久咳颗粒镇咳、抗炎和祛痰作用实验研究

仇燚 徐燕莉

（泸州市中医院，四川 泸州 646000）

小儿久咳，也归属于“久嗽”、“顽咳”、“风咳”、“痉咳”等范畴[1]，属中医学“内伤咳嗽”，囊括现代医学的上气道综合征、咳嗽变异性哮喘、感染后咳嗽等诸多疾病，其病机病因复杂，因此部分患儿病情缠绵反复，治疗效应差[2]。中医认为小儿脏腑娇弱、腠理不密，不耐寒暑、卫外机能不足，易感受外邪，尤以“风邪”为甚。肺为娇脏，最易受风邪侵袭导致“清降”功能失调、水饮失布，加之小儿脾胃不足、运化功能稚弱，则湿盛而脾虚导致水谷难化、化生痰涎，故多见小儿咳嗽夹痰[3]。四川泸州地区处于长江沿岸河谷地区，气候潮湿闷热，饮食偏于辛辣，当地儿童痰湿重而脾常郁遏，肺虚多表现为气不足而阴虚少见，故治疗小儿久咳宜以补气健脾为固本之举，化痰止咳为治标之策。久咳颗粒是本院在长期临床实践的基础上，针对泸州地区地理气候和儿童体质特点而研制的中药颗粒剂，临床上用于治疗小儿久咳疗效较好。为进一步扩大其临床应用和阐明其药理作用，我们进行了以下药效学实验。

1 材料与方法

1.1 试验药物

久咳颗粒（主要成分为黄芪、白术、防风、鱼腥草、枳壳、杏仁、桔梗、前胡、瓜壳等）由泸州市中医院药剂科提供，每克浸膏粉含原生药3.82 g，临用前生理盐水配制；阳性对照药物复方磷酸可待因口服溶液，澳美制药厂生产，批号：271026；醋酸泼尼松片，浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号：120234；氯化铵，成都市科龙化工试剂厂生产，批号：20140602。

1.2 动物

SPF级ICR小鼠，雄雌各半，体重18～22 g，由成都达硕生物科技有限公司提供，生产设施许可证：SCXK（川）2008-24。

1.3 试剂

氨水，成都市科龙化工试剂厂，AR级，规格：500 mL/瓶，批号：20140910；二甲苯，成都市科龙化工试剂厂，AR级，规格：500 mL/瓶，批号：20141012；苯酚红，成都科龙化工试剂厂，规格：25 g/瓶，批号：20100701，临用前用生理盐水配制成5%浓度备用；0.9%氯化钠注射液：由四川科伦药业股份有限公司生产，规格：500 mL/瓶，批号：20130805。

1.4 仪器

YLS-8A多功能诱咳引喘仪：山东省医学科学设备站；UV-1201型紫外可见分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司；Acculab-110.4型分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠氨水致咳模型

参考田军等的方法[4]，取ICR小鼠60只，体重18-22 g，随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、久咳颗粒高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。阳性对照组灌胃给予复方磷酸可待因口服液5 mL·kg-1，实验组高、中、低剂量分别灌胃给予久咳颗粒浸膏28 g生药·kg-1、14 g生药·kg-1和7 g生药·kg-1，模型对照组和正常对照组给予等体积的生理盐水，每日1次，连续给药7 d。末次给药1 h后，将各造模组小鼠置于诱咳引喘仪中，连续以28%浓氨水气雾刺激5 s后，记录小鼠咳嗽潜伏期以及3 min内的咳嗽次数，正常对照组置于诱咳引喘仪中，连续喷生理盐水气雾5 s。按下列公式计算咳嗽抑制率（%）：咳嗽抑制率（%）=（模型对照组炎症咳嗽次数-给药组炎症咳嗽次数）/模型对照组咳嗽次数。

1.4.2 小鼠二甲苯致耳廓肿胀模型

参考徐叔云等的方法[5]，取ICR小鼠60只，体重18-22 g，分组同1.4.1。按表2所示剂量灌胃给药，每日1次，连续给药7d，模型对照组和正常对照组给予等体积的生理盐水。于实验第7d进行试验，造模前小鼠禁食，但不禁水至少12 h，末次灌胃给药1 h后，以二甲苯30 μL均匀涂布于小鼠右耳两面致炎，正常对照组以等体积生理盐水涂布，致炎后1 h脱颈椎处死小鼠，剪下左右两侧耳廓，用直径9 mm的打孔器分别在左右两耳廓的相同部位打下圆形耳片，精密称取两耳片重量。以左右两耳片重量的差值（mg）作为炎症肿胀度，并按下列公式计算炎症抑制率（%）：炎症抑制率（%）=（模型对照组炎症肿胀度-给药组炎症肿胀度）/模型对照组炎症肿胀度。

1.4.3 小鼠酚红致气管排泌模型

参考陈奇等的方法[6]，取ICR小鼠60只，体重18-22 g，分组同1.4.1。按表3所示剂量灌胃给药，每日1次，连续给药7 d，模型对照组和正常对照组给予等体积的生理盐水。末次给药后30 min后，各造模组每只小鼠腹腔注射5%酚红溶液，注射体积为0.1 mL·（10 g）-1体重，正常对照组注射等体积生理盐水，30 min后处死动物，剥离气管，剪下甲状腺软骨至气管分支处的一段，置于2 mL生理盐水的离心管中振荡，再加入 0.1 mL NaOH，用紫外分光光度计于546 nm波长下测定OD值（用OD值表示酚红排泌量多少，OD值越大表示酚红排泌量越多）。

