菟丝子及其混伪品的鉴别研究概况

李君玲

(宜春学院，江西 宜春 336000)

菟丝子[1]为旋花科植物南方菟丝子Cuscuta australis R.Br.或菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子。味辛、甘，性平，归肝、肾、脾经，具有补益肝肾，固精缩尿，安胎，明目，止泻的功效，外用消风祛斑。临床常用于治疗肝肾不足，腰膝酸软，阳痿遗精，遗尿尿频，肾虚胎漏，胎动不安，目昏耳鸣，脾肾虚泻。2010年以前的历版药典中关于菟丝子的原植物来源均为菟丝 子Cuscuta chinensis Lam.， 而从2010年版开始关于菟丝子的原植物来源则增加了南方菟丝子 Cuscuta australis R.Br.。菟丝子是一味常用的中药，目前市场出现了很多的混伪品，相关学者对菟丝子及其混伪品的鉴别也做了大量的研究工作。为了中药菟丝子的正确鉴别和临床应用的安全、有效，笔者对十几年来关于菟丝子的混伪品及其常用的鉴别方法进行了梳理，概述如下。

1 混伪品

目前，市场上关于菟丝子商品的混伪现象主要表现在以下几个方面：第一、同科属植物种子混充菟丝子使用。如同为旋花科菟丝子属的金灯藤(大菟丝子、日本菟丝子) Cuscuta japonica Choisy、欧洲菟丝子Cuscuta europaea L.、啤酒花菟丝子Cuscuta lupuliformis Krocker、单柱菟丝子Cuscuta monogyna Vahl、杯花菟丝子Cuscuta cupulata Engelm.、原野菟丝子Cuscuta campestris Yunck.等的种子摻入到菟丝子商品中。第二、不同科属植物的种子或果实伪充菟丝子使用(见表1)。第三、摻杂现象。常见杂质主要有泥沙。第四、人工伪造品。常见的有用石灰、淀粉、水泥、泥沙等加工成菟丝子形状的伪造品。

表1 菟丝子混伪品(不同科属)

2 鉴别方法

2.1 性状鉴别法[1-14,16]

通过用肉眼或放大镜观察菟丝子及其混伪品的大小、形状、表面、气味、水试等方面的特征，进而达到区分、鉴别的目的。现总结归纳菟丝子及其混伪品的主要性状鉴别特征如下。(见表2)

表2 菟丝子及其混伪品的性状鉴别特征

芥子白芥子:表面具细微的网纹,有明显的点状种脐;味辛辣。黄芥子:表面光滑,放大镜下可见细微网纹,一端具一圆形淡褐色种脐;研碎后加水浸湿,则产生辛烈的特异臭气。二者水煮后,表面无黏性,无“吐丝”现象。天仙子扁肾形或扁卵形;表面具细密的网纹,略尖的一端有点状种脐;味微辛。沙苑子肾形而稍扁;表面光滑,边缘一侧微凹处具圆形种脐;嚼之有豆腥味。青葙子扁圆形,少数呈圆肾形;表面黑色或红黑色,光亮,中间微隆起,侧边微凹处有种脐。韭菜子半圆形或半卵圆形,略扁,长2～4mm,宽1.5～3mm;表面黑色,一面突起,粗糙,有细密的网状皱纹,另一面微凹,皱纹不甚明显;有点状突起的种脐;气特异,味微辛。冬葵子肾形;棕黄色或黑褐色。车前子椭圆形、不规则长圆形或三角状长圆形,略扁;表面具细皱纹,一面有灰白色凹点状种脐;质硬;表面有黏性,但无“吐丝”现象。秫米(粟)水煮后,无“吐丝”现象。芜青子表面细密网状纹饰,一侧可见两条微凹陷的浅沟,一端有点状突起的种脐;质脆,易以指甲压碎;水煮后,种子膨胀,但表面无黏性,无“吐丝”现象。水蓑衣子心脏形,扁平;表面平滑,无网文,具毛,脐点微凹;舌舔粘舌。芸苔子放大镜下观察网状纹理,一端有黑色而近圆形的种脐石荠苎子表面具细密网纹,间隙浅凹;质轻脆,易压碎;水煮后,表面无黏性,无“吐丝”现象。大头菜子大头菜子表面一端有类白色线形肿脐;易以指甲压碎;味微苦;开水浸泡无粘性。千穗谷子卵圆形或近圆形,侧扁,双凸透镜状,形如飞碟;表面近平滑,具明显的边缘,种脐位于一端,微小;水煮可见白色扁平的胚根,似吐丝。人工伪造品石灰制丸表面光滑,无种皮、种脐、胚;质较重,易用指甲压碎;水煮后无变化,沉于水底不溶散,无“吐丝”现象,水被染色。淀粉制丸表面光滑,无种皮、种脐、胚;质较轻,易用指甲压碎;水煮后沉于水底不溶散,手捏黏性,无“吐丝”现象。水泥制丸表面光滑;质硬沉重压手,指甲压不碎;水煮后沉于水底不溶散,无“吐丝”现象,水被染色。泥沙制丸表面无种皮、种脐、胚;易用指甲压碎;水煮后沉于水底溶散成沙土,无“吐丝”现象。

