2019 年河南省兽医实验室检测能力比对结果分析

袁淑萍 刘敏 靳冬 闫若潜

（河南省动物疫病预防控制中心 471000）

为进一步加强兽医实验室管理,提高兽医实验室检测能力和水平,按照《农业农村部办公厅关于开展2019 年省级兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[1]和《河南省畜牧局关于开展2019 年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》的有关要求[2],河南省畜牧局在2019 年6 月组织开展了市、县级及第三方兽医实验室检测能力比对工作。

1 比对计划

本次比对依据河南省畜牧局关于2019 年兽医系统实验室检测能力比对工作的文件要求,省辖市、直管县/市动物疫病预防控制中心兽医实验室和第三方检测机构实验室共设置7 个比对项目,分别是H7亚型禽流感病毒抗体（AIV Ab）HI 试验、猪伪狂犬病gB 抗体（PRV gB Ab）ELISA 试验、布鲁氏菌病抗体（BRU Ab）试管凝集试验,非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸荧光PCR 试验、口蹄疫病毒（FMDV）核酸荧光RT-PCR 试验、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 核酸荧光RT-PCR 试验、新城疫病毒(NDV) 核酸荧光RT-PCR 试验；县区级动物疫病预防控制中心兽医实验室共设置4 个比对项目,分别是H7亚型禽流感病毒抗体（AIV Ab）HI 试验、猪伪狂犬病gB 抗体（PRV gB Ab）ELISA 试验、布鲁氏菌病抗体（BRU Ab）试管凝集试验、非洲猪瘟（ASFV）或新城疫病毒(NDV) 核酸荧光RT-PCR 试验。

2 比对方法

2.1 试验方法与标准

本次实验室能力比对试验共涉及7 个检测项目,均采用国家兽医参考实验室或专业实验室推荐的方法和试剂,HI 试验和试管凝集试验所用试剂由参与比对的各级实验室自行准备,但要求HI 试验的抗原和阴阳性血清购于哈尔滨维科生物,试管凝集试验抗原和阴阳性血清购于中国兽药监察所,其余试剂由河南省动物疫病预防控制中心统一配备,详见表1。

2.2 比对样品的准备

除PRV gB Ab 检测样品委托不参加此次比对的第三方实验室提供外,其余均由河南省动物疫病预防控制中心自行准备。

2.2.1 H7亚型AIV Ab 检测样品

由哈尔滨维科生物技术有限公司购入该项目标准阴性血清、阳性血清,稀释得到鸡血清样品5 份,标定参考值分别为6log2、3log2、0log2,各参考值样品数目不定。

2.2.2 BRU Ab 检测样品

由中国兽医药品监察所购入该项目标准阴性血清、阳性血清,稀释得到牛血清样品5 份,标定参考值分别为强阳性（1：400）、阳性（1：100）、阴性,各参考值样品数目不定。

2.2.3 PRV gB Ab 检测样品

由河南洛阳莱普生生物公司制备猪血清样品5 份,标定参考值分别为强阳性、弱阳性、阴性,各参考值样品数目不定。

2.2.4 ASFV 核酸检测样品

由中国动物疫病预防控制中心购入质粒稀释得到样品5份,标定参考值分别为阳性、阴性,各参考值样品数目不定。

2.2.5 FMDV 核酸检测样品由中国兰州兽医研究所的抗原稀释得样品5 份,标定参考值分别为阳性、阴性,各参考值样品数目不定。

表1 比对试验的方法、标准和主要试剂

2.2.6 PRRSV 核酸检测样品

由疫苗稀释得到样品5 份,标定参考值分别为阳性、阴性,各参考值样品数目不定。

2.2.7 NDV 核酸检测样品

由疫苗稀释得样品5 份,标定参考值分别为阳性、阴性,各参考值样品数目不定。

2.3 比对样品的保存和传递

为保证比对样品良好的生物学活性,样品均存放于-20 ℃以下的冰柜中。分发时将样品和试剂放入带有冰袋的泡沫箱中保存,由参加比对的省辖市实验室派专人在规定时间内统一领取,并在12h 内送达参加比对的实验室[3]。

