谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂对于犬猫临床术前术后肠道修复、应激、免疫调节的作用研究

王秀君，付运星，阎 峰，刘永华，李四豪

（1.河南牧业经济学院制药工程学院，河南 郑州 450008；2.郑州市动物卫生监督所；3.郑州立蓓生物工程有限公司；4.郑州瑞派小俏皮动物医院）

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验动物犬6 只，体质量在6～8 kg 之间，猫6 只，体质量在1.5～5 kg之间，试验动物在疾病状态下。

1.2 仪器及耗材

碱性磷酸磷（ALKP）试剂盒、丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒、总胆固醇（TBIL）、尿素（UREA）、肌苔（CREA）试剂盒、总蛋白（TP）试剂盒、白蛋白（ALB）试剂盒、隣（PHOS）试剂盒、葡萄糖（GLU）检测试剂盒及总抗氧化能力试剂盒（T-AOC）均购于南京建成生物科技公司；血生化分析仪及全自动血球仪购于迈瑞生物医疗电子股份有限公司；EDTA抗凝管及离心管均购于宝生物科技有限公司；谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂为郑州立蓓公司提供，按照5 kg体质量以下添加2.5 g、5 kg体质量以上添加10 g，进行喂食。

1.3 方法

1.3.1 动物分组

动物数量及分组方法:实验动物犬共6只（A组01、02、03，B 组04、05、06）、猫共6 只（C 组07、08、09，D 组10、11、12），按照使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂的时间和次序分为下列四组（表1）。首先对A 组、C 组实验犬猫连续服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂7 d，然后对B组、D组实验犬猫进行正常喂药。

分组疾病期是否服用谷氨酰胺与溶菌酶ABCD犬猫编号01，02，03 04，05，06 07，08，09 10，11，12复合制剂服用不服用服用不服用

1.3.2 检测方法

所有12只实验动物试验前后进行全血血常规检查和血清学检查，记录血常规红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数及血小板计数，并依据中性粒细胞、淋巴细胞及血小板计数分别计算NLR 和PLR。用药5 h后（记录第0天）、使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂后第1天、第2天、第3天、第5天、第7天对犬猫采血，制备血清，对血清中ALKP（碱性磷酸酶）、ALT（丙氨酸氨基转移酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）、TBIL（总胆固醇）、UREA（尿素）、CREA（肌苔）、TP（总蛋白）、ALB（白蛋白）、PHOS（隣）、CA（钙）、GLU（葡萄糖）等指标按试剂盒说明书进行检查。

血清总抗氧化能力（T-AOC）检测方法为根据标准样品曲线以标准物的浓度（标准物由试剂盒公司提供，标准品浓度为8 U/ml，依次倍比稀释为4 U/ml、2U/ml、1U/ml 和0.5 U/ml，分別为5 号标准品、4 号标准品、3 号标准品、2 号标准品和1 号标准品）为纵坐标，OD 值为横坐标，根据测定的标准样品值绘出标准T-AOC曲线，得出OD值和浓度的曲线公式，再根据公式依据样品测出的OD值计算出样品T-AOC的浓度，并分析结果。

2 结果与分析

2.1 临床检查

实验动物在疾病状态下，饮食量低，无力，粪便成型较差，部分犬猫出现呕吐腹泻现象，而使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂治疗组病犬猫饮食量低，无力现象明显恢复，呕吐腹泻犬猫数量大为减少。

2.2 血常规检查

取实验犬猫前肢静脉血样，经血细胞分析和血清生化检查分析结果显示：经过使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂治疗组的病犬猫NLR 和PLR值显著升高，与不服用药物组差异显著（表2 P＜0.05），且连续服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂5 d，白细胞浓度最高；而谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂治疗后红细胞、血红蛋白、MCV、嗜酸性粒细胞、血小板的浓度与不服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂药物组差异不显著（P＞0.05）。ALT、AST 、TBIL 、UREA、CREA、TP、ALB、PHOS、CA、GLU 与不服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂药物组差异不显著（P＞0.05）。

组别动物种类例数ABCDP值犬犬猫猫6666 NLR 5.15±0.47 2.09±0.76 4.4±0.35 2.7±0.54＜0.001 PLR 243±26 115±38 198±17 124±6＜0.001

