理气暖胃颗粒质量标准研究*

★ 杨晗 孙嘉文 李胜华 胡浩武 高羽 沈丽琴 周青罡*（江西汇仁药业股份有限公司 南昌 330052）

理气暖胃颗粒（原名：气滞胃炎颗粒）［国药准字Z20110034］为江西汇仁药业股份有限公司独家研制的新药品种。该方系南昌市草药科研所副所长孟灵源根据《景岳全书》柴胡疏散加减而成［1］，由柴胡、白芍、甘草、高良姜、香附、枳壳、旋复花、郁金、元胡等9味中药材组成。功能主治为疏肝理气，温胃止痛。适用于肝胃不和挟寒型慢性浅表性胃炎，主治胃脘胀痛或痛窜两胁，且喜温喜按，嗳气频作，嘈杂泛酸，或口泛清涎，舌质淡红，苔薄白或白厚，脉弦。或遇恼怒复发或加重，或纳呆少食，或腹胀。经临床试验表明本品应用安全、疗效确切［2］、质量稳定。为了有效控制本品制剂的内在质量，本实验对其质量标准进行研究，分别采用了薄层色谱法（TLC）及高效液相色谱法（HPLC）开展实验，对本品中的白芍、延胡索、枳壳进行定性鉴别，对芍药苷进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪；Lambda 25紫外可见分光光度仪（PerkinElmer公司）；AB204-S型电子天平（梅特勒—托利多公司）；AG-135型电子天平（梅特勒—托利多公司）。

1.2 试药 理气暖胃颗粒（自制，批号：20030501、20030502、20030503）；芍药苷对照品（购自于中国药品生物制品检定所，批号：110737-200312），橙皮甙对照品（购自于中国药品生物制品检定所）；延胡索对照药材（购自于中国药品生物制品检定所，批号：928-9001）；所用乙腈为色谱纯规格，其余试剂均为分析纯规格。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 白芍薄层色谱鉴别 取本品颗粒20 g，研细，加乙醇30 mL后，振摇5 min，滤过。滤液置已处理好的中性氧化铝固相萃取柱（中性氧化铝5g，柱子内径约1.5 cm，用乙醇30 mL进行预洗），采用乙醇30 mL进行洗脱，收集洗脱液后，蒸干，残渣加入乙醇1 mL，使之溶解，作为供试品溶液。取白芍对照药材2 g，加水50 mL煎煮30 min，滤过，蒸干，加乙醇5 mL振摇，取上清液从置已处理好的中性氧化铝固相萃取柱，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品，加入乙醇，制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。参照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录ⅥB）进行试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各10 μL，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（45∶5∶10∶0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，然后喷以5%香草醛硫酸溶液，加热使其显色，至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显示相同的颜色的斑点。结果见图1。

图1 白芍TLC鉴别图

2.1.2 枳壳薄层色谱鉴别 取本品20 g研细，加甲醇25 mL，超声波处理30 min，滤过，滤液与1 g聚酰胺（14～30目）混匀，再使溶剂挥发去尽使呈松散状，加在已制备好的聚酰胺柱上（3 g，内径1.5 cm，干法装柱），用水洗脱至近无色，5%乙醇30 mL洗脱。再加20%乙醇进行洗脱，并收集洗脱液40 mL，蒸干，再加入甲醇1 mL，使之溶解，作为供试品溶液。取枳壳对照药材1 g，加水50 mL煎煮30 min，滤过，蒸干，加入5 mL甲醇溶解，取上清液，与上述滤液同法制成对照药材溶液。另取橙皮甙对照品，加入甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录ⅥB）进行试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点样于同一0.5%氢氧化钠硅胶G板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂，展至约4 cm，取出，晾干；再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液作为展开剂，展开至约10 cm，取出，晾干，再喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，显示相同颜色的荧光斑点。结果见图2。

图2 枳壳TLC鉴别图

2.1.3 延胡索薄层色谱鉴别 取本品20 g，研细，加甲醇30 mL，超声波处理20 min，滤过，滤液蒸干，加1%盐酸2 mL使溶解，滤过，滤液加浓氨试液调至碱性，用氯仿振摇提取3次，每次10 mL，然后合并氯仿液，蒸干，所得残渣加氯仿1 mL，使之溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材lg，同法，制成溶液，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录ⅥB）开展试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各10 μL，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-氯仿-甲醇（10∶6∶1）作为展开剂，置于以展开剂预饱和过的层析缸内，展开，取出，晾干，后喷以碘化铋钾试液，放置片刻。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。结果见图3。