2.2 微性状鉴别法[15-18,25]

微性状鉴别法是一种采用体视显微镜、生物显微镜和袖珍显微镜等与计算机软件结合,观察、拍摄药材表面的细微特征信息,以达到鉴别中药材的目的。该方法具有检测仪器携带方便、操作简单、检验快速、费用少，适合基层中药鉴定与检验运用等特点。目前关于菟丝子及其混伪品的微性状鉴别研究，主要采用体视显微镜和扫描电镜来获得菟丝子及其混伪品的细微特征。现总结归纳菟丝子及其混伪品的主要微性状鉴别特征如下。(见表3)

表3 菟丝子及其混伪品的微性状鉴别特征

2.3 显微鉴别法[1,9,14,19,22,24-25]

显微鉴别法是指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片中组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。目前关于菟丝子及其混伪品的显微鉴别研究，主要从组织特征和粉末特征两个方面进行研究。以下是关于菟丝子及其混伪品的主要显微鉴别特征的归纳和总结。(见表4)

表4 菟丝子及其混伪品的显微鉴别特征

3 理化鉴别法

3.1 一般理化鉴别法

张正康[12]采用盐酸镁粉反应鉴别菟丝子及大头菜子，结果表明：菟丝子溶液显桃红色 ,大头菜子不显色；采用薄层色谱法鉴别后，结果表明，在紫外光灯 ( 365 nm)下,菟丝子显 4个斑 点 ,大头菜子显 3个斑点，二者存在明显区别。顾琳娜[26]等人采用盐酸镁粉反应鉴别菟丝子及其混伪品芜青子，结果表明：菟丝子溶液显桃红色，而芜菁子溶液不显颜色。陈 曦[27]等人利用菟丝子中主含黄酮类成分，通过盐酸镁粉反应，薄层色谱检识黄酮苷、黄酮苷元，很好的区别了菟丝子及其混伪品芥子；利用芥子中主含生物碱类成分，通过生物碱沉淀试剂，薄层色谱检识生物碱，也实现了区别菟丝子及其混伪品芥子的目的，此外通过薄层色谱法对二者氨基酸类成分、挥发油类成分进行检识，结果二者亦存在明显差异。刘文泉[28]等人采用碘试液鉴别菟丝子正品、伪品和摻伪正品，结果表面，菟丝子表面颜色不改变, 而伪品瞬间全部变成黑紫色, 其中掺入的正品立刻显现。金蕾[23]采用盐酸镁粉反应鉴别菟丝子及芜青子，结果表明：菟丝子溶液显淡红色；芫青子溶液显淡黄色。从上述实验结果看，利用菟丝子含黄酮类成分的特点，可较好的将菟丝子与其大多数的不同科属的混伪品进行区别。

