CMIA方法筛查儿童抗梅毒特异性抗体结果的解读

宋秦伟，王娅琳，刘智圆，张 易，高 爽，马丽娟

(首都儿科研究所附属儿童医院 检验科, 北京 100020)

梅毒(syphilis)是由苍白密螺旋体(treponema pallidum,TP)又称梅毒螺旋体引起的一种常见的性传播疾病，主要通过性接触传播，亦可通过母婴垂直和血液传播[1]。检测TP作为临床常规筛查项目，其检测方法种类繁多。血清学检测TP是诊断TP的主要实验室方法[2]，其中临床常用的检测方法主要包括：快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test,RPR)和甲苯胺红不加热血清试验(tolulized red unheated serum test,TRUST)等非特异性抗体筛查试验以及酶联免疫吸附试验、梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle agglutination assay,TPPA)、化学发光法、荧光抗体吸收试验和免疫印迹法(Western blot)等特异性抗体筛查和确认试验[3-4]。化学发光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)具有灵敏性高、重复性好、自动化程度高等优点，易于大样本量筛查检测，已广泛应用于临床实验室。然而，临床检测中，时常出现假阳性结果[5-6]。其结果解读给临床带来一定的困惑。尤其对于儿童群体，涉及的家庭人群范围更广，对家庭的影响也更大。如何排除假阳性和正确解读结果具有重要意义。本研究将CMIA方法筛查出的阳性结果(S/CO>1)的儿童血清样本，通过其他检测方法进行复检和分析，探讨对该检测结果的准确解读，以指导临床诊断。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 一般资料:2018年7月至2019年6月，首都儿科研究所附属儿童医院23 038例门诊和住院患儿采用CMIA方法进行TP抗体筛查。CMIA阳性(S/CO>1)141例，男94例，女47例，平均年龄2.7岁(1天～15.5岁)。此研究经首都儿科研究所医学伦理委员会批准(伦理审批编号：SHERLL2017029)，并取得所有涉及此项研究患者监护人的知情同意。

1.1.2 试剂和试剂盒:仪器配套的CMIA法用抗梅毒螺旋体抗体试剂(美国雅培公司)；TPPA试剂盒(日本富士株式会社)；TRUST试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司)；Western blot用TP-IgG抗体检测试剂盒和TP-IgM抗体检测试剂盒(德国欧蒙医学实验诊断股份公司)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集：采集空腹静脉血2 mL，3 500 r/min离心10 min，分离血清，完成CMIA初筛检测，初筛阳性样本于当天完成TPPA和TRUST方法复检，剩余血清样本-80 ℃分装冻存，用于Western blot方法检测。

1.2.2 4种方法检测TP抗体：CMIA方法用全自动免疫分析仪，仪器工作正常、质控在控等条件下，按照仪器操作说明进行检测；TPPA方法、TRUST方法和Western blot均需将4 ℃冷藏保存试剂盒平衡室温后使用，所有检测操作和结果判定均按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学分析

分析采用SPSS18.0软件，计数资料采用百分率表示，率的比较采用卡方检验。

2 结果

2.1 CMIA方法筛查阳性率及其他检测方法复检结果

CMIA方法阳性(S/CO>1)141例，阳性率为0.61%(141/23 038)；复检结果：TRUST阳性2例(1.42%，2/141)，TPPA阳性7例(4.96%，7/141)，IgG阳性13例(9.22%，13/141)，可疑8例(5.67%，8/141)，IgM阳性6例(4.25%，6/141)，可疑4例(2.83%,4/141)(表1)。

表1 141例 CMIA方法筛查阳性样本其他检测方法复检结果Table 1 Retest results of 141 CMIA positive samples by other testing methods(n)

2.2 按S/CO值分组验证CMIA筛查阳性结果

S/CO值大于10，共有11例，其中7例TPPA阳性(同时2例TRUST阳性)；S/CO值≥10组，其他各方法复检阳性符合率均明显高于S/CO值为1～10组(均P<0.05)(表2)。

