联合检测外周血T淋巴细胞及DNT细胞在恶性肿瘤早期诊断中的应用

刘晓华 沈迎春 王勇

[摘要] 目的 研究联合检测外周血T淋巴细胞及DNT细胞在恶性肿瘤早期诊断中的应用效果。 方法 方便选择该院2017年1月—2019年1月期间治疗的乳腺肿瘤、肠道肿瘤、肺肿瘤患者各40例，3组患者均分为良性、恶性组，观察所有患者外周血T淋巴细胞及DNT细胞，并分析早中晚与晚期患者上述指标。 结果 乳腺肿瘤恶性患者CD3+细胞（65.75±4.36）%、CD3+CD4+细胞（34.85±4.89）、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.32）均低于良性组（75.54±4.21）%、（43.42±5.21）%、（1.85±0.25），CD3+CD8+（28.85±4.21）%細胞高于良性组（24.42±4.25）%（t=7.174、5.355、8.657、-3.297，P =0.000、0.000、0.000、0.002），肠道肿瘤恶性患者CD3+细胞（70.47±5.05）%、CD3+CD4+细胞（34.85±2.10）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.16）均低于良性组（77.54±6.85%、（44.54±3.52）%、（1.65±0.21），CD3+CD8+细胞（35.46±1.85）%高于良性组（25.85±2.05）%（t=3.715、10.573、10.164、-15.564，P=0.001、0.000、0.000、0.000），肺肿瘤恶性患者CD3+细胞（66.85±5.21）%、CD3+CD4+细胞（36.85±3.65）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.02±0.23）均低于良性组（74.45±5.85）%、（42.21±4.25）%、（1.71±0.25），CD3+CD8+细胞（28.54±2.54）%高于良性组（24.88±3.05）%（t=4.347、4.291、9.092、-4.138，P=0.000、0.000、0.000、0.000），乳腺肿瘤组、肠道肿瘤组、肺肿瘤组恶性DNT细胞均高于良性患（P<0.05）。 结论 对于恶性肿瘤患者可实施外周血T淋巴细胞联合DNT细胞检测，良恶性之间存在一定差异，能够提高恶性肿瘤患者诊断准确率，确保患者及时诊断并治疗，值得应用。

[关键词] 外周血T淋巴细胞;DNT细胞;恶性肿瘤;诊断

[中图分类号] R734          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）08（a）-0004-04

Application of Combined Detection of Peripheral Blood T Lymphocytes and DNT Cells in Early Diagnosis of Malignant Tumors

LIU Xiao-hua1， SHEN Ying-chun2， WANG Yong1

1.Department of Laboratory Medicine， Changle County People's Hospital， Weifang， Shandong Province， 262400 China;2.Hongshagou Central Hospital of Anqiu City， Weifang， Shandong Province， 262000 China

[Abstract] Objective To study the effect of combined detection of peripheral blood T lymphocytes and DNT cells in the early diagnosis of malignant tumors. Methods From January 2017 to January 2019， 40 patients with breast cancer， intestinal cancer and lung cancer were convenient selected. All patients were divided into benign and malignant groups. The peripheral blood T-lymphocytes and DNT cells of all patients were observed， and the above indexes of early， middle， late and late patients were analyzed. Results CD3+ cells （65.75±4.36）%， CD3+CD4+ cells （34.85±4.89）， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.05±0.32） in breast cancer malignant patients were lower than benign group （75.54±4.21）%， （43.42± 5.21）%， （1.85±0.25）， CD3+CD8+（28.85±4.21）% cells were higher than the benign group （24.42±4.25）% （t=7.174， 5.355， 8.657， -3.297， P=0.000， 0.000， 0.000，0.002）， CD3+ cells （70.47±5.05）%， CD3+CD4+ cells （34.85±2.10）%， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.05±0.16） in malignant tumor patients were lower than the benign group （77.54±6.85%， （44.54±3.52）%， （1.65±0.21）， CD3+CD8+ cells （35.46±1.85）% were higher than the benign group （25.85±2.05）% （t=3.715， 10.573， 10.164， -15.564， P=0.001， 0.000 ， 0.000， 0.000）， CD3+ cells （66.85±5.21）%， CD3+CD4+ cells （36.85±3.65）%， CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.02±0.23） were lower than the benign group （74.45±5.85）%， （42.21±4.25）%， （1.71±0.25）， CD3+CD8+ cells （28.54±2.54）% are higher than the benign group （24.88±3.05）% （t=4.347， 4.291，  9.092，-4.138，P= 0.000， 0.000， 0.000， 0.000）， malignant DNT cells in breast tumor group， intestinal tumor group， and lung tumor group were higher than those in benign patients （P<0.05）.Conclusion For patients with malignant tumors， peripheral blood T-lymphocytes combined with DNT cells can be detected. There is a certain difference between the benign and malignant， which can improve the diagnostic accuracy of patients with malignant tumors， ensure the timely diagnosis and treatment of patients， and is worthy of application.

