CK-MB、CT-1、cTnT在新生儿缺氧损伤心肌细胞中的表达水平及其临床意义

胡雪梅，张彩云，王 敏

新生儿窒息(NA)是指胎儿由于缺氧而发生宫内窘迫、娩出过程中发生呼吸系统障碍所导致的生后1 min内无自主呼吸或未能建立规律呼吸的儿科常见危急重症，NA发生后心功能受到损害而导致心排出量减少，最后可引起多器官损害及功能障碍，是引起围产儿死亡的重要因素[1-2]。故早期诊断NA患儿出现心肌损害的程度，并给予积极抢救和正确处理，是降低新生儿死亡率及预防远期后遗症的关键。心肌损害可以通过检测缺氧损伤的心肌细胞中血浆标志物的表达水平进行早期诊断和评估[3]。常见的心肌细胞血浆标志物包括血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌营养素-1(CT-1)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)等，但现有研究多是关于其中1种或两种联合其他指标对NA患儿的影响，关于三者联合检测对NA患儿影响的研究报道甚少[4-5]。本研究以河南省煤炭总医院心内科就诊的90例NA患儿以及90例在河南省煤炭总医院分娩的足月健康新生儿为研究对象，进一步探究CK-MB、CT-1、cTnT在缺氧损伤的心肌细胞中的表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 将2017年6月—2019年3月在河南省煤炭总医院心内科就诊的90例NA患儿纳入缺氧心肌损伤组，男47例，女43例；胎龄36～42(38.92±1.04)周；剖宫产54例，自然分娩36例；体重3.03～3.90(3.52±0.32)kg。将患儿按照心肌损伤程度标准[6]分为轻度窒息心肌损伤组(28例)、中度窒息心肌损伤组(32例)、重度窒息心肌损伤组(30例)，按照是否存活分为死亡组(15例)、存活组(75例)。纳入标准：①符合《实用新生儿学》《实用儿科学》中关于NA以及心肌损伤的相关诊断标准[7-8]；②心肌损伤经超声心动图检查确诊；③无营养不良；④无围产期缺氧缺血病史。排除标准：①宫内感染、全身感染等感染性疾病者；②合并水、电解质、激素代谢紊乱者；③伴有先天性心脏病、中枢神经系统畸形等器质性疾病者；④母亲有感染性、代谢性疾病者。另选取90例在我院分娩的足月健康新生儿作为对照组，查体无任何疾病或生理异常，其中男50例，女40例；胎龄37～41(38.42±1.31)周；剖宫产52例，自然分娩38例；体重3.44～4.16(3.62±0.40)kg。各组患儿的性别、胎龄、分娩方式、体重等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有患儿家属均对本研究知情同意，并经医院伦理委员会审核通过。

1.2 检测方法

1.2.1 血液样本制备 分别于出生第1天、第3天、第5天抽取缺氧心肌损伤组患儿及对照组健康新生儿的清晨空腹静脉血3 mL，置于乙二胺四乙酸抗凝管抗凝，采用离心机(型号：KL05A，湖南凯达科学仪器有限公司)进行离心分离，3 000 r/min、5 min，留取血浆，-20 ℃保存待测。

1.2.2 血浆CK-MB、CT-1、cTnT检测 采用酶联免疫吸附测定法检测血浆CK-MB、CT-1、cTnT水平，所用仪器为DNM-9606酶标分析仪(北京普朗医疗器械公司)，CK-MB试剂盒均购自北京科美生物技术有限公司，CT-1试剂盒均购自上海心语生物科技有限公司，cTnT试剂盒均购自海将来实业股份有限公司。操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 各组新生儿CK-MB水平比较 对照组出生第1天、第3天、第5天血浆CK-MB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。出生第1天、第3天重度窒息心肌损伤组、中度窒息心肌损伤组血浆CK-MB水平高于轻度心肌损伤组及对照组，而出生第3天轻度窒息心肌损伤组血浆CK-MB水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。出生第5天对照组、轻度窒息心肌损伤组与中度窒息心肌损伤组血浆CK-MB水平恢复至正常水平，而重度窒息心肌损伤组血浆CK-MB水平仍高于其余各组，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 各组新生儿血浆CK-MB水平比较 (±s) 单位：ng/mL

2.2 各组新生儿cTnT水平比较 对照组出生第1天、第3天、第5天血浆cTnT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。出生第1天、第3天重度窒息心肌损伤组、中度窒息心肌损伤组血浆cTnT水平高于轻度窒息心肌损伤组及对照组，而轻度窒息心肌损伤组血浆cTnT水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。出生第5天重度窒息心肌损伤组血浆cTnT水平仍高于其余各组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 各组新生儿血浆cTnT水平比较 (±s) 单位：pg/mL

2.3 各组新生儿CT-1水平比较 对照组出生第1天、第3天、第5天血浆CT-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。出生第1天、第3天重度窒息心肌损伤组、中度窒息心肌损伤组血浆CT-1水平高于轻度心肌损伤组及对照组，而轻度心肌损伤组血浆CT-1水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。出生第5天轻度窒息心肌损伤组、中度窒息心肌损伤组血浆CT-1水平恢复至正常水平，而重度窒息心肌损伤组血浆CT-1水平仍高于其余各组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 各组新生儿血浆CT-1水平比较 (±s) 单位：ng/L

