防止黄体酮阴道栓丢失和引发感染的技术改进探索

张鑫 眭丹 刘国锁 郭启勇 吴心华*

（1，宁夏大学农学院 750021；2，宁夏中牧亿林畜产股份有限公司 750011）

随着畜牧业现代化发展,肉羊大规模生产中应用同期发情技术控制繁殖进度已呈常态化。母羊妊娠期为150d,如果在产后30d 内能成功受孕就能实现一年两产,使年繁殖率成倍升高[1]。常年发情的国宝小尾寒羊,在营养条件满足和饲养管理得当的情况下可自然发挥出一年两产的高效生产性能。但对其他季节性发情的绵羊则必须采用黄体酮栓介导的同期发情技术来缩短胎间隔,实现两年三产或一年两产。

鹿科动物与牛羊同属反刍类草食动物,鹿产业是经济效益优于牛羊产业的高端草畜产业。由于国内外鹿产品消费市场逐年攀升,国内鹿产业正在迅猛发展。个体养殖户投身养鹿业的越来越多。杂交育种在鹿产业中的应用广泛,参加鹿王大赛的纯血梅花鹿种鹿已极为少见。在国内梅花鹿杂交育种和人工授精技术的推广实践中,技术人员在濒临鹿发情季节时埋置CIDR 黄体酮栓,使大批母鹿能在发情季节初期发情并受孕,从而控制大批仔鹿出生在凉爽干燥的春末夏初季节。在提高产羔成活率的同时,还可以保证较长的夏季生长时间,使仔鹿在入冬前获得更大的体重,发挥出更好的生产性能。

笔者从2009 年至今一直从事绵羊高效繁殖技术应用推广和梅花鹿同期发情人工授精技术的临床应用和研究工作。在生产实践中发现,阴道埋置黄体酮栓引发阴道感染和栓体丢失的现象比较常见,该问题在相关文献中[2]也曾被提及,但没有深入的研究和讨论。

1 常用黄体酮阴道栓的结构及其优缺点

黄体酮阴道栓是一类利用海绵或硅胶作为孕激素载体,埋置于母畜阴道内的人工黄体,常用的有海绵栓和CIDR 栓。在同期发情处理程序中,用于延长群体中部分个体黄体期,使发情同期化。黄体酮栓+PMSG 可以在休情期母畜体内模拟完整的性周期激素水平变化,从而得到较高的发情率和排卵率,是绵羊和梅花鹿同期发情处理的首选程序[3,4],尤其是诱导处于乏情季节绵羊的成功繁殖得到显著效果[5]。

1.1 海绵栓

海绵栓的结构如图1 所示,是由圆柱形海绵和捆绑海绵的棉线组成。海绵栓的棉线较长,放置在阴道后露出外阴较多且材质易吸附污物,所以导致感染和脱落问题普遍发生。在早期的应用中因多发感染和粘连而不被接受,但其价格相对较便宜。

1.2 CIDR 栓

CIDR 栓的结构如图2 所示,采用塑料骨架和硅胶载体制作而成,塑料骨架延长为栓尾并在尾末端有一球状结节,以方便撤栓操作。因多为进口而来所以价格较高,但因使用方便不易污染、且发生感染时不与阴道壁粘连而被广泛应用。尤其是在胚胎移植供体羊、名贵种母羊和梅花鹿的同期发情中被大量使用。

2 黄体酮阴道拴在实践应用中存在的问题

黄体酮阴道栓埋置是借助一个类似于注射器的专用置入器进行。在实际生产中,一把置入器可重复清洗、安装、埋置的工作,所以不可避免地对栓体造成污染。有的甚至徒手戴医用乳胶手套用中指将海绵栓推入阴道内[5],这样造成的阴道感染率更高,多数母羊在撤栓时发生感染,甚至有恶臭的脓性液体从阴道内流出,造成母羊不发情或发情时阴道内污秽通过开放的子宫颈口污染子宫而引发不孕症。笔者曾目睹某胚胎移植技术服务公司处理的受体羊发生大面积感染的事件。其徒手直接将栓体塞入阴道的过程极不卫生,撤栓时母羊发生感染的高达90%以上,甚至发生粘连。这些现象势必会影响人工授精技术在羊业和鹿业生产中的应用和推广。

3 黄体酮阴道栓同期发情控制技术的探究与改进

围绕生产过程中黄体酮栓引发感染和栓体丢失两大问题,笔者通过多年的实践对黄体酮栓在使用过程中的无菌操作流程进行多次改进。（1）埋栓时使用抗生素可以显著降低感染率；（2）在埋栓过程中重复使用一把厂家生产的专用置入器（260元）,无论采取何种措施都不能完全杜绝因置入器造成的污染。而大量的自制简易置入器（0.2 元）可以避免此问题,在埋置时即干净又快捷；（3）栓体及栓尾必须埋入合适的深度,即能杜绝黄体酮栓丢失和感染现象,又能方便撤栓操作。

