核磁共振法定量测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量研究

梁丽娜 时惠敏 周群华

【摘 要】 目的：探讨核磁共振法定量测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量。方法：使用核磁共振法定量测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量。解析氢溴酸东莨菪碱H谱、含量、残留溶剂的核磁共振法定量测定结果。结果：δ1.64对应的氢个数为1，峰型为d，J为17，归属为6（a）-H，δ1.85对应的氢个数为1，峰型为d，J为17，归属为7（a）-H，δ2.21对应的氢个数为1，峰型为m，J为17、4.5，归属为6（e）-H，δ2.28对应的氢个数为1，峰型为m，J为17、4.5，归属为7（a）-H，δ2.63对应的氢个数为3，峰型为s，归属为10-CH3，δ2.82对应的氢个数为1，峰型为d，J为3.5，归属为3-H，δ3.59对应的氢个数为2，峰型为m，归属为2-H、4-H，δ3.79对应的氢个数为3，峰型为m，归属为22-H、1-H、21（b）-H，δ4.02对应的氢个数为1，峰型为m，归属为21（a）-H，δ4.87对应的氢个数为1，峰型为t，J为5，归属为8-H，δ6.63对应的氢个数为4，峰型为s，归属为IS-H（4），δ7.20对应的氢个数为2，峰型为m，归属为16-H、20-H，δ7.26对应的氢个数为3，峰型为m，归属为17-H、18-H、19-H;以δ2.63峰计算样本含量结果中，样1为91.4，样2为91.6，平均值为91.5;以δ2.82峰计算样本含量结果中，样1为91.2，样2为91.8，平均值为91.5;以δ3.47峰计算乙醇含量结果中，样1为3.8，样2为3.8，平均值为3.8;以δ1.02峰计算乙醇含量结果中，样1为3.8，样2为3.8，平均值为3.8。结论：氢溴酸东莨菪碱的绝对含量检测中，核磁共振法定量测定方法更加准确快速，同时可以对其中的未知杂质进行定量、定性分析，是对标准物质绝对含量进行测定的良好方法，值得使用。临床上应当进一步推广应用。

【关键词】 核磁共振法定量;测定;氢溴酸东莨菪碱;绝对含量;研究

【中图分类号】 R6   【文献标志码】B   【文章编号】1005-0019（2020）17-047-01  当前，使用核磁共振定量法对药物进行定量、定性分析、对含量进行测定越来越广泛，在英国、欧洲、美国药典中均有此方法，我国在2010年首次收载了核磁共振波谱法[1]。氢溴酸东莨菪碱是一种抗胆碱药，在中国药典2010年版本中有所收载[2]。此次研究主要是对核磁共振法定量测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量情况进行研究，希望可以为临床测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量提供新的思路，研究如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 （1）选择核磁共振谱仪（AvanceDRX500型，瑞士布鲁克） 进行测定，配备超屏蔽超导磁体（11.74T）、双核z-梯度探头（5mm，DUEL）、温控单元（BVT-2000）、实验控制、数据处理专用软件（Topspin（1.3））、分析天平（METTLERTOLEDOAE240）。（2）试剂氢溴酸东莨菪碱、样品由广州汉方公司生产提供;苯二酚（纯度99.5%，ACROS公司生产提供）;重水（产品号：174611，99.8%氘代，J&KScientific公司生产提供）[3]。氢溴酸东莨菪碱对照品批号：100049-200308。

1.2 方法

1.2.1 样品制备 称取适量的氢溴酸东莨菪碱对照品与苯二酚，在其中加入适量体积的重水配置成0.068mol/L、0.052mol.L-1的溶液，后将其转入到核磁管中备用（5mm）[4]。

1.2.2 测定条件 使用脉冲序列（zg30）在25℃恒温条件下获得1核磁共振谱。试验参数设置：谱宽（SWH）：5000Hz;采样时间（AQ）：3.2s;采样点数（TD）：32K;射频中心频率（O1P）：2500Hz;增益（RG）：160;空扫次数（DS）：2次;采样次数（NS）：8次;驰豫延迟时间（D1）：15s。

1.2.3 图谱测定结果 采集图谱（见图2），对样品与苯二酚的选定峰的峰面积相对比值进行测定，对含量进行计算。

1.2.4 内标选择 苯二酚容易溶于水，故将其作为了内标，样品中苯二酚化学位移为6.6ppm，和样品的氢信号分离度比较好。

1.2.5 溶剂选择 样品和内标均比较溶于水，溶剂峰对测定结果不会造成干扰，因此，重水为溶剂。

1.2.6 定量峰选择 选择独立尖锐双重峰δ2.82的单氢信号、单峰δ2.63的-CH3氢信号，均与相邻峰的分离度比较好。

1.2.7 仪器参数选择 驰豫延迟时间（d1）对积分值的影响比较大，因此建议选择规定D1值为1-5倍的纵向弛豫时间（T1）。翻转恢复试验对质子共振谱线T1值进行测定，最大纵向弛豫时间：2.5s。为了确保每次采样间地共振信号强度相同，本次选择的D1值：15s。最终显示，该选择可以有效满足测量精度的要求。扫描8次可以达到信噪比要求。