2.4 评判标准

2.4.1 H7亚型AIV Ab 检测评判标准

6log2、3log2、0log2 的样品检测结果应分别与参考值一致,与参考值偏差不超过1 个滴度可视为合格。

2.4.2 BRU Ab 检测样品评判标准

强阳性样品检测结果为1：400,阳性样品结果为1：100,强阳性和阳性结果与参考值偏差不超过1 个滴度可视为合格,阴性样品检测结果为＜1：50。

2.4.3 PRV gB Ab 检测样品评判标准

强阳性和弱阳性样品检测结果为阳性,阴性样品的检测结果应为阴性,同时报告样品检测OD 值。

2.4.4 核酸检测样品评判标准

阳性样品检测结果为阳性,阴性样品的检测结果应为阴性；除FMDV 核酸检测样品外报告样品检测CT 值。

3 比对结果与分析

3.1 总体结果

根据比对结果评判标准,在参加比对试验的18 个省辖市、10 个省直管县、114 个县区级和3 个第三方兽医实验室中共有12 个省辖市、1 个省直管县、43 个县区级和2 个第三方兽医实验室比对结果全部正确。详见表2、3。

3.2 省辖市兽医实验室

12 个实验室所有比对项目的检测结果100%正确,所有比对项目检测结果平均正确率为96.98%,同时2018 年平均正确率为97.30%[4],2017 年平均正确率为94.88%[5],保持了较高的检测水准。其中不同比对项目检测结果平均正确率见表3。这说明各省辖市实验室检测体系比较稳定,兽医实验室检测能力比对在提升实验室能力建设方面发挥了重要作用。

3 个实验室所有比对项目的检测结果100%正确,6 个实验室所有血清学检测项目结果100%正确；2 个实验室所有病毒核酸检测项目结果100%正确,所有比对项目检测结果平均正确率为95.56%。其中不同比对项目检测结果平均正确率见表3、附图。有1 个直管县实验室H7亚型AIV Ab 检测结果正确率为0。仅有3 个直管县/市的实验室具备非洲猪瘟检测能力,有1个直管市尚不具备病毒核酸检测能力。无论是从比对结果的正确率上还是实验室自身能力建设上,多数直管县/市明显弱于省辖市。同时H7亚型AIV Ab HI 和BRUAb 试管凝集试验的正确率为明显较低,表明直管县/市检测能力在定量或半定量的血清学检测项目中较为薄弱,需要进一步加强训练和质量控制,提高准确率。

3.3 县区级兽医实验室

43 个实验室所有比对项目的检测结果100%正确,占县区级参赛实验室的37.72%；100 个实验室BRUAb 检测项目结果100%正确,占县区级参赛实验室的87.72%；101 个实验室H7亚型AIV Ab 检测项目结果100%正确,占县区级参赛实验室的88.60%；105 个实验室PRVgB Ab 检测项目结果100%正确,占县区级参赛实验室的92.10%；30 个实验室ASFV 核酸检测项目结果100%正确,占县区级参赛实验室（36 个）的83.33%；21 个实验室NDV 核酸检测项目结果100%正确,占县区级参赛实验室（27 个）的77.78%。所有比对项目检测结果平均正确率为91.66%,其中不同比对项目检测结果见表3。

表2 各级实验室正确数比对结果统计

表3 各级实验室正确率比对结果统计

个别实验室检测结果的正确率较低,3 个实验室PRVgB Ab、4 个实验室BRUAb 和2 个实验室ASFV 核酸检测结果平均正确率均低于60%,检测能力有待提升。

3.4 第三方兽医实验室

比对项目检测结果平均正确率为94%,2018 年平均正确率为97.14%[4],2017 年平均正确率为91.3%[5]。不同比对项目检测结果平均正确率如下：H7亚型AIV Ab 100%、BRUAb 87.00%,PRVgB Ab 100%、O/A 型FMDV 核酸100%、PRRSV核酸93.00%、NDV 病毒核酸86.67%。但此次比对试验结果选取的第三方实验室数量较少,并不能完全反映河南省第三方实验室的整体水平,仅用于为与其合作提供部分参考。

4 结论和展望

兽医实验室是做好兽医工作的基础条件,兽医实验室能力比对是评价兽医实验室检测水平的重要手段,也是加强兽医实验室质量控制的有效方法。本次比对试验项目涉及禽流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、非洲猪瘟、新城疫等重大动物疫病,又涉及布病等人畜共患病；比对方法涉及HI、试管凝集、ELISA、荧光PCR、荧光RT-PCR 等,河南省各级实验室和第三方实验室均展现了较高水平,但也暴露了个别检测项目的不足。希望各地认真总结本次比对工作,并以此为契机,深入分析查找问题,研究制定改进措施,强化实验室日常监管,完善实验室质量管理体系和生物安全管理体系建设,加强监测设备的补充与更新,加强对实验室专业技术人员的业务培训,不断提升专业技术队伍素质,全面提升检测能力和水平。