莲柏外洗液熏洗对尖锐湿疣患者外阴Ki-67蛋白表达的影响

关健缨 葛 炎 郑永平 陈苑湲

尖锐湿疣由HPV感染引起，具有强传染性及易反复发作特点，对患者的日常生活及性生活质量均造成不同程度的影响[1]，高危HPV感染还是导致肿瘤发病因素之一。严重影响患者身心健康，导致其生活质量下降[2]。容易产生抑郁、缺乏安全感，怕传染家人等高压心理情绪，也降低了寻找性与爱的机会。我院采用莲柏外洗液熏洗治疗通过有效调节外阴湿热环境，改善(阴道)内环境，对女性阴道炎等疾病临床疗效显著，同时亦有效减少尖锐湿疣患者激光治疗次数，缓解患者抑郁、焦虑情绪、提高患者性生活满意度的作用。国内外实验研究方面均报道Ki-67作为增殖细胞具有较强灵敏度，其半衰期短，检测假阴性或假阳性结果低，可用于检测湿疣发展与预后[3]。本研究旨在通过研究中药熏洗对Ki-67蛋白表达的影响，探讨中药熏洗对HPV病毒复制机制的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料所有患者均为我院门诊患者，采用随机数字表法分为治疗组25例，对照组25例，均为女性患者，治疗组年龄27～42岁；平均35.2岁；发病时间0.2～6.3个月，平均3.5个月。对照组年龄25～38岁，平均32.7岁；发病时间0.3～7.5个月，平均3.2个月。2组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 诊断标准均经组织病理学检查及患者临床表现，符合《安德鲁斯皮肤病学》[4]中诊断标准确诊。

1.3 纳入与排除标准①符合诊断标准患者；②均为初治患者；③入组前4周未使用过抗病毒类或免疫抑制类药物；④排除严重系统性疾病和免疫性疾病患者；⑤排除哺乳或孕娠期患者；⑥能按医嘱执行中药熏洗治疗患者。

1.4 治疗方法治疗组：治疗前女性患者取外阴皮损作病理及免疫组化Ki-67检查，并予激光治疗外阴尖锐湿疣，治疗后予莲柏外洗液(组成：苦参30 g，穿心莲30 g，黄柏20 g，地肤子20 g，毛冬青20 g，百部10 g，土茯苓10 g，白鲜皮10 g，荆芥穗10 g，紫花地丁10 g等。煎煮2次，每次1.5 h，每2剂配成150 ml。由中山市中医院制剂室提供)熏洗治疗外阴，每天1次，每次15～20min。1个月为一个疗程复诊，取药外用，随诊发现疣体再现者，记录、计算疣体大小个数后，予激光治疗。3个疗程后取外阴皮损作免疫组化Ki-67检查。对照组：治疗前女性患者取外阴皮损作病理及免疫组化Ki-67检查，予激光治疗外阴尖锐湿疣；每个月复诊1次，随诊发现疣体再现者，记录、计算疣体大小个数后，予激光治疗。治疗3个月后取外阴皮损作免疫组化Ki-67检查。

1.5 观察指标采用单个疣体大小及数量量化评分法[3]进行，即单个疣体<1mm为1分，1 mm≤单个疣体≤5 mm为2分，单个疣体>5 mm为3分，单个患者各个疣体中分值为该患者皮损评分。Ki-67阳性表达判定标准：光镜下观察，正常Ki-67阳性细胞表现为细胞核出现综黄色颗粒，着色范围以百分率计分(在10×104高倍镜下随机选取10个视野，计数染色阳性表皮角质形成细胞所占百分比均值)。表达强度判定标准：以4级定量法评估阳性反应强度，阴性(-)：阳性细胞数<5%；弱阳性(+)：阳性细胞数5%～25%；阳性(++)：阳性细胞数26%～75%；阳性(+++)：阳性细胞数>75%；(-)为阴性表达，(+)—(++)为低表达，(+++)为过度表达。复发情况：嘱患者3个月内随诊，调查患者复发情况，发现于皮损部位或周围出现新皮损(包括可疑皮损、冰醋酸试验阳性者)判为复发。

