赤芍总苷与百合总皂苷联合应用抗抑郁作用研究

王英军，孙英莲

（吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012）

抑郁症是一种情感性精神疾病，在临床上主要表现为心境低落、思维迟缓、认知功能损害、意志活动减退以及躯体症状等[1-2]。据世界卫生组织报告，目前抑郁症是全球第四大疾病，中国抑郁症患者高达7 000万，保守估计有2 亿人在一生中需要接受专业的心理咨询或心理治疗[3]。预计2020 年抑郁症将跃居仅次于心脏病为第二大疾病。目前，治疗方法主要有电抽搐、心理疗法及药物治疗。百合具有调节机体免疫系统、内分泌系统、神经系统和糖代谢等药理作用[4]，赤芍总苷具有改善异常血液流变、抗血小板聚集、抗血栓形成等作用，在神经精神疾病研究中，芍药苷也具有明显的神经保护作用，有广阔的研究前景。目前，国内外对于二者的联合在抗抑郁方面的应用尚未见报道。本研究通过对抑郁模型大鼠连续灌服赤芍总苷/百合总皂苷混合制剂（2∶1），观察其对试验大鼠的糖水消耗率、单胺类递质及海马中BDNF 蛋白表达量的影响，探讨赤芍总苷/百合总皂苷混合制剂抗抑郁作用及其可能的作用机制，为今后临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 赤芍总苷为浅黄棕色粉末，以总皂苷计算纯度为 58.02%，百合皂苷为棕黄色粉末，以总皂苷计算纯度为59.37%，由吉林省中医药科学院化学室提供。经前期筛选试验得知，赤芍总苷/百合总皂苷的最佳配比为 2∶1，临用时以蒸馏水配成所需浓度。

1.1.2 动物 健康SD 大鼠，雌雄各半，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供〔许可证号：SCXK-（辽）2015-0001〕。

1.1.3 试剂 大鼠5-羟色胺（5-HT）Elisa 试剂盒（产品编号：MEXN-R1033，批号：20191103）、大鼠去甲肾上腺素（NE）Elisa 试剂盒（产品编号：MEXN-R0617，批号：20191103）（上海美轩生物科技有限公司）；鼠脑源性神经营养因子Elisa试剂盒（产品货号：Ml302829-1，批号：20191110，上海酶联生物科技有限公司）。

1.1.4 仪器 T-1000 型电子天平（常熟双杰测试仪器厂）；D3024R高速低温离心机（美国SCILOGEX公司）；ST-360 酶标仪（上海科华实验系统有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠糖水消耗率的影响 选用 60 只健康SD 大鼠，雌雄各半，随机分为对照组、模型组、百合总皂苷组、赤芍总苷组、赤芍总苷/百合总皂苷高剂量组及赤芍总苷/百合总皂苷低剂量组，每组10 只。除对照组外，其他5 组进行慢性轻度不可预见应激刺激造模，刺激内容有单笼饲养大鼠，每天连续给予一种不同刺激：禁食（24 h）、禁水（24 h）、潮湿垫料（24 h）、照明（24 h）、夹尾（1 min，距尾根1 cm）、束缚（2 h）、冷水游泳（4 ℃，5 min）、高温环境（40 ℃，5 min）及鼠笼倾斜（45 ℃，24 h）等，每天选取一种刺激，每个刺激使用不超过2次，连续进行21d。造模同时每天灌胃给药1次，对照组与模型组给予同体积蒸馏水10mL/kg，赤芍总苷组给予50 mg/kg 赤芍总苷、百合总皂苷组50 mg/kg 百合总皂苷、赤芍总苷/百合总皂苷高剂量和赤芍总苷/百合总皂苷低剂量组分别给予赤芍总苷/百合总皂苷混合制剂50、25mg/kg，给药体积均为10mL/kg，每7 d 称量1 次体重，在造模前1 d 和造模第21 天禁食禁水14 h 后，每笼添加同体积的饮用水和1%蔗糖水各 1 瓶，30 min 后，互换两瓶水的位置，1 h 后取两瓶水称量。计算每组动物的糖水消耗率（糖水消耗率=糖水消耗/总液体消耗 100）[5]。

1.2.2 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠5-HT、NE 和BDNF 含量的影响 造模给药同“1.2.1”。末次给药后，用10%的水合氯醛腹腔麻醉，打开腹腔腹主动脉采血，采用 ELISA 法测定大鼠血清5-HT 及NE 含量，严格按照试剂盒说明操作。取血后处死大鼠，称量大鼠海马组织20 mg，加预冷的生理盐水制成10%的组织匀浆，4 ℃3 000 r/min 离心10 min，取上清液严格按照试剂盒说明操作，在450 nm 波长处测定BDNF 的OD 值，通过绘制标准曲线求出样本中的BDNF 浓度[6-8]。

