芜湖市3个规模化羊场山羊巴贝斯虫未定种的感染情况调查

柯桂林 谢景辉 孔浩然 徐前明

摘要 [目的]调查和分析羊巴贝斯虫未定种在安徽省芜湖市某地区的流行情况。[方法]2019年4月下旬在芜湖市某地区的3个山羊养殖场采集245份血液样品，应用血涂片镜检和PCR方法进行检测。[结果]镜检结果显示有2个养殖场受到感染，总体阳性率为0.82%;PCR检测结果显示3个养殖场均有感染，总体阳性率为2.04%。[结论]芜湖市山羊感染羊巴贝斯虫未定种的情况与全国总体平均情况较为接近。

关键词 山羊;羊巴贝斯虫未定种;流行病学调查;PCR;血涂片镜检

中图分类号：S858.27 文献标识码：A 文章编号：2095-3305（2020）03-037-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.03.017

巴贝斯虫是一类可寄生于人和动物红细胞内的传染性血液原虫，隶属于梨形虫目、巴贝斯科、巴贝斯属。巴贝斯虫病的潜伏期为10～15 d，感病动物主要表现为发热、血红蛋白尿、贫血和死亡，严重危害畜牧业发展[1]。我国羊巴贝斯虫病最早报道于20世纪80年代，首先发现于四川盆地和东北部分地区，此后又相继在华中、华东和西南等地区被发现[2-5]。从华中、东北和西部等地区分离到9株不同种的羊巴贝斯虫，通过分子分类学和生物学特性方法鉴定发现这些巴贝斯虫可以分为 2个种群，即莫氏巴贝斯虫种群（B. motasi）和巴贝斯虫未定种种群（Babesia sp.）[5-8]。据2016年杨强等[9]采用实时荧光定量PCR对我国10个省份羊巴贝斯虫病进行流行病学调查，结果显示羊巴贝斯虫未定种的总体阳性率为0.85%，其中与安徽省相邻的湖北省的阳性率为4.55%、浙江省的阳性率为0，可见羊巴贝斯虫未定种在我国部分地区仍有存在，且各地区间的阳性情况有所差异，而在安徽省尚未见该种巴贝斯虫的报道。

临床上可根据临患病动物是否表现发热、贫血、血尿、消瘦等症状，再结合发病季节、地点和是否在野外放牧等流行病学数据，对巴贝斯虫病做出初步诊断，而确诊则必须查到病原体。确诊该病常用的方法之一是血涂片染色镜检，巴贝斯虫感染红细胞后，血涂片经染色处理可在显微镜下观察到虫体。目前，分子检测技术已在疫病检测和诊断中的得到广泛应用，其中PCR方法具有较高敏感性和特异性，现已逐渐应用于疫病的鉴别诊断、病原种类鉴定以及流行病学调查[9]。但是到目前为止，安徽省芜湖市某地区尚未有山羊感染羊巴贝斯虫未定种的情况调查报告，基于此，笔者对从该地区的3个羊场采集的245份山羊抗凝血样品，应用血涂片染色镜检和PCR方法进行检测，以确认山羊感染羊巴贝斯虫未定种的情况，旨在为该地区进行羊巴贝斯虫未定种的预防控制提供部分流行病学数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 DNeasy Blood&Tissue Kit购自Qiagen公司;扩增试剂Fast Taq premix（with dye）购自TOLOBIO公司。

1.1.2 调查对象 该次研究收集的样品均于2019年4月采集于安徽省芜湖市某地区的3个山羊养殖场，共计1 215头山羊。

1.2 方法

采用吉姆萨染色法检查：对先样品进行集中处理（低速离心1 100×g），取上层红细胞进行血涂片镜检。吸取离心后的上层红细胞5 μl，置于干燥干净载玻片的1/4处，然后用推片轻触血滴，使约呈“一”字型铺开，充满推片宽度。然后使推片与载玻片之间形成约30°的夹角（视血液粘稠情况和操作习惯适当调节角度），在操作过程中保持一定的速度将血液向载玻片的另一段推动，使在载玻片上留下一层均匀的薄膜，以通过薄膜可看清纸上的字体为宜。完成推片，待血液薄膜风干固定在玻片上之后，进行DIFF QUIK染色。将风干的血涂片置于A染液中55 s以固定涂片，然后从A液中取出，稍微甩干残留在玻片上面的液体，然后放入B液中进行染色55 s，接着从B液中取出，稍微甩干后再放入C液中进行染色40～50 s。染色完成后将玻片晾干，最后在显微镜下进行观察。

