卵巢浆液性癌组织中同源异型蛋白-6和白细胞分化抗原147表达及与细胞增殖相关性研究*

王 莉,蔡 旺

锦州医科大学附属第一医院(锦州121001)

卵巢浆液性癌临床常见，病变分为低级别和高级别，其形成的分子遗传学通路可能不完全相同，但是其病变的形成均与肿瘤高增殖状态相关[1]。Ki67是临床标记增殖的经典蛋白，其高表达代表肿瘤具有较高的增殖活性及细胞生长特征，高增殖性的肿瘤生长迅速。同源异型蛋白-6(Sine oculis homeobox homolog-6,SIX6)是一种转录调节蛋白，其在肿瘤中表达升高，能调控肿瘤细胞的增殖和迁移[2]。白细胞分化抗原147(Cluster of differentiation147,CD147)是超免疫家族成员，近年研究认为CD147与SIX家族的相关成员具有可能结合的位点，两者可能有协同作用[3]。本文探讨卵巢浆液性癌组织中SIX6和CD147的表达及与细胞增殖的相关性。

资料和方法

1 一般资料 收集2016年1月至2017年5月在确诊为卵巢浆液性癌手术治疗的患者85例作为研究组。病例纳入标准：①由病理医师确诊，符合WHO卵巢浆液性癌的诊断标准；②临床资料齐全。排除标准：①有严重内科疾病；②双原发癌或多原发癌；③有放、化疗史。患者年龄35～87岁，中位年龄57.7岁。肿瘤最大径2～16 cm，低级别浆液性癌29例，高级别浆液性癌56例；有淋巴结转移20例，无淋巴结转移65例；单侧发生23例，双侧发生62例。收集同期85例卵巢浆液性囊腺瘤患者作为对照组，年龄35～85岁，中位年龄61.3岁。肿瘤最大径3～11 cm。均留取术后石蜡包埋组织。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准，患者或家属签定知情同意书。

2 研究方法

2.1 SIX6、CD147和Ki67表达的检测：术后标本常规取材，应用中性福尔马林固定后脱水、石蜡包埋。切取4 μm切片。试剂均购自武汉博士德生物技术公司。SIX6、CD147均为浓缩液，先行预实验，选择最佳显色的浓度用于正式实验(SIX6为1∶250，CD147为1∶300)。Ki67为工作液。应用免疫组化SP法进行检测，严格按说明书操作，DAB显色，做好质控工作。

2.2 SIX6、CD147和Ki67的结果判定：SIX6和CD147阳性部位是细胞膜和细胞质。共选择3个400倍视野进行观察。以二维评分作为计量结果。着色强度：无着色为0分；弱为1分，中为2分，强为3分。阳性判定：以<5%为0分，5%～10%为1分，以11%～30%为2分，以31%～50%为3分，以>50%为4分。两者相乘为最终评分，分值范围0～12分，以≤3分为阴性，以>3分为阳性，计算阳性率。Ki67阳性部位是细胞核，共选择3个400倍视野，计算阳性率。

3 统计学方法 应用SPSS 13.0统计学软件分析，计数资料以[例(%)]表示，组间比较行卡方检验,应用Spearman相关分析及生存分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 两组中SIX6、CD147表达阳性率比较 见表1、图1。研究组中SIX6、CD147阳性率明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

A：SIX6在浆液性癌中阳性表达；B：CD147在浆液性癌中阳性表达

表1 两组中SIX6和CD147表达阳性率比较[例(%)]

2 研究组不同临床病特征分组中SIX6和CD147阳性率比较 见表2。研究组中SIX6和CD147在不同肿瘤的最大径、病变级别分组的表达中比较差异有统计学意义(P<0.05)。SIX6在有无淋巴结转移的表达中比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 研究组不同临床病特征分组中SIX6和CD147阳性率比较

3 研究组中SIX6和CD147表达的相关性 Spearman相关分析显示研究组中SIX6和CD147的表达具有正相关性(r=0.65，P=0.0154)。

4 研究组SIX6、CD147与Ki67表达的相关性 Spearman相关分析显示研究组中SIX6和Ki67(r=0.61，P=0.0112)、SIX6和Ki67(r=0.59，P=0.0121)均具有正相关性。