[Key words] Peripheral blood T lymphocytes; DNT cells; Malignant tumors; Diagnosis

恶性肿瘤的出现，严重威胁了人类的健康与生命，目前全球恶性肿瘤总体发病情况已经逐年出现上升，目前恶性肿瘤的出现已经严重威胁到人类生存[1]。但对于恶性肿瘤的诊疗原则，就在于早期治疗，但由于其发病存在一定隐匿性，缺乏有效的检测指标，使得患者诊断时期已经为中晚期，延误了最佳治疗时间[2]。但肿瘤的发生、预后与患者免疫功能存在一定关系，其中外周血T淋巴细胞能够及时反映患者免疫功能，在肿瘤诊断中具有重要意义[3]。而双阴性T淋巴细胞（DNT）被证实属于免疫调节性T细胞，目前也在临床获得一定认可;该文通过将外周血T淋巴细胞及DNT细胞纳入研究，方便选择该院2017年1月—2019年1月期间治疗的乳腺肿瘤、肠道肿瘤、肺肿瘤患者各40例，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

方便抽取该院治疗的乳腺肿瘤、肠道肿瘤、肺肿瘤患者均40例，3组患者均分为良性、恶性组，纳入标准：①均通过病理、影像学检查获得确诊;②所有患者研究取样时均未进行手术、放疗化疗;③肢体功能正常，精神正常;④知晓该文研究且愿意参加。排除标准：①合并糖尿病者;②晚期恶性肿瘤，预计存活期不超过1个月;③患者及家属无法积极配合研究者;④相关资料不完善者。其中乳腺肿瘤组：男性22例，女性18例;年龄在36～68岁之间，平均年龄为（47.54±3.05）岁;良性18例，恶性22例。肠道肿瘤组：男性21例，女性19例;年龄在23～65岁之间，平均年龄为（47.32±3.33）岁;良性20例，恶性20例。肺肿瘤组：男性23例，女性17例;年龄在25～69岁之间，平均年龄为（48.96±3.75）岁;良性19例，恶性21例。上述患者一般资料之间，差异无统计学意义（P>0.05），可进行研究。

1.2  方法

要求所有患者生活饮食均处于日常状态，空腹状态最佳，采取经乙二胺四乙酸抗凝的静脉血2 mL在采集后6 h内处理，根据检测要求，分别向编号的流失试管中加入20 μL单克隆抗体后加入100 μL混匀的抗凝血，混匀避光，并在室温下孵育15 min，加入溶血剂，溶解未标记细胞及红细胞，按照操作流程检测。使用四色流式术检测T淋巴细胞、DNT细胞[4]。

1.3  统计方法

该研究采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析，计量资料用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  乳腺肿瘤组患者外周血T淋巴细胞

乳腺肿瘤恶性患者CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性组，CD3+CD8+细胞高于良性组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2  肠道肿瘤组患者外周血T淋巴细胞

肠道肿瘤患者CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性组，CD3+CD8+细胞高于良性组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3  肺肿瘤组患者外周血T淋巴细胞

肺肿瘤患者CD3+细胞、CD3+CD4+細胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+均低于良性组，CD3+CD8+细胞高于良性组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4  肿瘤患者DNT细胞检测情况

乳腺肿瘤组、肠道肿瘤组、肺肿瘤组恶性DNT细胞均高于良性患者，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

3  讨论

在肿瘤方面的研究中，由于早期不伴转移，可以进行手术切除根治术，为患者赢得了一定的生存机会，因此全球均在寻找准确、快速的肿瘤诊断技术[5]。既往临床中诊断需要根据病灶的大小、形状、质地等情况，判断患者性质，会使得术前诊断出现误差，但多数患者早期并无特异症状，使得诊断期间会出现忽视，使得早期难以发现[6]。目前已经发现多种与肿瘤相关的标志物，但或多或少会存在一定影响，或灵敏度不高，使得诊断出现一定难度[7]。

