APP下载

高效液相色谱法测定喉蛾散中盐酸小檗碱含量

2020-10-16陈武军

中国药业 2020年19期
关键词:小檗乙腈批号

陈武军

(福建省漳州市中医院,福建 漳州 363000)

喉蛾散是由黄连、黄柏、桔梗、蜜甘草、琥珀、薄荷、硼砂、煅硼砂、珍珠、冰片、甘草、青黛、山豆根等中药组方,具有清热解毒、消肿止痛的功效,适用于咽喉肿痛、口舌生疮、牙龈肿疼等痰热证。黄连、黄柏均有清热燥湿、泻火解毒功效,其主要活性成分为盐酸小檗碱等多种生物碱,具有抗病毒、抗菌消炎、降血压、降血糖、降低血清胆固醇、抗癌、抗心律失常、升白细胞、清热解毒、利胆等生理活性[1]。为更有效控制喉蛾散的质量,确保患者用药安全有效可控,本研究中采用高效液相色谱(HPLC)法对喉蛾散中黄连、黄柏所含活性成分盐酸小檗碱进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪,包括紫外检测器,Empower色谱工作站(美国Waters公司);TU-1900型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);ME104E型电子天平(精度为万分之一),XP26型电子天平(精度为百万分之一),均购自梅特勒-托利多仪器<上海>有限公司;KQ-300DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,功率为250 W,频率为40 kHz)。

1.2 试药

盐酸小檗碱对照品(批号为110713-201212,纯度为86.7%,中国食品药品检定研究院);喉蛾散(医院制剂,批号分别为 20190601,20190602,20190701);乙腈为色谱纯(美国Merk公司,批号为JB085530);磷酸为色谱纯(美国Fisher公司,批号为190900);甲醇为分析纯(国药集团化学试剂有限公司,批号为20190910);水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters Xridge RShield RP18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈(A)-0.05% 磷酸溶液(B),梯度洗脱,详见表 1;柱温:30 ℃;检测波长:265 nm;流速:1 mL /min;进样量:5 μL。在此色谱条件下,理论板数按盐酸小檗碱峰计大于11 000。

表1 流动相梯度洗脱程序表

2.2 溶液制备[2-3]

对照品溶液:取盐酸小檗碱7.18 mg,精密称定,加70%乙醇溶解并定容至50 mL,制成每1 mL含盐酸小檗碱143.60 μg的对照品母液。

供试品溶液:取样品(批号为 20190602)0.2 g,精密称定,精密加入70%乙醇25 mL,称定质量,超声处理(功率为 250 W,频率为 40 kHz)30 min,取出,放凉,用70%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

阴性对照品溶液:按喉蛾散处方和工艺制备缺黄连、黄柏阴性样品,按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察[4]

专属性试验:取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5 μL,按拟订色谱条件进样测定。结果供试品溶液色谱中,在与盐酸小檗碱对照品相应保留时间处有吸收峰,而缺黄连、黄柏的阴性对照品溶液在对应保留时间处无吸收峰出现,阴性对照无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察:分别精密吸取对照品母液1,3,5,7 mL,置 20,10,10,10 mL 容量瓶中,并分别用 70%乙醇溶剂并定容,摇匀,连同母液得系列对照品溶液,分别精密吸取5 μL,按拟订色谱条件进样测定,以对照品质量浓度(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归,得回归方程Y=20 575X-2 715.7,R2=0.999 9(n=5)。结果表明,盐酸小檗碱质量浓度在 7.18 ~143.60 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(71.80 μg /mL)5 μL,按拟订色谱条件进样测定,连续进样6次,计算其峰面积的相对标准偏差。结果的RSD为2.14%(n=6),表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批(批号为20190602)样品6份,依法制备供试品溶液,分别精密吸取5 μL,按拟订色谱条件进样测定。结果盐酸小檗碱的平均含量为0.88%,RSD为 1.87%(n=6),表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液适量,分别于0,2,4,8,12,24h时按拟订色谱条件进样测定。结果的RSD为2.61%(n=6),表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20190602,盐酸小檗碱的含量为0.874%)6份,每份0.2 g,精密称定,分别精密加入适量盐酸小檗碱对照品,依法制备供试品溶液,分别精密吸取5 μL,按拟订色谱条件进样测定,并计算回收率。结果见表2。

表2 盐酸小檗碱加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品(批号分别为20190601,20190602,20190701),依法制备供试品溶液,按拟订色谱条件进样测定,用外标法计算喉蛾散中盐酸小檗碱的含量。结果见表3。

表3 3批样品中盐酸小檗碱含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 检测波长选择[5-6]

为尽可能多地采集到丰富的物质成分信息,参考2015年版《中国药典(一部)》中黄连的盐酸小檗碱、黄柏的盐酸小檗碱,甘草的甘草苷、甘草酸,苦参的苦参碱、氧化苦参碱等指标成分的检测波长,曾分别于230,265,340nm波长处进行预试验,结果甘草苷、甘草酸峰高较低,分离度差,基线噪音影响大,定量不准确。盐酸小檗碱峰高相对较高,样品干扰少,分离度好,且基线平稳,适合作为含量测定指标成分,故选择盐酸小檗碱最大吸收波长265 nm作为喉蛾散中盐酸小檗碱含量测定的紫外检测波长。

3.2 流动相选择[7-10]

曾选择乙腈-1.5%磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸溶液、甲醇-水等流动相系统进行预试验,结果显示,采用乙腈-0.05%磷酸溶液作为流动相梯度洗脱,供试品溶液中盐酸小檗碱与其他峰分离较好,故选其作为流动相。

3.3 提取溶剂选择[11-12]

在原供试品溶液制备方法基础上考察了不同提取溶剂(70%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、水)对含量测定指标成分的影响,以水为溶剂进行提取时,盐酸小檗碱的含量明显降低,70%甲醇和70%乙醇的差异不大,因甲醇具有中枢神经系统毒性,故选用乙醇体系的溶剂。分别对不同比例的乙醇提取溶剂进行比较,发现70%乙醇为提取溶剂时得到的盐酸小檗碱的含量最高,故最终选择70%乙醇为提取溶剂。

猜你喜欢

小檗乙腈批号
一种JTIDS 信号批号的离线合批方法
Taxonomic synopsis of Berberis (Berberidaceae) from the northern Hengduan mountains region in China,with descriptions of seven new species
高纯乙腈提纯精制工艺节能优化方案
羟基乙腈的分离提浓方法研究
小檗碱治疗非酒精性脂肪肝病相关通路的研究进展
贵州野生小檗属植物土壤与植株微量元素相关性及富集特征
四种市售色谱级乙腈的质量比较
对陇南市小檗种类及分布情况的调查与分析
医学科技期刊中药品生产批号标注探析
7-ACT缩合反应中三氟化硼乙腈络合物代替液体三氟化硼乙腈的可行性分析