸消毒[6];受温度和有机物影响较小，主要用于禽舍、器具喷雾等消毒。

消毒剂E和F成分是复合酚，为酚类消毒剂，通过使病原微生物蛋白变性、沉淀达到消毒效果，杀菌普广，但有臭味和刺激性[7]，所以主要用于墙壁、地面、外环境和用具消毒。

消毒剂L和M主要成分为聚维酮碘，可杀死大部分细菌、真菌和病毒[8]，杀菌快且效力强，但使用浓度较高、不溶于水、有残留、受有机物影响较大，主要用于带畜禽消毒、饮用水消毒等。

消毒剂G成分为过硫酸氢钾复合物粉，是一种广谱、高效、低毒兽用消毒剂[9]，主要用于畜禽舍水线和带畜禽消毒。

消毒剂H主要成分为过氧乙酸和过氧化氢，杀菌普广、高效、环保，可以迅速杀灭大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等微生物[10]，主要用于畜禽圈舍和设备表面消毒。

本实验数据是在实验室条件下所得，养殖场在实际消毒过程中，因消毒对象、温度、湿度、作用时间、消毒方式、有机物及污染程度等因素都会对消毒效果产生一定的影响;因此养殖现场选择消毒剂要根据消毒对象选择适当类型消毒剂，并根据消毒条件调整消毒剂使用比例，以达到理想消毒效果。

参考文献：

[1] 陈晓强王晶钰，张中航，等.规模化鸡场消毒剂的筛选与消毒效果评价[J].动物医学进展，2011，32（11）：85-89.

[2] 董雯雯，李峰，张世栋，等.家禽养殖场常用消毒剂及消毒效果评价方法研究进展[J].家禽科学，2019（09）：53-56.

[3] 邹立扣，吴国艳，程琳，等.季铵盐类消毒剂及大肠杆菌对其耐药性研究进展[J].食品科学，2014，35（17）：338-345.

[4] 王铁良.鸡场消毒措施及注意事项[J].中国畜牧兽医文摘，2017，33（02）：95.