秦州大樱桃副产物—叶中黄酮提取的研究

杨劝生 张军兰 赵金凤 赵强

【摘要】以黄酮的含量为评价指标，采用正交设计建立秦州大樱桃叶的提取工艺。

【关键词】秦州大樱桃叶  黄酮  提取  研究

樱桃叶是樱桃的主要副产物，富含多种人体有益成分，尤以黄酮类化合物芦丁（Rutin）含量较高，黄酮类化合物具有抗氧化、保护心脑血管系统、抗癌、止血等生理活性，且低毒。在食品工业中可用作抗氧化剂、色素等。在医学上可以用于清除自由基、治疗冠心病和脑血栓等一系列疾病。

本研究以秦州大樱桃叶为原料，通过正交实验设计，以乙醇回流提取大樱桃叶黄酮类化合物，建立并优化了秦州大樱桃叶中芦丁提取工艺，HPLC法测定秦州大樱桃叶中黄酮类化合物的含量，以确定最佳提取工艺参数，为大樱桃副产物中有效成分的提取分离提供了一定的参考。

一、材料与仪器

（一）药材

“红灯”大樱桃叶（经天水师范学院赵强教授鉴定），2018年6月采集于天水市秦州区烟铺村，经自然风干，粉碎，过筛。

（二）仪器

Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪、KQ-500D型数控超声波清洗器、RE52-99型旋转蒸发仪、UV751GD型紫外-可见分光光度计、JY系列电子天平、色谱工作站为CAG Bootp Serier、色谱柱为Eclipse×DB–C18柱等。

（三）试药

芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号：11844-200505

），95%乙醇、NaOH，以及其它分析纯试剂。

二、方法与结果

（一）对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品0.0251 g，用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，摇匀，得质量浓度为25.1 mg/mL的芦丁对照品溶液。

（二）供试品溶液的制备

称取上述樱桃叶粉末10.0 g，加入不同体积分数的乙醇，在室温下浸泡5-7 h后，经300W超声波50℃处理80min。将超声处理过的物质全部转移索氏提取器中加热回流提取，得到回流液。用旋转蒸发仪将回流液减压浓缩至无醇味之后立即将浓缩液转入100mL锥形瓶中，得抽滤样品液。重复此操作三次，将三次实验的抽滤样品液合并，减压浓缩至粘稠状，趁热移入150mL锥形中，加入质量分数为10%NaOH调pH至8-10，密封静置24h。经减压抽滤，将滤液移入100mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至刻度，封口4℃保存备用。

（三）黄酮含量测定色谱条件

检测器：Eclipse×DB–C18柱（4.6 mm×250mm），波长：254 nm，流动相：甲醇∶1%冰醋酸=60∶40（v/v），柱温：30℃，进样量：20μL，流速1.0mL/min。

（四）正交提取结果与分析

取45%、60%、75%不同体积的乙醇，液料比7.51、12.51、17.51 mL/g，提取温度40℃、60℃、80℃，设定正交试验表，考察黄酮含量的提取率，结果取3次试验结果的平均值。结果显示提取率在1.08%～1.32%之间，方法可行，工艺可靠。

（五）验证试验

再按选出的工艺进一步验证试验，分别称取樱桃叶5份，各30g，以樱桃叶黄酮含量为验证指标进行试验，黃酮含量平达1.250mg/g，稳定性和重现性好，可建立樱桃叶中黄酮的提取工艺。

三、结论

本实验以秦州大樱桃“红灯”的叶子为实验材料，在单因素实验的基础上进行L9（33）正交实验，优选乙醇体积分数、料液比、提取温度等主要影响因素，确定了最佳提取工艺（乙醇体积分数60%、料液比12.51、提取温度70℃），黄酮类化合物含量可达1.250mg/g，并发现三种影响因素之间存在一定的交互作用。由于大樱桃叶来源广泛、绿色天然无污染，廉价易得，叶中所含黄酮类化合物有较强的抗氧化能力，且在机体内低残留，可作为较理想的自由基清除剂，用于保护机体健康和食品安全领域，并有望开发成为一种新型的食品添加剂。通过一系列研究，为当地大樱桃产业深入开发和研究提供理论依据。

参考文献：

[1]胡鸥，许传俊，许文江等.巴西樱桃化学成分及生物学活性研究进展[J].福建农业科技，2017（09）：51-55.

[2]杨楠，贾晓斌，张振海等.黄酮类化合物抗肿瘤活性及机制研究进展[J].中国中药杂志，2015， 40（03）：373-381.

[3]Mark F. McCarty，Simon Iloki Assanga，Lidianys Lewis Lujan. Flavones and flavonols may have clinical potential as CK2 inhibitors in cancer therapy[J]. Elsevier Ltd，2020，141.

[4]夏雪芬.国内外天然食品抗氧化剂的应用研究[J].现代食品，2019（22）：26-28.

[5]姜丹，胡文忠，姜爱丽，陈晨.樱桃叶中黄酮类物质和樱桃籽油的提取纯化研究进展[J]. 食品工业科技，2015，36（17）：388-391.

基金项目：2019年天水市科技计划项目（18JR3RE244）。

作者简介：杨劝生（1974-），男，主任中药师（教授），研究方向：中草药化学分析以及食品、保健品、新药研发等。