5 研究组SIX6、CD147的表达与生存时间的相关性 本组患者均进行术后3年(36个月)的随访。其中3例失访。1例因意外(车祸)死亡，列为删失值。术后生存时间为5～36个月。生存分析显示研究组中SIX6(χ2=4.35，P=0.021)和CD147(χ2=4.99，P=0.013)的表达与生存时间相关，即研究组SIX6和Ki67高表达患者的生存时间短，预后差。

讨 论

卵巢浆性液性肿瘤目前认为来源于输卵管上皮或卵巢表面上皮，其病变级别与来源有关。上皮细胞的异型增生是肿瘤形成的重要前提，高级别肿瘤的恶性程度高[4]。有研究显示高级别浆液性癌病变发现时常表现为腹腔中弥漫的转移灶，病变具有较强的侵袭性及弥漫性生长的特点[1]。浆液性癌是高级别的肿瘤，DNA复制的起始和抑癌基因的失活是增殖的重要环节，此时增殖相关基因启动细胞的增殖，引起细胞活性增强[5]。

Ki67是标记增殖较特异的蛋白，也是临床标记增殖指数的常用抗体，其具有稳定、客观，能准确反应肿瘤细胞的增殖状态。SIX6是转录因子的一种，与多种组织器官的发育有关[6-7]。SIX6在细胞恶变后表达明显升高，与癌基因的作用相似。研究显示SIX6可以促进增殖细胞因子的表达，如CyclinAl、CyclinDl等[8-9]。SIX6可能对调节细胞的黏附有一定作用，主要是对E-cadherin和EP-CAM的调控作用[10]。CD147在肿瘤形成过程中可以调节肿瘤细胞的黏附和肿瘤细胞的迁移。CD147由 269个氨基酸组成，其N端有高度的糖基化结构区，而糖基化的异常能使不同蛋白质发挥不同的功能。糖基化方式与激活E-cadherin介导的黏附作用有关[11-12]。研究认为SIX6与CD147具有可能的结合位点[13]。表皮生长因子受体(EGFR)、缺氧诱导因子等能引起CD147活化，使癌细胞的侵袭和增殖能力增强[14]。

本研究结果显示卵巢浆液性癌组织中SIX6和CD147的阳性率明显增高，提示两者具有癌基因样的作用。研究组中SIX6和CD147的表达与肿瘤的最大径、病变级别有关，提示两者高表达参与肿瘤的进展，即SIX6和CD147高表达后对局部组织和周围邻近器官形成明显的破坏作用，对卵巢周围组织的侵袭有重要的促进作用。SIX6与淋巴结转移有关，提示SIX6的高表达预示着肿瘤具有较高转移风险。SIX6和CD147具有正相关性，提示两者具有协同正向作用，也间接证实了两者具有可能的结合位点，但是两者是否具有靶向关系尚需要应用双荧光素酶报告基因实验来证实。SIX6和CD147均对肿瘤细胞的增殖有促进作用。SIX6在肿瘤中的作用可能较为复杂，SIX6既具有直接调控细胞增殖的作用，又具有通过调节CD147参与细胞活性和改变细胞间连接的作用，促进肿瘤细胞的增生和转移。CD147高表达可以降低E-cadherin的表达，引起细胞的黏附性减弱，细胞连接松散，肿瘤细胞易于离开原发灶，在原发灶外的器官定植，形成转移瘤[15]。SIX6可能是CD147的上游因子，引起细胞增殖和转移，促进肿瘤细胞的进展。CD147与转移的作用在文献中有报道[16-17]，但是本实验未发现CD147与淋巴结转移及对在侧卵巢受累中的作用，这可能与CD147的表达有组织特异性有关[18-19]。本研究发现联合检测SIX6和CD147的表达与肿瘤的预后有关，提示SIX6和CD147可能是独立的预后指标，后续应加大样本量进行证实。

总之，SIX6和CD147在卵巢浆液性癌组织中高表达，参与肿瘤的形成和进展。SIX6和CD147对细胞的增殖有一定作用。SIX6和Ki67的表达与预后相关。