1.4.4 数据处理

实验数据采用SPSS 11.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差（±SD）表示。采用单因素方差分析（One-way ANOVA）法分析，方差齐则采用LSD法，方差不齐则采用Dunnett’s T3法。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 久咳颗粒对小鼠氨水所致咳嗽的影响

久咳颗粒高、中剂量连续给药7 d，可显著抑制氨水所致小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数（P<0.01和P<0.05），见表1。

表1 久咳颗粒对小鼠氨水所致咳嗽的影响（±SD，n=10）

表1 久咳颗粒对小鼠氨水所致咳嗽的影响（±SD，n=10）

注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 剂量（g生药·kg-1） 咳嗽潜伏期（s） 咳嗽次数（次） 抑制率（%）正常对照 - 0±0 0±0 -模型对照 - 23.0±10.6## 32.7±13.3## -复方磷酸可待因 5 mL·kg-1 58.0±23.3** 14.9±9.4** 54.4久咳颗粒高剂量 28 49.6±22.2* 19.4±9.6** 40.7久咳颗粒中剂量 14 43.9±13.5* 22.7±10.4* 30.6久咳颗粒低剂量 7 31.6±12.4 30.1±10.4 8.0

2.2 久咳颗粒对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

久咳颗粒高、中剂量连续给药7 d，可显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀（P<0.01和P<0.05），见表2。

表2 久咳颗粒对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（±SD，n=10）

表2 久咳颗粒对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（±SD，n=10）

注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 给药剂量（g生药·kg-1） 肿胀度（mg） 肿胀抑制率(%)正常对照 - 0.25±1.40 -模型对照 - 23.83±7.83## -醋酸泼尼松 50 mg·kg-1 11.61±6.06** 51.3%久咳颗粒高剂量 28 12.83±8.34** 46.2%久咳颗粒中剂量 14 16.73±6.68* 29.8%久咳颗粒低剂量 7 19.98±5.69 16.2%

2.3 久咳颗粒对小鼠气管酚红排出量的影响

久咳颗粒高、中、低剂量连续给药7 d，可显著增加小鼠气管酚红的排出量（P<0.01和P<0.05），见表3。

3 讨论

中医药治疗小儿久咳有较完善的理论，也有不少经典药方及单味有效中药。小儿久咳属中医学“内伤咳嗽”。中医理论认为小儿肺、脾常不足，肺气不足则卫外失职，易患呼吸道疾病，即所谓“邪之所凑，其气必虚”；而肺脏受病则肺卫亦受伤，久咳更伤肺气，无力驱邪而使病程迁延。脾虚则痰湿内生，贮于肺而见咳嗽有痰，汗多，纳差，舌淡苔白，脉细弱等。小儿久咳多为肺脾气虚而痰浊阻滞之证，治当扶正祛邪，拟用补肺健 脾，化痰止咳之法。

表3 久咳颗粒对小鼠气管酚红排出量的影响（±SD，n=10）

表3 久咳颗粒对小鼠气管酚红排出量的影响（±SD，n=10）

注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 给药剂量（g生药·kg-1） 气管酚红排出量（OD值）正常对照 - 0±0模型对照 - 0.030±0.019##氯化铵 1 g·kg-1 0.317±0.122**久咳颗粒高剂量 28 0.329±0.116**久咳颗粒中剂量 14 0.282±0.132**久咳颗粒低剂量 7 0.179±0.132*

四川泸州地区处于长江沿岸河谷地区，气候潮湿闷热，饮食偏于辛辣，当地儿童体质上多表现为痰湿重而脾常郁遏，肺虚多表现为气不足而阴虚少见，故治疗小儿久咳宜以补气健脾为固本之举，化痰止咳为治标之策。久咳颗粒是本院在长期临床实践的基础上，针对泸州地区地理气候和儿童体质特点而研制的中药颗粒剂，本方主要由玉屏风散（黄芪、白术和防风）和枳术散（枳壳和白术）加味杏仁、桔梗、前胡、瓜壳等组成。方中用玉屏风散补气疏风，枳术散健运脾胃，药理学研究表明玉屏风散具有抗炎免疫[7-9]和调节机体微生物群落[10]等作用，在儿科呼吸系统疾病、消化系统疾病和自身免疫疾病中广泛应用[10]，而枳术散在治疗消化系统疾病如慢性胃炎、消化性溃疡、功能性消化不良以及胃下垂等具有明显疗效[11]。鱼腥草、杏仁、桔梗、前胡、瓜壳化痰止咳，共奏固本驱邪之功，对稚阴稚阳之体的小儿尤为妥当，药理学研究表明鱼腥草抗炎抗微生物感染[12]，杏仁镇咳平喘抗炎[13]，桔梗止咳平喘、抗炎抑菌[14]，前胡镇咳平喘、祛痰抗炎[15]。经过长期临床实践也证明久咳颗粒对小儿久咳有较好的疗效。

为探讨久咳颗粒的现代药理作用机制，我们采用氨水致小鼠咳嗽模型、二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和气管酚红法，考察了其镇咳、抗炎和祛痰药理作用。实验结果显示，久咳颗粒能明显延长氨水所致小鼠咳嗽的潜伏期、降低小鼠的咳嗽次数，高、中剂量有统计学差异；对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀也有明显抑制作用，高、中剂量有统计学差异；对小鼠气管酚红的排出量有明显的增加效应，高、中、低剂量均有统计学差异。上述实验研究结果提示久咳颗粒具有明显的镇咳、抗炎和祛痰作用，其治疗小儿久咳的药理作用机制可能与之相关。