图3 延胡索TLC鉴别图

2.2 芍药苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱条件：色谱柱为YMC-AQ C18（6.0×150 mm）；0.1%磷酸水溶液－乙腈（87∶13）为流动相；检测波长为230 nm，理论板数按芍药苷峰计算，应不低于4 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加入甲醇，制成每1 mL含46 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品颗粒适量，研细，称取0.5 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入稀乙醇45 mL，超声提取30 min，取出，放至室温，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 系统适应性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照溶液， 按上述色谱条件测定。结果供试品芍药苷主峰与样品中其他组分色谱峰达到基线分离，见图4。

图4 理气暖胃颗粒中芍药苷的HPLC图

2.2.5 方法学考察

2.2.5.1 线性关系考察 精密称取对照品适量制成含量为206.80 μg/mL的对照品母液，分别精密吸取适量，稀释成含量为8.272、20.68、41.36、82.72 μg/mL的对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液及母液10 μL，注入液相色谱仪，进行测定。以质量浓度（μg/mL）作为横坐标，以色谱峰峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，为Y=11.34166X-13.28180（r=0.9999），表明芍药苷浓度在8.272～206.8 μg/mL的范围内，呈现良好的线性关系。

2.2.5.2 精密度试验 吸取芍药苷对照品溶液，重复进样6次，采用HPLC法进行测定，结果芍药苷峰面积的RSD为0.32%，表明所用仪器的精密度较好。

2.2.5.3 稳定性试验 取同一批样品（批号：20030501），按供试品溶液制备方法制备后，分别在0、4、8、12、24 h测定，记录峰面积，结果其RSD为1.9%，表明供试品在16 h之内稳定。

2.2.5.4 重复性试验 精密称取同一样品（批号：20030501）6份，按照供试品溶液的制备方法进行制备，采用高效液相色谱法进行测定，记录芍药苷峰面积，结果该批样品的芍药苷平均含量为4.55 mg/g，RSD为0.32%，表明本试验的方法重复性较好。

2.2.5.5 回收率试验 采用加样回收法进行试验，精密称取已知含量的同一批号样品（批号：20030501）6份，分别精密加入芍药苷对照品溶液，配制成同一浓度的6份，按供试品溶液的制备方法制备后，进行高效液相色谱测定，结果见表1。结果显示平均加样回收率为100.1%，RSD%为0.2%，表明本方法回收率较好。

表1 回收率试验结果

2.2.5.6 样品含量测定 精密称取3批样品，每批各0.5g，按上述方法进行测定，结果见表2。

表2 3批样品含量测定 mg/袋

3 讨论

本品方中共9味药，药材的成分复杂，有芍药苷、生物碱、黄酮类化合物、萜类化合物、姜黄素、橙皮甙、柚皮甙、柴胡皂甙、旋复花内酯、槲皮素等，部分药材还含有挥发油。通过摸索了多种前处理及薄层色谱的条件，再结合其药味的药理作用，从中选取了白芍、延胡索、枳壳三种药味作为鉴别项。白芍作为方中臣药，入肝、脾、肺三经，养血柔肝，缓急止痛；延胡索入心包、肝、脾、肺经，能够活血理气止痛；枳壳入脾、胃二经，疏利气机。所选取的药味在功效上的作用显著，且具有明显的特征，薄层色谱的展开及显色效果较好，重复性好，稳定性好，能够有效的进行本品的质量控制。

现代药理学研究表明，白芍中所含的有效成分白芍总苷，具有明显的抗炎作用、镇痛作用、保肝作用［3］，与本品的功能主治针对肝胃不和挟寒型慢性浅表性胃炎具有极强的相关性。白芍作为方中臣药，又作为用量最大的药味之一，故选取其所含的芍药苷作为指标化学成分，进行含量测定。根据选取指标化学成分芍药苷的性质，在供试品提取溶媒选择上，本实验在参考了2005版《中国药典》中白芍“含量测定”项下供试品溶液制备方法基础上［4］，又比较了不同溶剂的超声提取（甲醇、无水乙醇、稀乙醇），结果发现稀乙醇的提取效果好。确定采用高效液相色谱法进行检测，经过方法学验证，该方法操作便捷，准确度高，稳定性好。采用该法对三批样品中的芍药苷进行含量测定，结果表明其含量差异不大，表明了本制剂质量稳定可控。本研究所建立的质量标准相关方法，准确可靠、稳定性高、重复性好，能够用于理气暖胃颗粒的质量控制。