3.2 色谱法

3.2.1 薄层色谱法

卢立琼[9]等采用薄层色谱法，菟丝子苷、紫云英甙、金丝桃苷、槲皮素为对照，鉴别菟丝子、欧洲菟丝子、芸苔子，结果表明：在紫 外 光 灯 (365 nm)下，菟丝子和欧洲菟丝子在四个对照品相同位置均显现斑点，而芸苔子只在槲皮素和金丝桃苷相同位置处呈现斑点。佘玫惠[13]采用薄层色谱法对正品菟丝子与南方菟丝子、欧菟丝子、日 本菟丝子进行鉴别研究，结果表明,四者在薄层色谱方面存在着明显不同的斑点 。王建伟[14]等人采用薄层色谱法对菟丝子和4个伪品进行鉴别，结果表明：在紫外光灯(254nm)下，正品菟丝子呈现2个蓝色荧光斑点，4个伪品样品均无斑点。刘文泉[28]等人采用薄层色谱法鉴别上述三种药材，结果表明：在紫外灯 ( 365nm )下, 正品菟丝子在 Rf值 0.78处有亮蓝紫色 荧光。掺 50% 正品菟丝子的伪品在 Rf值 0.69处有黄色荧 光、Rf值 0.78处有亮蓝紫色荧光。伪品在 Rf值 0.69处有 黄色荧光。傅厚道[29]采用薄层色谱法，以菟丝子对照药材和金丝桃苷对照品味对照，对菟丝子和芜青子进行鉴别，结果表明：在与菟丝子和金丝桃苷相对应的斑点位置处，供试品芜菁子无斑点显示。郭澄[30]等人以山奈酚和槲皮素为对照品，采用薄层色谱法对菟丝子、南方菟丝子及同科属混伪品——金灯藤、原野菟丝子、欧洲菟丝子、杯花菟丝子、单柱菟丝子进行鉴别。结果表明：上述七种均含有山奈酚和槲皮素两种成分，而且南方菟丝子中山奈酚的含量较高；菟丝子、南方菟丝子、原野菟丝子、金灯藤、单柱菟丝子在Rf 0.5-0.7之间无斑点；金灯藤、单柱菟丝子在Rf0.5区域内有较多斑点；杯花菟丝子、欧洲菟丝子在Rf 0.5-0.7之间各有四个斑点。因此黄酮类成分不但可以用于菟丝子为不同科属伪品的鉴别，还可以用于同科属易混品的鉴别。

3.2.2 高效液相色谱指纹图谱法

傅厚道[29]以金丝桃苷为对照品，采用 高效液相色谱法测定，结果表明，芜菁子在金丝桃苷特征峰处无对应峰，而菟丝子有。冯华[34]等人在大菟丝子药材的HPLC指纹图谱中标定12个共有峰，不同产地的大菟丝子相似度均大于0.97，而与菟丝子(南方菟丝子 Cuscuta australis R． Br．)药材的相似度在0.60 以下。因此HPLC指纹图谱的建立可作为大菟丝子药材与菟丝子药材有效识别方法，且高效液相色谱指纹图谱法用于菟丝子及其混伪品的鉴别方面具有简便、快捷、可靠的优点。

3.3 光谱法

3.3.1 紫外光谱

薛漓[19]在400-230 nm范围内测定菟丝子和芸苔子(氯仿溶液)的紫外吸收光谱，结果表明：菟丝子在281.0±6 nm处有吸收峰，而芸苔子在此处无吸收峰，紫外吸收光谱法可有效的对二者进行的鉴别。赵树鹏[21]在200-400nm波长范围内测定菟丝子和欧洲菟丝子的紫外吸收光谱，结果表明：菟丝子在255 nm、270 nm、290 nm处有吸收峰，而欧洲菟丝子在286 nm、312 nm、326nm处有吸收峰，二者的吸收峰位置存在明显的不同，因此紫外吸收光谱法可对二者进行准确的鉴别。郭 澄[30]等人用 紫 外 光 谱在 200-400 nm 间 扫 描 , 得 4 种 溶 剂条 件 下 不 同菟丝子的最大波长。 结果表明：pet溶剂下测定，菟丝子和南方菟丝子在：336 nm和315 nm有峰，而欧洲菟丝子和金灯藤(大菟丝子)则无此峰；在氯仿溶剂下测定，菟丝子在268 nm处有峰，而南方菟丝子无此峰。侯 惠 蝉[31]等人以采用紫外光谱法鉴别菟丝子和芜青子，结果表明，菟丝子在293 nm处有最大吸收波长，而混伪品芜青子则在332 nm处存在最大吸收波长。赵惠萍[32]等人在200-400 nm范围内测定菟丝子和芸苔子(乙醇溶液)的紫外吸收光谱，结果表明：菟丝子在207 nm、268 nm、295 nm处有吸收峰，而芸苔子在210 nm,333 nm处有吸收峰，紫外吸收光谱法可有效的对二者进行的鉴别。

3.3.2 红外光谱法

孙荣梅[33]等人对菟丝子和金灯藤采用近红外光谱结合移动窗口偏最小二乘法波段选择进行主成分分析，结果表明二者基本可以区分，分类正确率达93%。近红外光谱用于菟丝子同属混淆品的鉴别具有简便快捷、直观、省时、环保等特点。洪庆红[34]等人采用水平衰减全反射傅里叶变换红外光谱法测定了菟丝子及其伪品——金灯藤、紫苏子、芥子的 FTIR，并对FTIR数据进行了聚类分析。结果表明菟丝子与三种混伪品相差显著。该法用于菟丝子及其混伪品的鉴别具有简便、有效的特点。