2.4 住院期间NA患儿预后情况比较 90例NA患儿住院期间死亡15例，均为重度窒息心肌损伤患儿，死亡患儿血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平高于存活患儿，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

表4 住院期间NA患儿预后情况比较 (±s)

3 讨 论

NA是出生后最常见的紧急情况，主要病理、生理改变为低氧血症、高碳酸血症和酸中毒，可导致多器官及系统缺氧损伤，其并发心肌损害的概率高达40%～70%，NA并发心肌损害者病死率则高达30%[9-10]。心肌细胞以有氧代谢为主，对缺氧非常灵敏，NA发作后，心肌供氧量下降，其能量供应主要依靠葡萄糖无氧代谢，会大量产生乳酸，出现细胞内酸中毒，导致心肌功能下降，三磷酸腺苷(ATP)减少，Na+-K+-ATP酶供能障碍，导致心肌损伤，最终可引起心力衰竭而危及患儿生命。由于新生儿心肌细胞修复和再生能力较强，若及时诊断并进行早期干预，可改善器官血供，修复受损心肌细胞[11-12]。心肌损害标志物检测是重要的诊断指标，本研究发现血浆CK-MB、CT-1、cTnT与NA的发生发展具有密切关系。

本研究结果显示，对照组出生第1天、第3天、第5天血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，而缺氧心肌损伤组出生第3天血浆CK-MB、CT-1水平达到峰值，出生第1天、第3天重度窒息心肌损伤组、中度窒息心肌损伤组血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平高于轻度窒息心肌损伤组及对照组。出生第5天重度窒息心肌损伤组血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平仍高于其余各组，说明随着NA患儿病情加重，血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平逐渐升高，三者均可在一定程度上反映NA患儿心肌损害的严重程度。其中，CK-MB属于肌酸激酶(CK)的一种，主要存在于心肌细胞胞质中，与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生等均有直接关系，心肌损伤患儿缺氧造成细胞代谢功能和结构异常，致其水平升高[13]。孔凡玲等[14]研究亦得到了与本研究相似的结果，但值得注意的是，也有部分研究指出，在急、慢性骨骼损伤疾病中或剧烈运动后CK-MB水平仍可升高，临床易出现假阳性升高，应当在患儿无骨骼损伤或剧烈行动时才能以其作为心肌损伤程度的特异性指标[15]。cTnT同样只以游离和复合物的形式存在于心肌细胞中，尤其适用于NA心肌损伤的早期诊断和追踪，在不同年龄、性别人群中cTnT水平都比较稳定，当心肌发生缺氧或缺血后，心肌细胞损伤，细胞膜受到损害，cTnT即可释放入血，使血浆cTnT水平升高，既往研究亦指出其在心肌损害的早期诊断中敏感性和特异性均较高[16]。CT-1则是一种对心脏具有保护作用的血浆标志物，主要存在于心脏组织中，刁玉巧等[17]研究中提到，窒息可导致大鼠心肌及外周血浆CT-1水平明显升高，这与本研究结果一致。NA发生后患儿由于缺氧、酸性中毒等，容易刺激交感神经，促进去甲肾上腺素及血管紧张素的分泌，进一步促使CT-1释放，心肌损伤越严重，血浆CT-1水平越高[18]。

正常情况下心肌细胞主要靠分解游离脂肪酸获取能量，NA发生后，心肌细胞缺氧、缺血，抑制脂肪酸分解，ATP产生减少，体内能源匮乏，加剧无氧代谢，可诱发代谢性酸中毒；还可能出现水肿而导致内皮细胞功能降低，心肌灌注水平降低，冠状动脉微血管阻力增加，粥样斑块破裂形成微血栓，阻塞远端心肌微血管，加剧心肌坏死，进一步影响心脏正常的收缩和扩张，降低心脏泵血功能，心搏出量逐渐降低，甚至引起循环衰竭，严重影响患儿的预后[19]。本研究结果显示，90例NA患儿中住院期间死亡15例，均为重度窒息心肌损伤患儿，NA死亡患儿血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平高于存活患儿，提示血浆CK-MB、cTnT、CT-1水平越高，预后越差。因心肌缺氧导致钠泵和钙泵功能障碍，机体水、钠大量潴留，心肌细胞钙内流增多，再加上无氧代谢导致能量供应不足，核蛋白从粗面内质网脱落引起蛋白质和酶等物质合成减少，细胞膜通透性大大升高，屏障和转运功能丧失，CK-MB、cTnT、CT-1心肌损伤标志物大量释放入血，致其在血浆中的水平升高，因此，特异性和敏感性较好的心肌损伤标志物在缺氧损伤心肌细胞中表达水平检测对NA合并心肌损伤的早期诊断具有重要价值，对于改善预后至关重要[20-22]。

综上所述，早期检测缺氧损伤的心肌细胞中血浆CK-MB、cTnT、CT-1表达水平有助于对NA患儿心肌损伤严重程度及预后进行有效评估，且临床应用价值较高。