高效液相色谱法测定肾舒康胶囊淫羊藿苷含量

徐殿鹏

摘 要：本文采用高效液相法对肾舒康胶囊中的淫羊藿苷的进行了含量测定。采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（25∶10：65）为流动相，检测波长为270nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。淫羊藿苷在50～300μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。淫羊藿苷平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确，可用于肾舒康胶囊中淫羊藿苷的含量测定。

关键词：肾舒康胶囊；含量；测定

肾舒康胶囊由淫羊藿、地黄、川牛膝、王不留行等组成，主要用于肾脾两虚。淫羊藿别名刚前（《本经》）、仙灵脾（《雷公炮炙论》）、仙灵毗（《柳柳州集》）干鸡筋、（《日华子本草》）、三枝九叶草（《本草图经》）、铁打杵（《贵州民间方药集》）、铁菱角（《湖南药物志》）等。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效。淫羊藿用于阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛、更年期高血压等。《日华子本草》记载：“治一切冷风劳气，补腰膝，强心力，丈夫绝阳不起，女子绝阴无子，筋骨挛急，四肢不任，老人昏耄，中年健忘。”淫羊藿含有蜡醇（Ceryl alcohol）、卅一烷（Hentriacontane）、植物甾醇（Phytosterol）、棕榈酸（Palmitic acid）、亚油酸（Linoleic acid）、亚麻酸（Linolenic acid）、银杏醇（Bilobanol）、木兰碱（Magnoflorin）、β-去水淫羊藿素（β-anhy-Droicaritin）、维生素 E、淫羊藿次甙（Icariside）、去氧甲基淫羊藿甙（des-O-Methylicariin）、淫羊藿糖甙A等。淫羊藿在对骨系统、免疫调节和延缓衰老、生殖系统、心血管系统等方面有广泛的生理活性[1-5]。本文采用高效液相法对肾舒康胶囊中的淫羊藿苷的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：LC2000液相色谱（天美（中国）科学仪器有限公司）；FA124电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司） ；PURELAB flex纯水机（威立雅水处理技术（上海）有限公司）；KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；全自动逆流酸清洗Autoclean 100（长春星锐智能化科技有限公司）。

1.2 色谱柱：奥泰公司 C18 色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：淫羊藿苷

1.4 试剂：甲醇（广州市江顺化工科技有限公司）、三乙胺（广州市江顺化工科技有限公司）、磷酸（广州市卡朋斯化工科技有限公司）、乙腈（广州市江顺化工科技有限公司）、磷酸二氢钾（格里斯（天津）医药化学技术有限公司）、冰醋酸（格里斯（天津）医药化学技术有限公司）。

1.5 试药：肾舒康胶囊

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈-甲醇-水（25∶10：65）为流动相，检测波长：270nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取供试品内容物，研细，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。

2.4 专属性试验

依照处方取除淫羊藿，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在淫羊藿苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取淫羊藿苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察

精密称取适量淫羊藿苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含50、100、150、200、250、300微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，淫羊藿苷在50～300μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验

称取同一批的肾舒康胶囊样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.73%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验

取对照品适量， 按处方比例及工艺规程制备模拟粒各20粒，含量分别相当于标示量的80%、100%、120%。取模拟片照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.71%。

2.9 样品稳定性试验

取同一批肾舒康胶囊样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4、5、6小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定肾舒康胶囊中淫羊藿苷的RSD=0.53%。结果表明供试品6小时内稳定。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定肾舒康胶囊三批样品中淫羊藿苷的含量，结果三批样品的含量分别为1.81毫克/粒、1.86毫克/粒、1.83毫克/粒。

3 讨论

分别考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钾-冰醋酸（20∶5：75：0.1），水-甲醇-乙腈（50：20：30），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钾-冰醋酸（20∶10：69：1），乙腈-甲醇-水（25∶10：65）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（25∶10：65）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（25∶10：65）为流动相为流动相。

参考文献

[1]包宇，杨建雄，孙润广.淫羊藿苷可缓解肾阳虚小鼠睾酮及性腺雄激素受体基因的表达下调（英文）[J].中国生物化学与分子生物学报，2011（02）.

[2]吴瑕，杨薇，张磊，王岚，李东晓，邓文龙.下丘脑-垂体-性腺轴阻断对淫羊藿促性激素作用的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011（05）.

[3]蔡辉，赵凌杰，袁爱红，董晓蕾，赵智明.淫羊藿总黄酮对高脂血症大鼠SOD活性的影响[J].广东医学，2011（04）.

[4]韩爱萍，张洁，丁选胜.淫羊藿总黄酮对糖尿病小鼠血管功能的影响[J].南京中医药大学学报，2011（03）.

[5]杜道兵，卢万根，曹丛仁，洪乐鹏，叶秉坤，许孟杰，郝彦利，冷水龙.淫羊藿苷促进宫颈癌TC-1细胞凋亡作用的研究[J].现代生物医学进展，2011（04）.