2 结果与分析

2.1 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁模型大鼠体重变化的影响

由表1 可知，造模前至第7 天，各组间大鼠体重无显著差异（P ＞ 0.05）；第 14 天，MX 组较 CK 组体重显著降低（P ＜ 0.05），第21 天，大鼠体重各组间有显著差异（P ＜ 0.05），其中模型组与对照组比较大鼠体重显著降低（P ＜0.01），接受药物治疗21 d 后，给药组大鼠受到削弱的体重增长得到恢复，说明各给药组能够迅速恢复由于刺激引起的体重增长的停滞。

2.2 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠糖水偏好的影响

由表2 可知，模型组糖水偏好均明显低于对照组（P ＜0.01），表明抑郁模型成立。接受赤芍总苷、百合总皂苷和赤芍总苷/百合总皂苷联合应用治疗的大鼠其糖水摄入量与模型组比较具有显著差异（P ＜0. 01）。说明单独用药和联合应用组能够恢复CMS 引起的大鼠糖水摄入量的减少，缓解抑郁大鼠的快感缺乏症状，从而产生抗抑郁作用。

表1 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠体重变化的影响Table 1 Effect of total saponins of Paeonia /total saponin of Lilium on weight change of depression rats

表2 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠糖水消耗率的影响Table 2 Effect of total saponins of Paeonia / total saponin of Lilium on sugar water preference in depressed rats

2.3 赤芍总苷/百合总皂苷对抑郁大鼠 5-HT、NE 和BDNF 的影响

由表3 可知，模型组5-HT、NE 和BDNF 含量明显降低，通过药物干预后，赤芍总苷组能够增加5-HT和NE 含量，百合总皂苷组能够增加5-HT 含量，二组单独用药虽然均能增加BDNF 含量但无统计学意义。而赤芍总苷/百合总皂苷联合应用组较单独用药组能够显著增加 5-HT、NE 和 BDNF 含量（P ＜ 0.01）。

表3 赤芍总苷/百合总皂苷对大鼠血清中 5-HT、NE 和脑中 BDNF 的影响Table 3 Effect of total saponins of Paeonia / total saponin of Lilium on serum 5-HT, NE and brain BDNF in rats

3 讨论

据统计抑郁症在我国近30 年发病率急剧上升，具有高发病率、高自杀率及低治疗率等特点。研究者对抑郁患者进行了10 年追踪研究发现，医院对抑郁症的识别率不足20%，只有不到10%的患者接受了相关的药物治疗，可见其病因和机制较为复杂[9]，目前认为慢性、长期的应激源是促进抑郁发生、加重病情的主要原因。因此采用与人类抑郁症发病特征相似、更为接近发病机理[10]的动物模型尤为重要。

慢性轻度不可预见应激抑郁模型就是模拟抑郁症发生的环境诱因，其特点是应激因子的多变性和不可预见性，已成为国内外学者探讨抑郁症的发病机制而广泛应用的动物模型。由于体重异常同样是抑郁症的一个重要诊断指标，研究发现 CMS 能够引起大鼠体重增长变缓，而体重增速的减缓可能进一步加剧糖水摄入量的减少，因此该试验采用连续21 d 给予大鼠各种刺激造成慢性轻度不可预见应激抑郁模型，结果表明，模型组糖水摄入量减少、体重增速减缓，通过药物干预治疗后，赤芍总苷、百合总皂苷组对大鼠体重、糖水消耗方面得到了改善，均具有一定的缓解快感缺失的作用，而赤芍总苷/百合总皂苷联合应用效果明显优于单独应用组，提示两药的联合运用可以互相协同从而更好地发挥抗抑郁作用。

有关抑郁症的生物学病因早在30 多年前就已被认识。研究指出抑郁症的发生是由于中枢神经系统中5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）等多巴胺受体释放减少，突触间隙含量下降所致[11]，5-HT不足时，不能刺激脉络膜丛生成神经营养因子，神经营养因子浓度下降可降低神经元功能[12-13]，而BDNF 是神经营养因子重要组成之一，也是治疗抑郁症的重要靶点[14-15]。该试验通过构建慢性轻度不可预见应激抑郁模型来评价联合应用的抗抑郁作用，结果表明，赤芍总苷能够增加血清中NE 含量，百合总皂苷能够增加血清中5-HT含量，而赤芍总苷/百合总皂苷联合应用组能明显增加5-HT、NE 的含量，调节大鼠脑源性神经营养因子的表达（P ＜0.01）。表明赤芍总苷/百合总皂苷联合应用发挥了药物的协同作用，通过多靶点提高了疗效起到抗抑郁的作用[16]。

综上所述，该研究采用赤芍总苷/百合总皂苷联合应用为研究对象，通过对慢性轻度不可预见应激抑郁模型大鼠的治疗，验证了联合应用效果更优于二者单独应用，其协同作用尚需进一步探讨。提示赤芍总苷/百合总皂苷联合应用在抗抑郁方面具有重要的理论意义，为进一步研究和开发利用提供了新思路。