佳木斯地区某院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因及利福平耐药基因阳性率情况分析①

李慧玲，张译如，杨雪莹，金玄俊

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯大学校医院，黑龙江 佳木斯 154007)

结核病是由结核分枝杆菌(M.tuberculosis，MTB)感染引起的慢性传染病，是全球最具威胁的传染病之一。世界范围内的结核病(TB)控制计划正继续努力诊断耐药结核病(DR-TB)。据WHO统计资料显示，结核病在全球范围内发病率呈急剧上升趋势，死亡率居传染病之首，我国占25%[1]。而利福平(Rifampin，RIF)作为重要抗结核药物，耐药现象严重并且对利福平耐药的90%菌株同时对异烟肼耐药。因此检测利福平耐药性可作为多重耐药结核杆菌的筛选标志[2]。目前，随着分子生物学技术的发展，利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mycobacterium tuberculosis / rifampicin，XpertMTB / RIF;简称Xpert检测)是检测技术中最有应用前景的方法之一[3]。Xpert检测克服了传统方法的不足，能够以最少的实验室基础设施，更快速、敏感、特异地鉴定结核分枝杆菌和利福平(RIF)耐药性[4]。并且一项国外多中心研究结果表明，与涂片阳性和培养阳性的标本比较，Xpert检测肺结核的敏感度和特异度高达92.2%和98.2%[5]。因为Xpert检测技术具有如此高的敏感度和特异度，所以本文通过对佳木斯大学附属第一医院近一年临床Xpert检测标本的结核分枝杆菌检出率、利福平耐药率以及五种探针型号进行统计，探讨Xpert MTB / RIF在结核快速诊断中应用价值，分析本地MTB检测率以及RIF耐药率，为临床诊断对RIF耐药的结核提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018-08～2019-08我院各科送检的237例标本进行Xpert检测，其中男123例，女114例，年龄14～91岁，平均(56.72±19.54)岁。

1.2 仪器与试剂

Gene Xpert MTB / RIF检测仪及试剂盒购自赛沛(上海)商贸有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 痰液、肺泡灌洗液标本：取1mL痰/肺泡灌洗液样本加入2mL样本处理液，剧烈振荡20次，或涡旋振荡10秒，室温孵育10min；再重复振荡步骤，室温孵育5min，使用新的移液管，将2mL经过处理的样本加入试剂匣，进行GeneXpert检测。

1.3.2 胸腹水、尿液标本：将标本移至锥形离心管中，3000g离心15min，弃上清，加入2mL样本处理液重悬沉淀物，充分混匀，使用新的移液管，将2mL经过处理的样本加入试剂匣，进行GeneXpert检测。

1.3.3 脑脊液标本：如标本多于2mL且澄清，将标本移至锥形离心管中，3000g离心15min，用移液器或吸管吸掉并丢弃多于2mL的上清液，涡旋振荡以充分混匀，使用新的移液管，将2mL剩余样本加入试剂匣，进行GeneXpert检测；如标本多于2mL但不澄清，将标本移至锥形离心管中，3000g离心15min，弃上清，加入标本处理液重悬沉淀物，调节至终体积2mL，充分混匀，使用新的移液管，将2mL经过处理的样本加入试剂匣，进行GeneXpert检测；如标本少于2mL加入样本处理液补齐至2mL，无需离心，使用新的移液管，将2mL经过处理的样本加入试剂匣，进行GeneXpert检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件处理。计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Xpert MTB/RIF检测结果

本次共检测标本237例，其中男123例，女114例，结核分枝杆菌阳性34例，男15例，女19例，阳性率14.35%；利福平耐药基因检测阳性共6例，男3例，女3例，占结核分枝杆菌阳性标本的17.65%。见表1。

表1 MTB和RIF阳性率

2.2 阳性标本来源及种类分布

检出MTB共34例，检出率最高的前两个科室分别为呼吸科(16例，占47.05%)和胸外科(9例，占26.47%)，见图1；检出率最高的标本种类为痰液(18例，占52.94%)，其次为肺泡灌洗液(10例，占29.41%)，见图2。

图1 结核分枝杆菌阳性标本来源分布柱状图

图2 结核分枝杆菌阳性标本种类分布扇形图

2.3 MTB阳性标本年龄分布

根据人类年龄分段进行分组，≤14岁为儿童组，15～45岁为青年组，46～69岁为中年组，≥70岁为老年组。见表2。

表2 不同年龄组结核分枝杆菌阳性率

3 讨论

Xpert MTB / RIF检测是一种巢式PCR体外诊断技术，其通过检测结合分枝杆菌上rpoB基因及利福平耐药相关81bp的核心区间，从而实现对结合分枝杆菌感染情况及其利福平耐药情况的诊断，该检测操作简便，全程自动化，并在120min内完成[6]。该测定不需要实验室基础设施，标本可以在转移到反应盒之前直接与液化试剂混合[7]使检测更加方便快捷。研究表明Xpert MTB / RIF检测技术灵敏度远高于涂片检测[8]，并且Xpert检测技术具有操作简便，生物安全性高，在检测过程中不易受干扰等特点[9]。有文献报道[10]，在引入Xpert MTB / RIF之前和之后一年，结核病患者的数量从2,138增加到2,322，增加了9%，可见其对于提高结核分枝杆菌的检出率提供了极大的帮助。

本次研究统计了2018-08～2019-08佳木斯大学附属第一医院一年进行Xpert检测的标本共237例，结核分枝杆菌检出率为14.35%，略高于平远县2009～2014年调查的结核分枝杆菌检出率[11]11.36%，但相差不大。利福平的耐药率为17.65%，低于卫生部2007～2008年全国结病耐药性基线调查报告耐药率37. 8%[12]，这可能与我院对本地区的耐药防控措施落实较好有关。我们还发现，MTB在呼吸科和胸外科的检出率排在前两位，这主要是由于这两个科室与肺结核息息相关，患者进行Xpert检测大多是由于肺炎、肺不张、胸/腹腔积液或发热等原因，因此这两个科室的阳性率较高。从标本种类来看，痰液和肺泡灌洗液的阳性率最高，这两种标本为呼吸道标本，同样是检出肺结核的主要标本种类。另外，由于本次调查儿童组的患者较少仅有3例，而有1例为阳性，所以阳性率较高33.33%：其次老年组的阳性率最高17.33%，主要是由于老年人自身机体免疫力较差，更容易感染细菌；青年组13.85%和中年组11.70%阳性率相差不大。与曾瑜[13]等人的研究相同，无论男女结核病在65～80岁老年人群中呈一个高峰。与彭素标[14]等人的调研结果(男/女=1.73/1)不同，我院女性患者MTB的检出率略高于男性(男/女=1/1.27)，这可能与当地人群的生活习惯有关。

目前Xpert MTB/RIF在许多方面都有着广泛应用。例如，Xpert MTB/RIF技术对肺结核治疗影响最大的HIV合并结核病[15]的早期筛查具有重要意义。而且Xpert MTB/RIF对于检测肺外结核，结核性脑膜炎，糖尿病并发肺结核等均有良好的诊断价值。

在筛查方面，作者建议临床医生使用多种方法对标本进行多次检测，以降低假阳性结果的出现。对于耐药率有文献显示，我国结核复治耐药率高于初治耐药率。有学者分析复治耐药率高的主要原因是由于结核病治疗周期较长，治疗产生的不良反应较多，导致患者耐受性和治疗依从性均较差，另一方面的原因在于有些医师为患者制定的抗结核治疗方案不合理，建议临床医生为患者制定合理的治疗方案并有效督促患者服药。