1.2.8 重复性试验 将样品图谱重复积分5次，对单氢信号峰（δ2.82ppm）与内标对苯二酚的定量峰面积比值进行计算，RSD：0.25%。

1.2.9 定量结果分析 通过两组氢信号定量结果分析基本相同，且与上批对照品作为外标使用HPLC法对结果进行测定，与92.27%的结果的基本相同。且与核磁中溶剂峰相对比，可以在本品氢谱上看

到一组比较明显的乙醇氢信号（δ3.47;q;-CH2-;δ1.02;t;-CH3）（具体见图2），提示本品中含有挥发性杂质乙醇。同时使用GC法对本品的残留溶劑进行检查，供试品溶液色谱图中有较大未知峰，将乙醇作为对照品，并通过DB-624、聚乙二醇为填料对其进行测定，确定峰值为乙醇，含量为4.03%，与核磁定量法检测的结果基本相同，因此，本品干燥失重与卡式炉水分的差值为3.78%。

1.3 观察指标 （1）解析氢溴酸东莨菪碱H谱[5]。

（2）分析含量、残留溶剂的核磁共振法定量测定结果[6]。

2 结果

2.1 氢溴酸东莨菪碱H谱解析 δ1.64对应的氢个数为1，峰型为d，J为17，归属为6（a）-H，δ1.85对应的氢个数为1，峰型为d，J为17，归属为7（a）-H，δ2.21对应的氢个数为1，峰型为m，J为17、4.5，归属为6（e）-H，δ2.28对应的氢个数为1，峰型为m，J为17、4.5，归属为7（a）-H，δ2.63对应的氢个数为3，峰型为s，归属为10-CH3，δ2.82对应的氢个数为1，峰型为d，J为3.5，歸属为3-H，δ3.59对应的氢个数为2，峰型为m，归属为2-H、4-H，δ3.79对应的氢个数为3，峰型为m，归属为22-H、1-H、21（b）-H，δ4.02对应的氢个数为1，峰型为m，归属为21（a）-H，δ4.87对应的氢个数为1，峰型为t，J为5，归属为8-H，δ6.63对应的氢个数为4，峰型为s，归属为IS-H（4），δ7.20对应的氢个数为2，峰型为m，归属为16-H、20-H，δ7.26对应的氢个数为3，峰型为m，归属为17-H、18-H、19-H，见表1。

2.2 含量、残留溶剂的核磁共振法定量测定结果分析 以δ2.63峰计算样本含量结果中，样1为91.4，样2为91.6，平均值为91.5;以δ2.82峰计算样本含量结果中，样1为91.2，样2为91.8，平均值为91.5;以δ3.47峰计算乙醇含量结果中，样1为3.8，样2为3.8，平均值为3.8;以δ1.02峰计算乙醇含量结果中，样1为3.8，样2为3.8，平均值为3.8，见表2。

3 讨论

在标准物质标化的期间，对化合物地绝对含量、杂质组成进行确定非常关键。当前，核磁共振法测定定量限（LOQ）、检测限（LOD）的准确度显著提高，在一定程度上可以代替色谱法[7]。且核磁定量法测定氢溴酸东莨菪碱的绝对含量是一个切实可行的办法，可以对未知成分进行确定[8]。

综上所述，氢溴酸东莨菪碱的绝对含量检测中，核磁共振法定量测定方法更加准确快速，同时可以对其中的未知杂质进行定量、定性分析，是对标准物质绝对含量进行测定的良好方法，值得使用。

参考文献

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[2] 张垚.基于低场核磁共振技术的玉米单子粒含水率测定方法研究[J].玉米科学，2018，26（3）：89-94.

[3] 高飞，闫镔，曾磊，等.非增强核磁共振图像中肝脏肿瘤病理分级的定量分析方法[J].生物医学工程学杂志，2019，55（4）：581-589.

[4] Zhao J， Khan I A， Combrinck S ， et al. 1H-NMR and UPLC-MS metabolomics： Functional tools for exploring chemotypic variation in Sceletium tortuosum from two provinces in South Africa[J]. Phytochemistry， 2018， 152（Suppl 2）：191-203.

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