3.4 电泳法

3.4.1 凝胶电泳法

郭澄[35]等人用凝胶电泳对菟丝子及其混伪品进行鉴别。他们将菟丝子的电泳谱分为两个区域, A区谱带的Rf<0.5,B区谱带的Rf>0.5。 又根据染色深浅将电泳谱带分成4级, 色深者为1级带, 色浅者为2级、3级, 谱带扩散者为4级 。结果表明：南方菟丝子只是在A区比菟丝子多了l条3级带，二者在B区均有2条4级带, 其余的谱带均相同；而欧洲菟丝子则在B区有3条4级带； 大菟丝子则无B区谱带。而菟丝子的混伪品紫苏子在A区有2条1级带,B区有1条1级带；白芥子在A、B区各有1条1级带。正品菟丝子与同科属易混品、伪品的图谱存在明显区别，凝胶电泳法可作为菟丝子及其混伪品的可靠鉴别方法。 林慧彬[36]采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS PAGE)技术对菟丝子及其混伪品——天仙子、紫苏子、韭菜子、白芥子、沙苑子进行蛋白质分析。结果表明，伪品的蛋白质条带与菟丝子差别十分明显，该法可以有效的区别菟丝子及其混伪品。韩丽丽[37]等人采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)技术对菟丝子及其混伪品——韭菜子、沙苑子进行蛋白质分析。结果表明，菟丝子与伪品之间存在明显差别，该法可以用于菟丝子及其混伪品的鉴定。

3.4.2 高效毛细管电泳法

高效毛细管电泳法(HPCE) 是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离分析的液相分离方法。与传统的凝胶电泳法相比, 它具有高效 、快速、低耗、样品预处理简单 、操作简便等优点。胡平[38]等人采用高效毛细管电泳法，对同科属植物菟丝子、南方菟丝子和金灯藤种子的碱溶性和酸溶性蛋白进行提取和检测。结果表明：三者在蛋白成分和含量上存在显著差异，HPCE法可有效的用于菟丝子同科属易混品的鉴别。

4DNA分子标记法

4.1 快速PCR法

蒋超[39]等人采用快速PCR法对菟丝子及其混伪品样品的ITS片段进行扩增、并在扩增产物中加入SYBR Green染料，最后在365 nm 紫外波长下进行荧光检测。结果表明：在各样品PCR产物不稀释情况下，菟丝子显示出明亮的绿色荧光，而紫苏子、青葙子、沙苑子、油菜子、急性子均不发出荧光，因此可将菟丝子与上述5个混伪品区别开来；在PCR产物稀释8倍情况下，菟丝子仍显荧光，而白芥子、莱菔子、冬葵子已不显示荧光，因此可将菟丝子与上述3个混伪品区别开来。快速PCR法具有无需测序或凝胶电泳，可直接、快速地获得药材真伪鉴别结果，方法简单、快速的特点。它的缺点就是引物二聚体也可被荧光染料，导致鉴别结果的误判。但可通过对稀释后的PCR产物进行荧光染色可避免假阳性问题的出现。

目前关于菟丝子的鉴别方法主要以性状、微性状、显微及一般理化鉴别为主，这些方法具有简单、快速、鉴别成本低等优点，但需要具有相关药材鉴别经验，比较适合基层药材鉴别的应用。而色谱法、光谱法、DNA分子标记等方法则具有操作方便、结果准确度高、不需相关药材鉴别经验的优点，但鉴别成本偏高、对仪器设备的依赖性更高，比较适合鉴定机构、科研院所等部门或单位应用。

5 小结与讨论

市售菟丝子药材混伪现象可能的原因主要是：一、药源少，有意摻杂制假；二、菟丝子属于多来源中药，同科属伪充较难避免；三、药材形状小、不易辨识，不同科属及杂质摻入难发现。针对上述现象，笔者认为可以采取以下措施更好的保证菟丝子药材的质量：一、同科属植物作为菟丝子来源的可行性研究；二、菟丝子同科属种子和常见混伪品的快速、简便鉴别方法研究；三、加强药材流通领域的监督与管理；四、开展菟丝子药材的规模化和规范化种植，从源头上保证菟丝子药材的质量，为临床提供安全、有效的菟丝子药材。