1例Y/14号染色体不平衡易位的45，X男性的遗传学特征并文献复习

翟秀璋 周元圆 史秋雯 廖维芳 石明芳 林发全

(1 广西医科大学第一附属医院检验科，南宁市 530021，电子邮箱：798556112@qq.com；广西医科大学第三附属医院暨南宁市第二人民医院2 检验科，3 生殖中心，南宁市 530031)

45，X男性也称为X-O男性或XO，是一种罕见的疾病[1]，它通常是由于Y染色体与常染色体易位引起[2]。在一般人群中，Y/常染色体易位的发生率很低，大约为1/2 000[3]。Y/常染色体发生易位导致两者中的一种染色体丢失，患者的临床表型可能取决于Y染色体丢失的部位，以及丢失常染色体的来源和数量[4]。本文报告了1例核型为45，X，add(14)(p13)伴有身材矮小、无精子症的男性病例，通过分析PCR及荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization，FISH)等检测结果，并结合文献探讨其表型与核型的关系。

1 临床资料

1.1 病史及体格检查 患者，42岁，社会性别为男性，因婚后15年未育于2019年3月在广西医科大学第三附属医院生殖中心就诊。家系调查：患者父母均非近亲结婚，否认家族遗传史；有两个哥哥和1个姐姐均已婚且育有健康孩子。入院体格检查：身高159 cm，体重65 kg，男性表型正常，双侧睾丸小，质软，短阴茎。

1.2 辅助检查结果

1.2.1 精液常规分析：参照第5版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》[5]进行精液常规分析，重复3次直接、离心镜检，结果均提示为无精子。

1.2.2 性激素检测： 使用Beckman Coulter Access化学发光免疫分析系统检测血清促卵泡激素(follicle-stimulating hormone，FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、催乳素、睾酮水平。 结果显示： FSH为14.9 mlU/mL(正常参考范围：0.95～11.95 mlU/mL)，LH 为3.12 mlU/mL(正常参考范围：0.57～12.07 mlU/mL)，催乳素为6.8 ng/mL(正常参考范围：3.46～19.40 ng/mL)，睾酮250.54 ng/dL(正常参考范围：142.39～923.14 ng/dL)。

1.2.3 Y染色体微缺失检测：抽取患者乙二胺回乙酸抗凝血标本2 mL，按Y染色体微缺失基因检测试剂盒[亚能生物技术(深圳)有限公司，批号：Y20190902]说明书进行检测。共检测15个序列标签(sequence-tagged site，STS)，包括6个基础STS[AZFa区(SY84、SY86)，AZFb区(SY134、SY127)，AZFc区(SY254、SY255)]、8个扩展STS[AZFa区(SY82、SY88、SY1064、SY1065)，AZFb区(SY105、SY121)，AZFb、c区(SY153、SY1192)]和1个异染色体标签SY160，以SRY、ZFX/Y基因为实验内控，正常男性、女性DNA分别为阳性对照、阴性对照，蒸馏水为空白对照进行扩增，扩增产物在琼脂糖凝胶电泳上检测，凝胶成像系统上观察结果并拍照。 结果显示：SRY基因存在， AZFa区未缺失、AZFbc区联合缺失，染色体异质化。见图1。

图1 琼脂糖凝胶电泳紫外光下电泳图

1.2.4 染色体核型分析：按细胞培养常规方法行外周血淋巴细胞培养、收获、制片及G显带，使用蔡司(德国)染色体核型分析系统进行染色体计数、核型分析，按人类细胞遗传学命名国际体制ISCN2016[6]做出诊断报告。结果显示为45，X，add(14)(p13)，见图2。

图2 G显带核型分析结果

1.2.5 FISH分析：应用两组探针组合分别与中期染色体进行杂交，第1组包括CEP X(绿色信号)、CEP Y(红色信号)、CEP 18(白色)，第2组包括CEN1422(绿色信号)、SRY基因(红色信号)、Yq12(白色)。按Abbot-Vysis公司FISH检测试剂说明书进行，荧光显微镜下观察30个细胞中期分裂相，在Cyto Vision工作中进行分析。杂交结果证实14号染色体短臂增加的片段来源于含有SRY基因的Y染色体短臂，Yp与14p融合形成一条14号衍生染色体，Y染色体长臂丢失。结合G显带核型分析和PCR结果，患者的核型为45，X，psu dic(14；Y)(p11；q11).ish psu dic(14；Y)(CEN1422+，Yq12-，CEP Y+，SRY+)，见图3。