目前国内外均发现肿瘤患者免疫功能会出现紊乱，通过细胞计数检测外周血T淋巴细胞亚群，能够用于发现、鉴定恶性肿瘤，在临床获得一定认可[8-9]。该文通过将外周血T淋巴细胞及DNT细胞纳入研究，选择3种不同的肿瘤患者，通过急性良恶性分组，结果显示：乳腺肿瘤恶性患者CD3+细胞（65.75±4.36）%、CD3+CD4+细胞（34.85±4.89）、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.32）均低于良性组（75.54±4.21）%、（43.42±5.21）%、（1.85±0.25），CD3+CD8+（28.85±4.21）%细胞高于良性组（24.42±4.25）%（P<0.05），肠道肿瘤恶性患者CD3+细胞（70.47±5.05）%、CD3+CD4+细胞（34.85±2.10）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+（1.05±0.16）均低于良性组（77.54±6.85）%、（44.54±3.52）%、（1.65±0.21），CD3+CD8+细胞（35.46±1.85）%高于良性组（25.85±2.05）%（ P<0.05），肺肿瘤恶性患者CD3+细胞（66.85±5.21）%、CD3+CD4+细胞（36.85±3.65）%、CD3+CD4+/CD3+CD8+ （1.02±0.23）均低于良性组（74.45±5.85）%、（42.21±4.25）%、（1.71±0.25），CD3+CD8+细胞（28.54±2.54）%高于良性组（24.88±3.05）%（ P<0.05），乳腺肿瘤组、肠道肿瘤组、肺肿瘤组恶性DNT细胞均高于良性患（P<0.05）。 能够看出3种不同的良恶性肿瘤患者，存在共同差异，T淋巴细胞亚群是细胞免疫的主要免疫应答形式，在应答过程中，能够起到良好的免疫调节作用[10]。结果中：乳腺肿瘤组、肠道肿瘤组、肺肿瘤组恶性DNT细胞均高于良性患者（P<0.05）。其中DNT细胞属于目前研究较为广泛的免疫细胞，在维持自身免疫耐受与下调各种免疫应答中的作用，已经被临床证实，属于抑制性免疫调节细胞，因此与该文结果相符，恶性患者DNT均高于良性患者。正常情况下，患者CD4+/CD8+比值降低，能够说明患者免疫功能低下，容易引起肿瘤繁殖[11]。因此通过外周血T淋巴细胞亚群鉴别肿瘤的良恶性，其假阳性主要受到患者自身免疫功能的影响[12]。且有研究指出，DNT细胞在免疫调节与排斥反应中，均发挥了有效作用，也是目前免疫学研究的重点，后期临床可扩大研究，证实DNT细胞在研究的研究。赵美淇等[13]学者在研究中指出，其中健康组CD3+：（70.27±7.46）%，CD4+：（38.62±7.41）%，CD8+：（19.94±8.54）%，CD4+/CD8+：（2.13±0.77）%，CD19+：（13.55±4.01）%，NK：（16.68±5.47）%。肿瘤组：CD3+：（62.19±11.82）%，CD4+：（34.88±10.38）%，CD8+：（21.19±8.49）%，CD4+/CD8+：（1.92±1.06）%，CD19+：（10.57±6.64）%，NK：（18.07±8.24）%。肿瘤组外周血的CD3+、CD4+、CD19+细胞比例及CD4+/CD8+比值均低于健康组，NK细胞比例高于健康组 （P<0.05）。亚组分析结果显示，不同肿瘤间的CD8+细胞比例差异无统计学意义 （P>0.05）;CD3+、CD4+、CD19+、NK细胞比例及CD4+/CD8+比值（P<0.05）。这一结果与该文研究一致，外周血T淋巴细胞可用于恶性肿瘤患者的诊断。

综上所述，对于恶性肿瘤患者可实施外周血T淋巴细胞、DNT细胞进行诊断，在良恶性上存在一定差异，有助于临床加快恶性肿瘤诊断，并及时获得治疗，值得应用。

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（收稿日期：2020-05-09）

[基金项目] 潍坊市科技发展项目（2018YX108）。

[作者简介] 刘晓华（1979-），女， 山东潍坊人，本科，主管检验技师，研究方向：分子免疫学。

[通信作者] 王勇（1984-），男，山东胶南人，硕士，主管检验技师，研究方向：分子免疫学，E-mail：yong_121@163.com。