双黄蓝抗病毒口服液质量标准的定性研究

罗 跃（浏阳市人民医院 浏阳 410300）

双黄蓝抗病毒口服液，在我院使用已有15年历史，该口服液有良好的抗流感病毒作用,且不易产生耐药性,毒副作用小,临床上主要用于治疗呼吸道感染 、小儿病毒性肺炎 、急性扁桃体炎等病毒性疾病 ，具有显著的疗效。处方由大青叶、银花、蚤休、连翘、山茶根、黄连、北柴胡、喇叭花子、板蓝根、射干、蒲公草、甘草组成。君药：大青叶、银花、板蓝根。臣药蚤休、连翘。使药为甘草。功效为清热解毒，祛湿，凉血。通过薄层层析实验对银花、连翘、大青叶、黄芩进行定性鉴别，更好地建立全面完善的质量标准提供依据,有利于提升该产品的质量。为控制该口服液质量及临床安全用药提供了保障。

1 仪器与材料

仪器：ZF-C型三用紫外分析仪（上海康禾光电仪器有限公司）、定量毛细管、数显恒温水浴锅（金坛市城东新瑞仪器厂）、超声波清洗器。LD-2A型离心机（北京医用离心机厂）；硅胶G预制薄层板；所用对照药材与实验用试剂为：对照品绿原酸（中国食品药品检定研究院，批号：110753-201415）、连翘苷（中国食品药品检定研究院，批号：110821-200610）、靛玉红（中国食品药品检定研究院，批号：110717-201504），当归（中国食品药品检定研究院，批号：120927-200512），黄芩苷（中国食品药品检定研究院，批号：110715-200815）；自制纯化水，所有试剂为分析纯。

2 浓缩液的制备

以上十二味中药饮片，加水煎煮2次，第一次煎煮的时间为2 h，第二次煎煮的时间为1 h，将2次煎液混合，经滤网滤出，滤过的液体进一步浓缩，使其密度约为1.02（40℃）的浸膏，将95%乙醇加入浓缩液，使浓缩液的含乙醇量达到65%，放置于冷处24 h。将上清液进行加热，使乙醇挥发至没有乙醇味，加入蔗糖68 g，向上清液中加水至1000 mL，静置24 h，滤过，取得浓缩液。

3 供试液的制备

3.1 银花药品液，对照液的制备：取本品浓缩液10 mL置蒸发皿中，至水浴锅中挥干，往蒸发皿中加入5 mL乙醇使其溶化，滤过，将滤液经过蒸锅进行浓缩，浓缩液至约2 mL时收取液体，将此浓缩液作为供试品溶液备用。将对照品绿原酸加入乙醇溶液，溶解制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液

3.2 连翘药品液，对照液的制备：取本品浓缩液50 mL，浓缩至约5 mL，加硅藻土5 g，搅拌均匀，干燥，加乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，经滤斗过滤，所得的液体置蒸发皿中并放于水浴锅中挥干，加入1 mL甲醇至蒸发皿中使其溶解，将此液体当作供试品溶液。称取对照品连翘苷置于量瓶中，在量瓶中加入甲醇稀释成浓度为1 mg/mL的溶液，将此溶液当作对照品溶液。

3.3 大青叶药品液，对照液的制备：取本品浓缩液，加三氯甲烷40 mL，至冷凝回流装置中加热1 h，将三氯甲烷液分离取出，将其在水浴锅中浓缩到液体1 mL，并将此溶液当作供试品溶液。将靛玉红对照品称量至量瓶中，将三氯甲烷加入量瓶稀释成浓度为1 mg/mL的溶液，并将此作为对照品溶液。

3.4 黄芩药品液，对照液的制备：取本品浓缩液50 mL，加乙醚振摇提取2次，单次30 mL，将乙醚液体去除，水液加盐酸调节pH至2～3，将乙酸乙酯与上步提取液混合置于分液滤斗中不断摇动提取2次，每次提取使用乙酸乙酯30 mL，将两次乙酸乙酯液体合并盛于蒸发皿中，并置于水浴锅中挥干，将1 mL甲醇加入蒸发皿中使其溶解，将此溶解液体作为供试品溶液备用。将对照品黄芩苷置于量瓶中，将一定体积的甲醇稀释配制成浓度为1 mg/mL的溶液，将此溶液当作对照品溶液。

3.5 阴性对照液的制备：取缺银花、连翘、大青叶、黄芩的双黄蓝抗病毒口服液药材，分别按照浓缩液制备下的制备工艺，制成浓缩液，分别按照样品液制备方法制成银花阴性对照液、连翘阴性对照液、大青叶阴性对照液、黄芩阴性对照液。

