液相色谱串联质谱法检测大蒜和蒜薹中的苯醚甲环唑

杜亭，乔琳，朱仁发

（合肥学院，安徽合肥230601）

大蒜是一种重要的农作物，不仅可作调味品，还有很强的药用价值；蒜薹是大蒜中抽出的花茎，是人们常用的蔬菜。大蒜浑身是宝，其植株从幼苗期到成熟期均可食用。作为重要的药食同源植物，其种植历史至今已超过5 000年。大蒜独特的食药价值是由于其功能成分，有机硫化物是大蒜的主要活性物质[1]。

苯醚甲环唑是一种三唑类杀菌剂，具有高效、广谱、低毒的特点，通过抑制果蔬细胞膜中麦角甾醇的生物合成，破坏细胞膜功能结构，从而杀除病菌，常用于防治多种作物的霉病、叶斑病、锈病、白粉病等，且不污染农作物[2-3]。本文以大蒜和蒜薹为研究对象，采用QuEChERS前处理技术，用液相色谱串联质谱法对其中苯醚甲环唑含量进行检测，建立了一种简单、高效、快速的检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器与材料

LCMS-8040液相色谱-三重四极杆质谱联用系统，日本岛津公司；XD-H旋涡混合器，上海汉诺仪器有限公司；AUW120D电子天平，感量为0.000 01 g，日本岛津公司；LD5-2B离心机，北京雷博尔离心机有限公司；SHZ-82水浴恒温振荡器，常州国宇仪器制造有限公司；JK-500DB超声波清洗器，合肥市金尼克机械制造有限公司。

乙腈、甲酸，色谱纯，美国TEDIA公司；氯化钠，分析纯，天津市北辰方正试剂厂；无水硫酸镁，分析纯，天津市致远化学试剂厂；柠檬酸二钠盐、柠檬酸三钠盐，分析纯，上海麦克林生化科技有限公司；N-丙基乙二胺粉末，分析纯，Agela Technologies公司；3-氯-4-[4-甲基-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二噁戊烷-2-基]苯基-4-氯苯基醚，CAS号：119446-68-3，纯度96.3%，先正达投资有限公司。

1.2 溶液配制

称取苯醚甲环唑对照物0.020 77 g（精确至0.000 01 g）置于20 mL容量瓶中，用色谱纯乙腈溶解并定容至刻度，配制成1 000 mg/L的苯醚甲环唑标准储备溶液。移取0.5 mL标准储备液，置于10 mL容量瓶中，用色谱乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成50 mg/L的苯醚甲环唑标准工作溶液，再逐级稀释成5 mg/L、0.5 mg/L、0.05 mg/L标准工作溶液。

标准曲线：分别从5 mg/L的苯醚甲环唑标准工作溶液中吸取0.8 mL、0.4 mL、0.2 mL，从0.5 mg/L的苯醚甲环唑标准工作溶液中吸取0.4 mL，从0.05 mg/L的苯醚甲环唑标准工作溶液中吸取0.4 mL、0.2 mL，置于2 mL容量瓶中，用大蒜或蒜薹空白提取液稀释至刻度，摇匀，配制成含苯醚甲环唑0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L的标准溶液。

0.1 %甲酸水溶液：吸取甲酸1.00 mL置于1 000 mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀，抽滤后置于超声波清洗器中超声30 min，备用。

1.3 样品前处理

分别称取5 g（精确至0.000 01 g）粉碎混匀的大蒜、蒜薹样品，置于50 mL离心管中，加入2 mL水、10mL乙腈振荡2 min，加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、0.5 g柠檬酸二钠盐、1 g柠檬酸三钠盐，振荡提取30 min，取出，置于离心机以3 000 r/min离心5 min。移取1 mL上清液于装有50 mg PSA和150 mg无水硫酸镁的2 mL离心管中，涡旋1 min，静置5 min，取上清液经0.22 μm滤膜过滤至进样瓶中，上机检测。

1.4 液相色谱分析条件

色谱柱：Shim-pack XR-ODS Ⅱ，2.0 mm（id）×75 mm，粒径2.2 μm；柱温：35℃；流动相：0.1%甲酸水溶液/乙腈（20/80），等度洗脱；流速：0.3 mL/min；进样量：1 μL。根据保留时间（RT）定性，外标法定量。

1.5 质谱条件

离子源：ESI+；接口电压：4.5 kV；DL管温度：250℃；加热块温度：400℃；雾化气流量：3 L/min；干燥气流量：15 L/min；碰撞气：氩气；监测模式：多反应监测（MRM），见表1。

表1 多反应监测（MRM）条件

2 结果与分析

2.1 标准曲线的线性范围、检出限

按照试验方法测定标准溶液系列，以化合物的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果表明线性关系良好，其线性范围、线性回归方程、相关系数及方法检出限见表2，标准曲线见图1、图2、表3、表4。

表2 大蒜、蒜薹基质中的线性参数及检出限

图1 大蒜基质中苯醚甲环唑标准曲线

图2 蒜薹基质中苯醚甲环唑标准曲线

表3 大蒜基质中苯醚甲环唑标准曲线

表4 蒜薹基质中苯醚甲环唑标准曲线

2.2 苯醚甲环唑的回收率和精密度试验

分别将0.02 mg/L、0.2 mg/L、2 mg/L、10 mg/L的苯醚甲环唑添加到大蒜、蒜薹的空白样品中，混匀，静置30 min，按照试验方法平行测定5次，计算平均值，结果如表5。

表5结果显示：本次试验苯醚甲环唑在大蒜中的加标回收率为88.16%～104.02%，在蒜薹中加标回收率为91.45%～103.14%，试验相对标准偏差≤3%，符合加标回收率要求，说明本方法准确可靠。

表5 不同浓度的苯醚甲环唑回收率和精密度试验

3 结论

本文建立了测定大蒜和蒜薹2种基质中苯醚甲环唑的液相色谱串联质谱检测方法。该方法采用QuECh-ERS样品前处理技术，前处理过程操作简单快速，通过对色谱以及质谱条件的优化，以0.1%甲酸水溶液/乙腈=20/80（V/V）为流动相，采用ESI正离子模式检测苯醚甲环唑，方法的灵敏度高，线性关系良好，可为类似产品的残留检测提供参考。