活血润肠软胶囊挥发油的提取工艺优化及气相色谱质谱分析

牛向伟 ，姜莉莉 ，周国忠 ，张 宁

（1.颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中药新辅料技术创新中心，河北 承德 067000）

活血润肠软胶囊由大黄、火麻仁、当归、桃仁、瓜篓子、防风、羌活7味药材组方，用于治疗功能性便秘［1］。方中，当归、防风、羌活为主药，且这3味药材中所含挥发性成分与该制剂的活血润肠功效密切相关。水蒸气蒸馏法是将含有易挥发成分的药材与水一同蒸馏，使挥发性成分随同水蒸气一起馏出，再经过冷凝回流提取挥发性成分，是常用的中药挥发油提取方法，适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏其结构、不与水发生反应的挥发性成分的提取，且不使用有机溶剂，不易造成环境污染，适宜工业化生产。本研究中采用水蒸气蒸馏法对这3味药材的挥发性成分的提取工艺进行研究，采用正交试验法确定其最佳提取条件，采用气相色谱质谱（GC-MS）法对所提挥发油进行化学成分分析并鉴定。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

7000C＋7890B型气相色谱质谱仪（美国安捷伦公司，包括三重四极杆）；Agilent HP-5 MS石英毛细管色谱柱（30.0 m ×0.25 mm，0.25 μm，美国安捷伦公司）；ME204型电子天平（梅特勒-托利多公司，精度为万分之一）。

1.2 试药

当归（北京市药材公司，批号为160035），羌活（江苏康缘药业股份有限公司，批号为160141），防风（赤峰荣兴堂药业有限责任公司，批号为170113），均经颈复康药业集团有限公司王春民高级工程师鉴定为正品；正乙烷（分析纯，天津欧博凯化工有限公司，批号为20170302）。

2 方法与结果

2.1 挥发油提取

按活血润肠软胶囊处方工艺取当归、羌活、防风3味药材，粉碎成粗粉，混合。取混合粉适量，置圆底烧瓶中，加水适量，浸泡，连接挥发油测定器与回流冷凝管，置电热套中加热至沸，并保持微沸，收集挥发油，称定质量，计算挥发油提取率。采用GC-MS法对所得挥发油进行检测，对其所含化学成分进行分析和鉴定。

2.2 因素水平设计

分别以加水量（因素A）、浸泡时间（因素B）、提取时间（因素C）和加盐量（因素D）为考察因素，以挥发油提取率为考察指标，按L9（34）正交试验表进行试验。因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.3 试验方案与结果

试验方案与结果见表2，方差分析结果见表3。可见，因素A、因素B、因素C、因素D对提取挥发油的提取率均无显著影响。各因素对挥发油提取率的影响顺序依次为因素B＞因素A＞因素C＞因素D，最佳提取工艺条件为 A1（或 A2）B2C2D1，即加 6（或 8）倍量水，浸泡1.5 h，提取4 h。按最佳提取工艺即加6倍量水，浸泡1.5 h，提取4 h，对3味药材混合粉进行提取，结果挥发油的提取率为0.34%。

2.4 挥发油的GC-MS检测

色谱条件：程序升温，初始温度为50℃，保持2 min；以 1℃ ／min的速率升至 180℃，保持 5 min；以1℃ ／min的速率升至202℃；以2℃ ／min的速率升至250℃；以5℃ ／min的速率升至280℃。进样口温度为 250℃；分流比为 10∶1；进样量为 1 μL；载气为氦气（≥99.999% ）；流速为 1 mL ／min。

表2 正交试验方案与结果

表3 方差分析结果

质谱条件：EI离子源，电子能源70 eV，传输线温度为250℃，离子源温度为230℃，四极杆温度为150℃，全扫描检测方式，扫描范围（m／z）20～550amu。

检测法：将得到的挥发油进行GC-MS法检测，用面积归一法确定其主要成分及相对含量。

结果分析：结果见表4。可见，共检测出244种成分，共鉴别出 50种主要成分。其中，1，4-双（1-甲基乙基）-苯含量最高（含量为9.99%），其次依次为1R-α -蒎烯（8.148% ）、β -蒎烯（6.221% ）、醋酸呋喃酯（4.101%）、（R）-4-甲基-1-（1-甲基乙基）-3- 环己烯 -1- 醇（3.733% ）、柠檬烯（3.647% ）。

3 讨论

采用GC-MS法对水蒸气蒸馏法提取的羌活挥发油进行计算机检索，并与标准图谱对照［2-3］，共鉴定出136个成分（羌活78个成分、宽叶羌活58个成分），其中多数为单萜、单萜醇、倍半萜、倍半萜醇类化合物，含量在1%以上的有α-蒎烯、β-蒎烯、γ-松油烯、对一聚伞花素、柠檬烯、水芹烯、香桧烯、缬草萜烯醇等成分。当归挥发油［4］中含量最高的为藁本内酯，其次为2-乙基-1-己醇、十三烷、9，12-十八烯酸单甘油酯、9，12-十八二烯酸乙酯、十七酸乙酯等。防风挥发油［5-6］的主要成分为3-苯基-2-丙烯醛、亚油酸乙酯、9，12-十八二烯酸、芹菜脑、人参醇等。羌活、防风药对配伍后有新的活性成分产生［4］。经与文献［5-6］对比，正十六烷酸、金合欢烯、罗汉柏烯、3-蒈烯、α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、柠檬烯等在单味药材提取的挥发油中存在；而1-甲基-2（1H）-喹啉酮、γ-榄香烯、菖蒲酮、侧柏酮等是单味药材提取挥发油中所没有的，提示药材在混合提取时其所含成分间可能发生了氧化、聚合、异构化等作用，这些新提取的化合物的药理活性、功效等还有待进一步研究。

本研究结果表明，水蒸气蒸馏法提取3味药材的挥发油提取率为0.34%，与超临界二氧化碳萃取法提取挥发油的收率无优势。GC-MS法分析结果显示，其成分种类也多于超临界二氧化碳萃取法。因此，水蒸气蒸馏法是否适宜于活血润肠软胶囊的生产有待进一步研究。

表4 挥发油化学成分GC-MS分析结果