胃癌中Survivin、PTEN蛋白的表达及临床相关性分析

帕尔哈提·沙依木 艾克热木·玉苏甫 肉斯旦·图尔迪 赵泽亮 王海江

胃癌全世界发病率排第5位，死亡率排第3位，东亚地区胃癌发病率最高[1]。我国胃癌发病率、死亡率排第2和第3，占全部恶性肿瘤死亡的23.24%[2]。生存素(Survivin)作为凋亡抑制蛋白家族的成员，起抑制肿瘤细胞凋亡、促进增殖作用[3-4]。磷酸酶基因(PTEN)是迄今发现的第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因[5]近年来，越来越多的数据证明Survivin、PTEN在胃癌的发生发展过程中起着重要的作用。但两者在胃癌中的表达及临床相关性存在不同说法，样本量亦较少。因此，本研究在扩大样本量的基础上，应用免疫组织学技术检测Survivin、PTEN的表达阳性率，分析其与临床指标的相关性，为Survivine、PTEN在胃癌发生发展中作用提供更加可靠的参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集新疆医科大学附属肿瘤医院2009年1月至2012年12月经病理证实的有完整病历资料的胃癌患者石蜡组织标本300例，作为胃癌组，选择120例癌旁正常组织患者作为对照组。纳入标准：①经病理证实为原发性胃腺癌；②术前未经过任何治疗(放化疗等)；③有完整的临床病理及随访资料；④患者知情同意。排除标准：①患者拒绝参与本项研究；②术前接受过治疗，如中药、放疗、化疗等，③不能手术的远处转移患者及晚期患者。

1.2 研究方法

所有病理标本均经10%的甲醛固定，石蜡包埋存档。蜡块行4 μm厚连续切片5张，每例均行HE染色证实确诊，并行Survivin和PTEN蛋白免疫组织化学(SP法)染色观察，严格按说明书进行操作。用已知的阳性胃癌组织作为阳性对照。将PBS作为阴性对照。

1.3 结果判定

细胞质染成淡黄色至棕黄色为Survivin阳性细胞。Survivin阳性细胞率(阳性细胞占总细胞数的百分比)<5%为Survivin阴性表达，≥5%为阳性表达。PTEN阳性细胞胞质显示棕黄或棕褐色。400倍显微镜下随机抽取5个视野，计算阳性细胞百分比。阳性比P<10%者视为阴性，P≥10%者视为阳性；免疫组化结果由两名经验丰富的病理科医师采用盲法阅片的方式进行评分，出现结果不一致时，共同讨论决定。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 Survivin和PTEN蛋白在两组中的表达

免疫组化结果显示，胃癌组中的Survivin主要定位于细胞质及胞膜，少量定位于胞核，阳性率为72.0%(216/300)，而对照组中其阳性率为5.0%，两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN在胃癌组中主要定位于细胞核及细胞质，阳性表达率仅为34.0%，而对照组中其阳性表达率为92.5%，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 Survivin和PTEN蛋白在两组中的表达(例，%)

2.2 胃癌组Survivin和PTEN蛋白表达与临床病理因素的关系

从表2可知，Survivin表达程度与胃癌的大体类型、组织学类型、分化程度、浸润深度、远处转移及病理分期等有关。相关性分析显示，溃疡型、粘液腺癌或印戒细胞癌、分化程度越差，浸润深度越深、有远处转移患者中Survivin阳性表达率随之增高。PTEN蛋白表达程度与胃癌肿瘤大小、组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及病理分期有关。相关性分析显示，肿瘤越大、粘液腺或印戒细胞癌、分化程度越差，浸润深度越深、淋巴结转移数越多，PTEN阳性表达随之降低。Survivin和PTEN表达间存在负相关(P=0.000，γ=-0.524)，即随着Survivin阳性表达率的升高，PTEN阳性表达率下降(表3)。

2.3 Survivin和PTEN蛋白表达阳性与阴性患者生存率比较

生存分析显示，Survivin和PTEN蛋白表达阳性与阴性患者生存率差异有统计学意义(χ2=98.3，P=0.000和χ2=94.4，P=0.000)。当选择Survivin阳性同时PTEN阴性患者与其他患者生存率对比时，发现前者生存率更低(χ2=145，P=0.000)，见图1。

3 讨论

Survivin作为凋亡抑制蛋白家族的成员在多种实体肿瘤中高表达，抑制凋亡、促进增殖。本研究结果显示，Survivin胃癌组中表达阳性率为72.0%，而对照组中只有5.0%的阳性率，提示胃癌组织中的Survivin蛋白表达明显上调。梁堃等报道，Survivin在胃癌中表达率70.0%，而正常组织中不表达[6]。原位杂交、免疫组化、免疫印迹、RT-PCR等检查阳性率亦均不一，但结果相近[7-8]。本研究还发现，溃疡型、粘液腺癌或印戒细胞癌、分化程度越差，浸润深度越深、有远处转移、病期越晚患者中Survivin阳性表达率随之增加，与文献报道基本一致[9-10]。Survivin高表达与胃癌预后差有关。Lee等[11]的研究显示，下调Survivin基因的表达可以达到治疗胃癌的目的。以上均提示Survivin在胃癌发生发展中起重要作用，与胃癌侵袭、转移及不良预后有关。

表2 Survivin和PTEN蛋白表达与胃癌病理分期因素的关系(例，%)

表3 Survivin和PTEN蛋白在胃癌组织中表达的相关性/例

图1 Survivin和PTEN蛋白表达阳性与阴性患者生存率比较

PTEN基因作为第1个被发现的肿瘤抑制基因，在细胞的生长、凋亡、迁移等方面起着重要的调控作用，是一个强有力的抑癌基因，在肿瘤中频繁发生突变，其频率可以与P53相匹敌[12]。PTEN基因的失活可能在肿瘤的发生、发展、浸润及转移中起到重要的作用[13]。本研究中PTEN在胃癌和正常组织中表达率分别为34.0%和92.5%，可见胃癌中明显下调，与已有的研究基本一致[14-15]。本研究还发现，粘液腺或印戒细胞癌、分化程度越差，浸润深度越深、淋巴结转移数越多，PTEN阳性表达率随之降低。Zhu等报道，PTEN表达下调与胃癌分化程度及病理分期有密切的关系，提示PTEN丢失预示病期属于晚期、预后不良[16]。PTEN低表达与预后差有关，这结果与LI SUI等报道一致[17]，提示PTEN表达下调与肿瘤发生、进展和不良预后有关。

赵锦艳等报道[18]，在胃癌组织中PTEN与Survivin表达呈显著负相关。本研究相关分析亦显示，Survivin和PTEN之间存在负相关关系，即随着Survivin阳性表达的增强，PTEN阳性表达减弱，且Survivin阳性同时PTEN阴性患者预后较其他患者更差，提示Survivin的过度表达、PTEN活性的丧失可能会抑制胃癌细胞的凋亡能力，导致其无限制的生长及克隆，使其具有较高的恶性行为。

综上，胃癌发生中Survivin的上调可能影响PTEN表达下调而起促进肿瘤发生、发展和转移等。两之间可能存在直接或间接负调控关系，为此需要进一步实验研究证实。PTEN与Survivin在胃癌中表达特点及相关性可能为胃癌的治疗提供新的思路和靶点。