2 结果与分析

2.1 血涂片检查结果

在制作的245个血涂片中，仅有2个分别来自甲、乙场的血涂片疑似感染羊巴贝斯虫未定种（图1），镜检检出率为0.82%（2/245）。

2.2 PCR检测结果

PCR结果显示该次调查的3个养殖场均有羊巴贝斯虫未定种感染情况的发生，245份样品中有5份感染，样品总体阳性率为2.04%（表1）。

3 讨论

羊感染巴贝斯虫病轻则会使生产和生长性能下降，饲养成本增高，重则会导致死亡，造成巨大经济损失。Guan等[9]运用ELIS方法对2005—2010年间收集的样品进行调查，发现总体阳性率为31.66%，其中安徽省的阳性率为40.26%，处于较高水平，但由于该方法调查的数据只能反映抗体阳性率，而不能反映巴贝斯虫的实时感染情况。在Guan等[10]的研究中还表明羊感染羊巴贝斯虫未定种后，其抗体在8个月以后仍可保持在高水平，而羊感染后体内的虫血症最多只能存在2个月[11]。因此，使用核酸检测方法检测目的基因组相比于ELISA检测抗体更能反映羊感染巴贝斯虫未定種的实时情况。Guan等[11]对于2004—2005年间采自甘肃的365份和新疆的145份样品，应用特异LAMP 检测方法进行羊巴贝斯虫未定种检测，结果阳性率为3.5%。杨强等[12]对2010—2014年间采自我国10个省份的365份样品应用实时荧光PCR方法进行检测，其结果显示羊巴贝斯虫未定种的感染率为0.85%。在该次调查的245份样品中，PCR结果显示3个养殖场均有感染情况，样品总体阳性率为2.04%，较Guan等[11]报道的阳性率（3.5%）低，但较杨强等[12]报道的阳性率（0.85%）高，表明该地区羊感染羊巴贝斯虫未定种的情况与其他地区的感染情况相近，且在过去的5—10年间，该病在羊群中的感染情况基本维持在同一水平。出现这种情况可能是因为这段时间中规模化养殖场发展较快，农户的饲养水平提高，羊接触硬蜱的机会下降，从而导致羊巴贝斯虫未定种未进一步传播，但与此同时巴贝斯虫可在蜱虫体内进行休眠从而长时间存在，加之蜱虫活动范围广，繁殖力强，很难被灭绝，所以该病尚未得到完全的控制和根绝。

参考文献

[1] 高永利，郑龙.我国巴贝斯虫病流行病学研究现状[J].西北国防医学杂志，2018，39（6）：365-369.

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[3] MCCOSKER P J.The global importance of babesiosis[M].New York：Academic Press，1981：1-24.

[4] 李寶福，刘文余，邱桐礼.山羊焦虫病的诊治[J].辽宁畜牧兽医，1996（2）：27.

[5] 陈德明.绵羊焦虫病调查报告[J].兽医科技杂志，1982（3）：33-34.

[6] 张银河，宋庆华.新安县两乡镇小尾寒羊梨形虫病的诊治[J].中国兽医寄生虫病，2004（1）：50.

[7] 李宝福，刘文余，邱桐礼.山羊焦虫病的诊治[J].辽宁畜牧兽医，1996（2）：27.

[8] YINH，LUW，LUOJX.Babesiosis in China[J].TropAnimHea 1th Prod，1997，29（4）：11-15.

[9] GUAN G Q，MA ML，LIU AH，et al.A recently identified ovine Babesia in China：Serology and seroepidemiology[J]. Parasitol Int，2012，61（4）：532-537.

[10] GUAN G Q，CHAUVIN A H，LUO J X，et al.Merozoite proteins from Bzbesia sp.BQ1（Lintan） as potential antigens for serodiagnosis by ELISA[J].Parasitology，2010，137（6）：927-938.

[11] GUAN G Q，ALAIN C，LUO J X，et al.The decelopment and evaluation of a loopmediated isothermal amplification（LAMP） method for detection of Babesia sp.infective to sheep and goats in China[J].Exp Parasitol，2008，120（1）：39-44.

[12] 杨强，刘爱红，刘军龙，等.我国十省份羊巴贝斯虫的分子流行病学调查[J].中国兽医科学，2016，46（5）：597-601.

责任编辑：黄艳飞