2.3 实验动物分别于使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂、未使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂后第3天、第5天、第7天进行血清T-AOC检测OD结果

依据试剂盒操作步骤，绘制T-AOC 检测标准曲线（图1），完成样品的OD 值检测，将所检测出的OD 值根据标准样品曲线，计算出相对应的血清中T-AOC 浓度值，将第3 天、第5 天、第7 天的相关数据进行统计学分析，如表2,表3和表4所示。

组别（5 d）ABCD A1 0.011 0.583582 0.031139 B-1 0.008261 0.006389 C--1 0.07172 D---1

组别（7 d）ABCD A1 0.004359 0.011263 0.28402 B-1 0.000291 0.003336 C--1 0.156177 D---1

组别（14 d）ABCD A1 0.000429 0.026649 0.385171 B-1 0.000276 0.000127 C--1 0.138905 D---1

实验中，A 组浓度曲线在0～7 d 维持在高水平，直至稳定;C 组曲线先高后低，之后保持稳定，机体在造模后的0～3 d，T-AOC 浓度逐渐升高，对于机体在肝损伤初期起到很好的保护作用，当3～14 d之后慢慢下降趋于稳定，是机体稳定之后的表现；D 组曲线先低后高，之后保持稳定，机体在造模初期0～5 d 抗氧化能力降低，在5～14 d 机体抗氧化能力逐渐升高且趋于稳定；B组曲线呈一直下降趋势，机体损伤严重，抗氧化水平持续降低。

通过相关性分析发现：T-AOC浓度变化在3 d后各组出现差异，在生物统计上，造模后5 d，A组与B组和D组差异显著（P＜0.05），B组与C组和D组差异极显著（P＜0.01）；造模后7 d，A 组与B 组差异极显著（P＜0.01），和D 组差异显著（P＜0.05），B组与C组和D组差异极显著（P＜0.01）；造模后14 d，A组与B组差异极显著（P＜0.01），和C组差异显著（P＜0.05），B组与C组和D组差异极显著（P＜0.01）。

2.4 结果分析

A组、C组分析：因为使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂组犬猫其T-AOC在一周左右升高至稳定水平，表明A组、D 组保持机体高的总抗氧化能力，并在5 d、7 d 与A 组、C组差异极显著（P＜0.01），表明谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂能提高机体抗氧化能力，修复肠黏膜。

B组、D组分析：有使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂，T-AOC在3 d左右上升缓慢，机体总抗氧化能力恢复弱。

3 讨论

血常规是临床常用的生化化验检查之一，具有经济、便捷等优点，白细胞计数对机体急慢性炎症反应的敏感性较高，但特异性较差。多项研究表明，NLR 和PLR 可以有效反映机体的免疫状态。炎症反应时，淋巴细胞减少，中性粒细胞呈上升趋势，NLR 可同时反映两者的变化。NLR和PLR在肿瘤和心血管疾病患者预后评估中具有良好的应用价值，并与多种自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮、干燥综合征等）的活动相关。

该研究对患犬猫服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂后检测外周血PLR、NLR指标，结果发现，经过使用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂治疗组的病犬猫NLR 和PLR值显著升高，与不服用药物组差异显著，表明谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂在治疗犬猫相关类疾病时可以通过上调病犬猫的PLR 和NLR 进而发挥治疗性作用。

血清中T-AOC的含量可以反映机体脂质过氧化的程度，间接反映出组织、细胞损伤的程度。实验犬猫的进食量及精神状态反映出谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂对机体能力的恢复表现，在该试验中，试验犬在服用谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂后，从第3天开始，其血清T-AOC开始提升至正常值，表明受损细胞在恢复，而在使用后期，亦呈此趋势，说明谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂进入体内后，经肝脏药物代谢酶代谢后产生了自由基，引起白细胞值下降，血清T-AOC趋于正常值。

谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂中含有的有效成分是谷氨酰胺、溶菌酶，有试验结果表明，谷氨酰胺与溶菌酶复合制剂可以通过降低机体T-AOC的含量能够改善全身炎症反应综合征（SIRS）的程度及预后，还可改善肠黏膜屏障通透性，并可以使患犬生存率提高，参与机体多种免疫反应，在机体正常防御功能和非特异性免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用。