图3 FISH检测结果

2 讨 论

在不育夫妇中，40%～50%与男性因素有关，而7%不育男性和10%～15%无精子症男性的病因与染色体异常有关[7]。有研究报告，不育男性的染色体异常核型发生率比一般人群高8～10倍[8]，主要涉及X和Y染色体[9]。Klinefelter综合征染色体核型是无精子症男性性染色体异常最常见的核型，约占83.3%[10]；而男性45，X核型较罕见，目前国内外报道的病例不足40例。研究显示，45，X实质上是Y染色体与常染色体发生的不平衡易位，且易位在常染色体上的额外物质全来自Y染色体[11]。本文患者14号染色体短臂增加的片段实质来自Y染色体，且14p与Yp融合形成一条含假双着丝粒染色体的14号衍生染色体，Y染色体长臂丢失，从而导致患者无精子及身材矮小。

1980年，Turleau等[11]首次报告了1例45，X无精子症男性存在Y/14号染色体发生不平衡易位的病例，除本文患者外，截至目前仅有6例病例报告[11-16]，见表1。这6例患者均含有SRY基因，除de la Chapelle等[12]报告的1例男孩患有尿道下裂和轻微精神运动发育迟缓外，其余均为因不育而就诊的成年男性；FISH分析证实这6例G显带核型分析为45,X的患者实质上是Y/14发生不平衡易位，导致患者Y染色体长臂大部分缺失，患者出现特殊的临床症状，成年男性往往表现为无精子症。

表1 6例Y/14号染色体不平衡易位的45，X男性情况

人类SRY基因是一个单外显子，无内含子，位于Y 染色体短臂，编码睾丸决定因子，是决定男性性别的最主要调控因子[17]。SRY基因在支持细胞前体分化和表达中起关键作用：当SRY基因存在时，双能性腺进入睾丸，发展为男性；没有SRY基因存在，则进入卵巢，发展为女性[18]。本文通过PCR及FISH证实该患者SRY基因的完整性，说明该患者具有男性特征的合理性。AZF基因缺失是引起男性生精障碍导致不育的常见危险因素[19]。1976年，Tiepolo等[20]首次提出AZF基因，并发现其定位于Yq11；1996年，Vogt等[21]将AZF基因分为AZFa、AZFb、AZFc 3个区域；1999年，Kent-First等[22]还发现AZFb和AZFc之间存在AZFd区域，任何1个或多个区域的联合缺失都会影响精子生成，造成少、弱精子症甚至无精子症，影响生育，而生育问题的严重程度则取决于AZF基因缺失的类型及位置[23]。研究表明，在非阻塞性无精子症和严重少精子症中，AZFc最容易缺失，AZFb次之，而AZFa缺失较罕见[24]。有研究显示，AZFa或AZFbc联合缺失的男性，临床表现为无精子症或严重少精子症，行睾丸穿刺术获取精子的概率几乎为零，且不建议进行此手术；而AZFc缺失者的临床表型和睾丸组织学表型多样化，表现为少精和无精子症等，可以行睾丸穿刺术取精，但该类患者在行辅助生殖时应进行遗传学评估[25]。本文中患者AZFbc联合缺失，染色体异质化，因此表现为无精子症，不能正常生育。

本文患者临床表现身材矮小，可能与位于人类Y染色体长臂近端着丝粒区一个称为生长控制基因(GCY基因)的缺失有关，该基因影响男性的身高[26]。另有学者报告，位于Y染色体短臂的PAR1中矮小同源盒基因(short stature homeobox-containing gene，SHOX)的缺失是特纳综合征矮小的致病基因[27]。Fukami等[28]研究发现，基因的突变、缺失以及拷贝数变异是导致SHOX单倍计量不足的遗传因素，SHOX单倍计量不足影响骨骼生长，从而影响生长发育。因条件有限，本文未能对患者进行SHOX检测，不能确定其是否缺失。

综上所述，SRY基因是决定45，X男性患者性别最主要的基因，Y/常染色体不平衡易位可能导致患者不育和身材矮小，这或可为该类患者的临床诊断及辅助生殖治疗提供帮助。