3.1 黄体酮阴道栓同期发情控制技术应用初探

3.1.1 试验材料

海绵栓、海绵栓专用置入器1 把（厂家配套生产）、CIDR栓、CIDR 栓专用置入器1 把（厂家配套生产）、0.1%高锰酸钾溶液、消毒喷壶、青霉素+链霉素配制双抗生理盐水、阴道冲洗器、孕马血清（宁波三生）。

3.1.2 试验方法

选择经产空怀健康母羊60 只,平均分为两组,分别进行海绵栓和CIDR 栓的埋置操作：（1）母羊站立保定,助手用装有0.1%高锰酸钾溶液的消毒喷壶清洗母羊外阴；（2）术者将栓体安装入专用置入器内,左手两指将阴唇拨开,右手将置入器插入阴道深部（注意：先向上倾斜45°插入,稍有阻力时再平行插入避免擦伤尿道口）,置入器官完全没入阴道后推动顶杆将栓体推出并缓慢拔出置入器,栓尾露出外阴；（3）用喷壶清洗消毒双手和置入器后继续重复操作；（4）埋置12d 后撤栓,观察栓体有无白色或黄色脓性液体污染,统计阴道感染情况、栓体丢失情况,并用双抗生理盐水冲洗阴道；（5）注射孕马血清250IU；（6）统计撤栓后72h 发情率。

3.1.3 试验结果

撤栓时统计栓体丢失率CIDR 栓13.3%,海绵栓6.7%；感染率分别为CIDR 栓33.3%,海绵栓60%；72h 内发情率为CIDR 栓80%,海绵栓63.3%,见表1。

表1 初探感染率及丢栓率统计

3.2 黄体酮阴道栓同期发情控制技术的初次改进

针对感染和丢栓问题,对试验一进行改进：埋CIDR 栓时使用抗生素预防感染、并且剪短栓尾防止丢栓。调整海绵栓棉线长度,并将棉线尾部系成环装。将青霉素链霉素粉倒入海绵栓包装袋中,使栓体吸附药粉。

3.2.1 试验材料

海绵栓、海绵栓专用置入器1 把（厂家配套生产）、CIDR栓、CIDR 栓专用置入器1 把（厂家配套生产）、0.1%高锰酸钾溶液、消毒喷壶、剪刀、青霉素+链霉素配制双抗液体石蜡、青霉素+链霉素配制双抗生理盐水、阴道冲洗器、孕马血清（宁波三生）。

3.2.2 试验方法

选择经产空怀健康母羊300 只,平均分为两组,分别分5批进行海绵栓和CIDR 栓的埋置操作：（1）母羊站立保定,助手用装有0.1%高锰酸钾溶液的消毒喷壶清洗母羊外阴；（2）术者将栓体尾线剪短后安装入专用置入器内,蘸取适量青霉素+链霉素配制双抗液体石蜡。左手两指将阴唇拨开,右手将置入器插入阴道深部,推动顶杆将栓体推出置入器后缓慢拔出置入器官；（3）用喷壶清洗消毒双手和置入器官继续重复操作；（4）埋置12d 后撤栓,统计阴道感染情况（栓体有白色或黄色脓肿包裹）、栓体丢失情况并用双抗生理盐水冲洗阴道；（5）注射孕马血清250IU；（6）统计撤栓后72h 发情率。

3.2.3 试验结果

在撤栓时统计CIDR 栓感染率和栓体丢失率分别降至6%和2.7%；海绵栓感染率和栓体丢失率分别降至8.7%和0.67%；72h 内发情率为CIDR 栓99.3%,海绵栓96.7%。试验数据达到理想效果,见表2。

表2 初次改进感染率及丢栓率统计

3.3 黄体酮阴道栓同期发情控制技术的再次改进

在梅花鹿人工输精推广试验中,由于适宜的配种季节短暂,冷冻精液昂贵,同时防止某些传染性疾病的传播,同时减少抗生素在生产中的使用,要求同期发情及人工输精操作时使用的器具必须为一次性使用消毒用具,从而杜绝产道感染和栓体丢失,以实现更高的情期受胎率。如此严苛的要求下不得不放弃可以重复使用的CIDR 专用置入器[6]。通过多次选择和比对,笔者锁定了一种耐110℃高温蒸煮消毒,内径为12mm 的PEX 太阳能热水管。将水管截为15～18cm 的小段,一端削为马蹄形,且将边缘钝化制成简易阴道栓置入器（如图3 所示）。使用前进行清洗消毒备用。

3.3.1 试验材料

海绵栓、CIDR 栓、自制简易置入器60 支、一次性筷子60支、0.1%高锰酸钾溶液、消毒喷壶、无菌袋（可用长臂手套代替）、孕马血清（宁波三生）。

3.3.2 试验方法

在埋栓前做好准备工作,将双手洗净消毒后把CIDR 栓逐个安装入简易CIDR 置入器内,安装时注意将CIDR 栓尾与栓体对折并行,这样安装埋置后栓尾就不会露出外阴,从而避免经栓尾造成阴道感染和因啃咬丢栓的现象。将安装好栓体的置入器装入无菌袋内备用。

