比浊法与电泳法检测单克隆病患者血清免疫球蛋白结果的差异分析

陈兴财 梁瑞向

【摘要】探讨免疫透射比浊法和琼脂糖电泳法测定单克隆病患者血清免疫球蛋白结果的差异情况。方法 收集36例含不同浓度M蛋白的单克隆病患者和16例无M蛋白的健康体检者（对照组）血清标本，分别用免疫透射比浊法和琼脂糖电泳法进行免疫球蛋白定量检测，对比两组检测结果。结果 无M蛋白的正常对照组和当M蛋白含量<29.3%时，两种方法的检测结果相关性良好r2=0.901，结果差异无统计学意义（P>0.05），当M蛋白含量>29.3%时，两种方法检测结果差异显著（P<0.05）。结论 M蛋白含量>29.3%，免疫透射比浊法检测免疫球蛋白的结果明显高于电泳法检测结果。

【关键词】免疫球蛋白;免疫透射比浊法;琼脂糖电泳法;M蛋白

【中图分类号】R392.7   【文献标识码】A    【文章编号】2107-2306（2020）03-234-02

血清免疫球蛋白（Ig）的检测可以判断机体体液免疫功能，是免疫性疾病特别是单克隆病辅助诊断和疗效监测的重要指标。笔者在检验工作中发现，在用免疫透射比浊法检测多发性骨髓瘤或巨球蛋白血症等单克隆病患者血清Ig时，常常出现Ig结果占球蛋白比例高达95%甚至超过球蛋白总量的情况，与血清蛋白电泳检测的γ区免疫球蛋白结果也存在较大差异。因此，本文拟对两种方法测得的单克隆病患者血清免疫球蛋白结果是否存在一致性进行探讨。

1  材料与方法

1.1实验对象  收集2019年4-12月在桂林市人民医院检测发现M蛋白的住院及门诊复诊患者36例。男15例，女21例，年龄18～88岁。 另外随机选取同期在院检测无M蛋白的患者16例，其中男7例，女9例，年龄22-76岁。患者均空腹采血，2小时内分离血清，排除溶血、脂血和黄疸标本。

1.2仪器和试剂   德国罗氏Cobas8000 c702全自动生化分析仪，罗氏原装IgA、IgG、IgM、TP试剂及校准品、质控品。法国Sebia 全自动琼脂糖电泳分析仪及配套血清蛋白琼脂凝胶板和试剂，配套扫描仪和分析软件。

1.3方法

1.3.1 化学法 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用免疫透射比浊法检测，根据免疫球蛋白的组成特点，IgD和IgE在人血清中含量甚微，检测IgA、IgG、IgM三种免疫球蛋白就基本可以代表血清免疫球蛋白水平。本文拟将血清中免疫球蛋白=IgA+IgG+IgM，同时用双缩脲法检测血清总蛋白（TP）。

1.3.2 琼脂糖电泳法  用其专用的电泳梳，每标本加样10ul置全自动电泳仪上自动完成琼脂糖电泳，烘干，氨基黑染色，脱色，再烘干。然后应用专用扫描仪对电泳后的蛋白各组分扫描并算出ALB、α1、α2、β、γ球蛋白的百分比，将β区或γ区出现的集中浓染带判读为M蛋白阳性，根据其峰面积占总峰面积的比例计算百分比，再根据血清总蛋白浓度计算γ区球蛋白和M蛋白浓度。

1.3.3 结果差异计算 比浊法与琼脂糖电泳法检测血清免疫球蛋白的结果相对偏差=（化学法结果-电泳法结果）/电泳法结果×100%

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0和Excel 2007软件进行统计分析。呈非正态分布的数据采用中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间比较采用非参数秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意義。

2  结果

2.1 当血清标本无M蛋白或M蛋白含量较低时，免疫透射比浊法与电泳法检测免疫球蛋白结果相关性良好，见图1：

2.2 当M蛋白含量>29.3%时，两种方法检测结果差异显著。见表1

3 讨论

随着老龄化人口的增加，单克隆丙种球蛋白异常的发生率也明显上升 。单克隆免疫球蛋白是一种过度合成的单一类型或亚型的异常免疫球蛋白，它的准确检测有助于临床疾病的诊断和在诊疗过程中的疗效观察，尤其是恶性单克隆丙种球蛋白血症和免疫缺陷综合征[1]。目前，免疫球蛋白的定量检测主要有免疫透射比浊法和琼脂糖电泳法。根据Ig的组成，IgD、IgE含量微小，通常检测IgG、IgA、IgM这三类Ig就可以代表血清免疫球蛋白水平。而血清蛋白电泳的γ区也主要由IgG、IgA、IgM三种免疫球蛋白组成。

本实验表明，当血清标本无M蛋白或M蛋白含量较低时，免疫透射比浊法与电泳法检测免疫球蛋白的结果相关系数r2=0.901，r=0.9386，回归方程Y=1.0745x-0.7245，经Mann-Whitney秩和检验，P=0.374，>0.05差异无统计学意义。而当M蛋白浓度升高到一定程度后，两种方法检测免疫球蛋白的结果差异显著（P<0.05）且相对偏差远大于免疫球蛋白检测的允许TEa（IgG、IgA和IgM的TEa分别为11.98%、13.5%和16.8%[3]）。分析原因可能为：（1）单克隆免疫球蛋白是一种过度增殖的异常免疫球蛋白，其可能与各自的多克隆起源的多克隆免疫球蛋白在氨基酸组成和数量上有所不同，而这可能会影响其与抗体的结合，从而影响定量的准确性;（2）相关学者[2]的研究表明在免疫透射比浊法中，异常增殖的IgG型，IgA型，IgM型M蛋白对其余2种免疫球蛋白的检查均会产生干扰，且以正干扰为主，并有M蛋白浓度依赖性，即M蛋白浓度越高，干扰越大;（3）本研究用到的罗氏公司试剂采用的是预稀释方法，即先对样本进行一定倍数稀释后再加入试剂进行反应，如出现超过检测线性范围的还可以继续再运行固定倍数的稀释，该法虽可避免因抗原过量导致的“钩状效应”发生，获得更宽的检测范围，但同时也可能因为标本稀释破坏了抗原抗体反应的基质条件而引入了未知的误差。而血清蛋白电泳是根据蛋白质的等电点、分子量和分子形状不同而在电场中泳动速度不一样将蛋白质区分开，且单克隆的免疫球蛋白也多是出现在γ区，所以电泳法在方法学上几乎不受M蛋白的干扰。

总之，免疫透射比浊法在检测单克隆病血清免疫球蛋白时易受M蛋白的干扰，当M蛋白大量出现时可能导致不能获得准确的定量结果，但临床实验室如果采用固定的标本处理方式固定误差，同时，必要时向临床医生解释方法学的缺陷所引起的实验误差，实际结果不会影响临床医生对病情趋势的判断，且化学法快速、方便、经济，更易开展。琼脂糖电泳法虽受M蛋白干扰较小，但需要特殊仪器，且耗费时间长，不利于基层医院开展。因此建议建议临床采用同一种方法进行病情监测。

参考文献

[1]张诗诗，王薇，赵海建，等.我国特殊蛋白质检验指标允许总误差和允许不精密度的初步研究[J].临床检验杂志，2016，34（7）：602-607.

[2]韩建华，程歆琦，吴洁，等. M蛋白对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测免疫球蛋白的干扰[J].检验医学，2019，34（3 ）：197-201