4 薄层色谱条件与结果

4.1 银花的定性鉴别：依据TLC法（2015年版《中国药典》第四部收录的通则0502）中的规范进行操作，用移液管将三种溶液各吸取10 μL，在硅胶G薄层板同一水平线上点样，将乙酸丁酯-甲酸-水（70∶25∶25）的上层溶液加入层析缸，让溶剂向上展开至薄层板2/3，将硅胶G薄层板取出，并置于室温中晾干，选择365 nm的紫外光灯下进行斑点的鉴别。在硅胶G薄层板中供试品与对照药材相应的位置，显示同样颜色的荧光斑点。在对应位置空白对照液没有此斑点。定位Rf=0.45。结果见图1。

4.2 连翘的定性鉴别：依据TLC法（2015年版《中国药典》第四部收录的通则0502）中的规范进行操作，用移液管将三种溶液各吸取10 μL，在硅胶G薄层板同一水平线上点样，将三氯甲烷-甲醇（20∶3）的上层溶液加入层析缸，让溶剂向上展开至薄层板2/3，将硅胶G薄层板取出，并置于室温中晾干，用10%的硫酸乙醇溶液喷向薄层板，并将板加热（105℃）至显示清晰颜色的斑点。将板放置于日光下鉴定。在硅胶G薄层板中供试品与对照药材相应的位置，显示同样颜色的荧光斑点。在对应位置空白对照液没有此斑点。定位Rf=0.38。结果见图2。

4.3 大青叶的定性鉴别：依据TLC法（2015年版《中国药典》第四部收录的通则0502）中的规范进行操作，用移液管吸取供试品溶液、空白对照液各10 μL，对照品溶液5 μL，在硅胶G薄层板同一水平线上点样，上层溶液加入层析缸，让溶剂向上展开至薄层板2/3，将硅胶G薄层板取出，并置于室温中晾干，选择365 nm的紫外光灯下进行斑点的鉴别。在硅胶G薄层板中供试品与对照药材相应的位置，显示同样颜色的荧光斑点。在对应位置空白对照液没有此斑点。定位Rf=0.48。结果见图3。

4.4 黄芩的定性鉴别：依据TLC法（2015年版《中国药典》第四部收录的通则0502）中的规范进行操作，用移液管将三种溶液各吸取10 μL，在硅胶G薄层板同一水平线上点样，将乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）的上层溶液加入层析缸，让溶剂向上展开至薄层板2/3，将硅胶G薄层板取出，并置于室温中晾干，用2%三氯化铁乙醇溶液喷在薄层板上。将板放置于日光下，在硅胶G薄层板中供试品与对照药材相应的位置，显示同样颜色的荧光斑点。在对应位置空白对照液没有此斑点。空白对照液无此斑点。定位Rf=0.32。结果见图4。

5 结论

本实验中双黄蓝抗病毒口服液：银花的鉴别：展开剂曾尝试使用三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）作为展开剂[1]，阴性出现干扰，分离效果不理想。后采用以乙酸乙酯一甲酸一水（10∶1.6∶2.4）[2]为展开剂，出现明显拖尾现象.后以乙酸丁酯-甲酸-水（70∶25∶25），分离效果好。

连翘的定性鉴别：展开剂曾用三氯甲烷一甲醇（8∶1）展开[3]，斑点没有分离出来，达不到鉴别效果。后尝试乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）展开，存在很明显的拖尾现象。后通过极性调整展开剂采用三氯甲烷-甲醇（20∶3）为展开剂分离效果好。

大青叶的定性鉴别：曾尝试使氯甲烷-乙醇-浓氨水（7.5∶7.5∶1），展开[4]，阴性存在干扰，后改用环己烷-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶2）为展开剂，阴性存在干扰[5]，以环已烷-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶2）为展开剂达到了预期效果。

黄芩的定性鉴别：曾尝试醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）为展开剂[6]，阴性存在干扰，后调整展开剂改为醋酸[7]，分离效果不明显。使极性增大改为以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，分离效果明显，达到了定性鉴别的目的。

本实验通过对展开剂进行摸索，找到了最佳的展开剂及配比，使得各种药材的有效成分得到了很好的分离，使该中药制剂的质量控制得到了很好的保障。下一步可联合高效液相色谱法，对双黄蓝抗病毒口服液建立指纹图谱，进一步提升中药制剂的质量控制水平。