1.6 疗效评定标准痊愈：皮损全部消退；显效：皮损消退90%以上；有效：皮损消退50%以上；无效：皮损不消退或反而增多[5]。

2 结果

2.1 2组患者疗效比较治疗组总有效率为96.0%，高于对照组的84.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者疗效比较 (例，%)

2.2 2组患者复发情况比较治疗组总复发率为56.0%，低于对照组的80.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者复发情况比较 (例，%)

2.3 2组患者ki-67阳性表达比较治疗前，治疗组ki-67蛋白检测的阳性率为88.0%，治疗后为68.0%；治疗前，对照组ki-67蛋白检测的阳性率为92.0%，治疗后为88.0%。治疗组阳性率明显低于对照(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者Ki-67阳性表达比较 (例，%)

3 讨论

尖锐湿疣由HPV感染引起，具有强传染性及易反复发作特点，目前发现的HPV病毒疣120多种，其中的高危HPV感染还是导致肿瘤发病因素之一，尖锐湿疣多采用激光、冷冻等破坏性方法，治疗时局部疼痛、容易出血或损毁疣体正常组织，术后容易复发、感染、遗留瘢痕等，给患者带来极大精神创伤和心理压力[6]。

Ki-67抗原定位于细胞核，是一组与细胞增殖相关的非组核蛋白，编码Ki-67的基因定位位于第10号染色体长臂上，由15个外显组成，有2种变异体，主要功能与细胞代谢相关，除G0、G1早期外，其余均有表达，M期最高，Ki-67半衰期短，细胞脱离增殖周期后迅速下降，故Ki-67能准确反映细胞增殖活性，其优势高于PCNA指数、DNA指数、DNA倍体含量等表示细胞增殖的指标[7]。

国内外报道多种恶性肿瘤中均存在Ki-67的过度表达，推测Ki-67可能是一种原癌基因[8],其过度表达能导致肿瘤发生。

随着宫颈癌防癌筛查工作开展，宫颈癌的检出逐年增加并有年轻化趋势，随着时代变迁，女性生育年龄越来越晚，因此部分女性尚未完成生育，则感染HPV病毒，故寻找一种对HPV有一定抑制作用的安全临床用药方法对临床工作提出挑战。

莲柏外洗液由苦参30 g，穿心莲30 g，黄柏20 g，地肤子20 g，毛冬青20 g，百部10 g，土茯苓10 g，白鲜皮10 g，荆芥穗10 g，紫花地丁10 g等组成。方中苦参、黄柏、白鲜皮清热燥湿、解毒祛风、泻火；穿心莲、毛冬青清热解毒，活血消肿；土茯苓、地肤子主治湿热下注[9，10]；百部抗菌杀虫；荆芥穗解表、透疹、消疮；地肤子祛风止痒。西医药理证明，地肤子具有抗菌、提高抵抗力，能有效抑制各种有害病菌，对口腔、肠道、咽喉等黏膜内环境有抗菌抑菌功效；苦参中含有的苦参醚有抗菌、抑菌作用，苦参碱具有抗肿瘤作用；百部、荆芥穗西医药理显示具有抗菌、抗病毒作用；紫花地丁含多种微量元素，可促进上皮细胞修复、增强细胞活性，通过酶系统，对生物机体的代谢及免疫功能发挥调节和控制，起到抗病毒作用；土茯苓具有抗肿瘤、抑制致敏T淋巴细胞；白鲜皮中含有白鲜碱、梣皮酮也具有抑制真菌、细菌及抗肿瘤作用[11，12]。

研究证明，莲柏外洗液纯中药制造，研究证明其具有抑制阴道菌群数，改善阴道内环境，从而有效抑制基底细胞Ki-67过度增殖作用，有效抑制HPV病毒繁殖，对缩短尖锐湿疣病程，减少尖锐湿疣复发疗效确切。方中标本兼顾，功补兼施，能有效提高机体免疫平衡，防治湿疣复发，使用方便、安全，值得临床推广。