选择经产空怀健康母羊300 只,平均分为两组,分别分5批进行海绵栓和CIDR 栓的埋置操作：埋栓时术者待助手用消毒液将母羊外阴清洗干净后,左手两指将阴唇拨开,右手将CIDR 置入器插入阴道深部,然后左手捏住置入器尾,右手持一次性筷子将栓体推出置入器,同时缓慢拔出置入器。用完的置入器清洗消毒保存以备下次使用。埋置12d 后撤栓,统计阴道感染情况（栓体有白色或黄色脓肿包裹）、栓体丢失情况,用双抗生理盐水冲洗感染羊只阴道；注射孕马血清250IU；观察统计撤栓后72h 发情率。

3.3.3 试验结果

在撤栓时未发现肉眼可见的感染和丢栓情况,试验数据达到理想效果,见表3。

表3 再次改进感染率及丢栓率统计

3.4 改进后黄体酮阴道栓同期发情控制技术在梅花鹿的生产实践

2019 年秋,在银川、中卫、固原的5 家梅花鹿养殖场,同期发情处理梅花鹿共98 只。

3.4.1 试验材料

CIDR 栓、自制简易置入器60 支、一次性筷子60 支、0.1%高锰酸钾溶液、消毒喷壶、无菌袋（用长臂手套代替）、孕马血清（宁波三生）。

3.4.2 试验方法

（1）无菌操作将CIDR 栓尾与栓体对折并行安装进置入器,安装好栓体的置入器装入无菌袋内备用；（2）埋栓时,术者待助手用消毒液将母鹿的外阴清洗干净后,左手两指将阴唇拨开,右手将置入器插入阴道深部,然后左手捏住置入器尾,右手持一次性筷子将栓体推出置入器,同时缓慢拔出置入器。用完的置入器清洗消毒保存以备下次使用；（3）埋置12d 后撤栓,统计阴道感染情况（栓体有白色或黄色脓汁包裹）、栓体丢失情况并用双抗生理盐水冲洗感染母鹿阴道；（4）注射孕马血清250IU；（5）统计撤栓后72h 发情率。

3.4.3 试验结果

在撤栓时未发现肉眼可见的感染和丢栓情况,发情率99%,试验数据达到理想效果,见表4。

表4 改进后的技术在梅花鹿上的实践效果统计

4 结论

传统的埋栓方式栓体丢失和栓体造成的阴道感染多发,造成同期发情率低。分析其主要原因为：（1）栓尾露出外阴容易被啃咬造成丢栓；同时露出的栓尾形成病原微生物由外入侵的通道；（2）重复使用的置入器在操作过程中难免会造成栓体污染,引起感染发生；（3）初次改进是在埋栓时使用抗生素和合适的栓尾埋置深度可以有效降低感染率和栓体丢失率,但由于剪短栓尾后撤栓操作比较费劲；（4）自制阴道栓置入器可以将栓体埋入阴道深部防止丢栓,同时CIDR 栓尾结构完整,撤栓操作省时省力,有效控制了感染,工作效率也得到显著提高,值得在梅花鹿和羊的同期发情技术应用实践中进行推广。

5 讨论

科学技术实践推广的关键在于各生产环节的细节把控。但埋栓作为同期发情工作中最为关键的一步,正确的栓处理、正确的装栓位置和无菌操作是发情率和受胎率的基本保证。

笔者通过多年的实践总结,跳出了原有的思维定式,摒弃传统的操作模式,严把无菌操作,创新出一套批量埋置黄体酮阴道栓的操作规范。

（1）自制大量的阴道栓置入器并清洗消毒。无菌操作将CIDR 栓尾与栓体对折并行安装进置入器,海绵栓则需将尾线对折系为环状并调整为适宜长度,然后将栓尾和栓体先后塞入置入器内。安装好栓体的置入器装入无菌袋内备用。

（2）埋栓时术者待助手用消毒液将母畜的外阴清洗干净后,左手两指将阴唇拨开,右手将置入器插入阴道深部,注意先向上倾斜45°插入,稍有阻力时再平行插入避免擦伤尿道口。然后左手捏住置入器尾,右手持一次性筷子将栓体推出置入器,同时缓慢拔出置入器。用完的置入器清洗消毒保存以备下次使用。

（3）埋置12d 后撤栓,用双抗生理盐水冲洗阴道,注射孕马血清。

无菌操作是兽医工作者的基本操作规范,在实践生产中往往因环境和条件的限制或主观态度轻视而荒废。成败往往取决于各环节的细节把控,在生产实践的每个环节,都应创造条件、排除干扰,坚持科学规范的操作程序,保证无菌操作。

激素的使用作为同期发情技术的另一重要环节,尤其是激素注射操作同样要注重无菌操作,建议使用1ml 一次性注射器。杜绝注射器针头重复使用,注射部位严格消毒,这样规范的操作也是保证高同期发情率的必要措施。