表2 不同S/CO值分组其他复检方法检测结果Table 2 Test results of other methods in different S/CO value groups

2.3 11例S/CO值≥10病例临床资料和检测结果

81.82%(9/11)的病例年龄小于6个月，父母均有TP病史，且IgG均为阳性；编号11号病例年龄最大为9岁，其父母均为现症病例，该病例被确诊现症感染；编号10号病例年龄2.3岁，其他方法复检均为阴性，该病例临床诊断为川崎病，CMIA方法同时检测丙型肝炎病毒抗体结果亦为阳性(S/CO>1)，其S/CO值为3.4，通过其他检测方法和临床资料已排除梅毒和丙肝感染，考虑为自身免疫性疾病引起的假阳性(表3)。

表3 11例S/CO值≥10病例临床资料和检测结果汇总Table 3 Summary of clinical data and test results of 11 cases with S/CO value ≥ 10

3 讨论

目前血清学检测是临床诊断TP感染的主要实验室检测方法，可分为非特异性(TRUST)和特异性(CMIA、TPPA和Western blot)抗TP抗体试验[7]。CMIA方法灵敏性高、重复性好、自动化程度高，不区分IgG和IgM抗体类型，时常出现假阳性结果[3,5-6]。TRUST方法中的定性结果，可用于现症TP诊断；定量结果可用于疗效观察和判定是否治愈。然而，很多疾病或生理状态可导致假阳性[8-9]，如单核细胞增多症、病毒性肺炎和肝损伤等。TPPA方法能够测定抗体效价，特异性强，敏感性略低；不能区分IgG和IgM抗体类型；且不能自动化检测，条件受限实验室可用于确认试验[10-11]。Western blot特异性强，灵敏性高，可分别检测IgG和IgM抗体，但操作复杂，不利于大样本量检测，主要用于确认试验[8,10]。这些检测方法均不能完全满足临床诊断和疗效观察的高敏感性，高特异性且操作简便的需求，多种检测方法的联合应用是最好的解决途径。

本研究显示，CMIA方法在儿童病例中的TP初筛阳性率(0.61%)明显低于成人(2.0%～4.5%)[11-12]，这归因于TP的主要传播途径是性传播。CMIA方法检测结果的S/CO值越大，其他方法复检的阳性符合率越高，被诊断为TP感染的可能性越大。本实验室的结果显示，S/CO值≥10可作为一个临界值，用于预判TP感染，S/CO值≥10再结合父母有TP病史，可以确定儿童血清样本中存在抗TP抗体，但不能断定是TP感染。由于检测人群的不同以及仪器、试剂和环境等差异，各实验室应该建立自己实验室的临界值[6,10-12]，用于结果预判和复检规则的设定。儿童的年龄对临床诊断亦有重要参考价值，本研究显示，6个月以下婴幼儿及新生儿，母传IgG抗体的可能性最高，需要复检IgM抗体，IgM抗体阳性对先天TP感染的确诊有重要意义[13-15]，但IgM抗体阴性不能排除胎传TP感染，需要后期随访复检。另外，存在自身免疫性疾病等特殊病症引起的假阳性情况，需要结合临床症状，父母病史进行排除。CMIA方法TP初筛阳性，需要采用其他检测方法复检，建议采用Western blot复检，条件受限实验室可用TPPA方法，但要考虑到其灵敏性稍低可能会存在假阴性。由于本研究存在一定的局限性，如阳性样本量较小，需要继续积累增加样本量，以便更加深入的探讨。

总之，CMIA方法用于儿童群体的TP筛查检测，S/CO值<10时存在假阳性的比率较高，建议用Western blot或TPPA方法复检；其父母的梅毒病史是必须考虑的要素，还要考虑患儿年龄。儿童TP感染诊断比成人更加复杂，做出明确诊断需要慎重，除考虑上述几种因素和正确解读实验室检测结果，还要充分结合其他临床资料进行综合判断。