应用MALDI-TOF MS快速鉴定骨折术后人型支原体血流感染1例报道

段雪红，朱 超，范 宁，袁亚迎

1.陕西省咸阳市第一人民医院检验科，陕西咸阳 712000；2.陕西中医药大学附属医院骨科，陕西咸阳 712000；3.陕西省咸阳市第一人民医院重症医学科，陕西咸阳 712000

人型支原体(Mh)主要寄居于生殖道，21%～53%性成熟女性子宫颈或阴道内可分离出Mh，男性尿道携带率低[1]。主要通过性接触引起泌尿生殖道感染，本文介绍VITEK®MS 全自动快速微生物质谱检测系统(简称VITEK®MS质谱仪)应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术快速鉴定1例男性患者骨折术后Mh血流感染，现报道如下。

1 临床资料

患者，男，38岁，因车祸致全身多处损伤，2019年5月24日以“多发伤、右侧肱骨外科颈骨折、右侧肩胛骨骨折、右侧股骨粉碎性骨折、骨盆骨折、右侧肋骨骨折、失血性休克、肺挫裂伤”收住入院。患者病危，给予补液、输注血液制品、抗炎止痛、预防血栓等对症治疗， 6月3日行“右侧股骨外科颈骨折及右侧股骨骨折切开复位内固定术”，6月4日患者开始出现高热，最高体温达39.8 ℃，辅助检查：降钙素原(PCT)、白细胞、C-反应蛋白(CRP)炎症指标均升高，结果见表1。临床给予美罗培南、万古霉素抗感染治疗，效果不佳。6月4、6日血培养均检出Mh。调整抗菌药物改用头孢他啶+阿奇霉素抗感染治疗，6月14日后未出现发热，6月15日患者转入骨科治疗，并给予阿奇霉素0.5 g次/日，继续抗感染治疗10～14 d。于7月17日治愈出院。

2 细菌培养及鉴定

6月4、8日各送一套(需氧+厌氧)血培养，置BACT/ALERT 3D血培养仪(法国生物梅里埃公司)进行培养，两套血培养中需氧瓶分别于1.98 d和1.68 d报告阳性，厌氧瓶培养阴性。两次阳性血培养瓶直接涂片革兰染色均未查到细菌。转种哥伦比亚血琼脂平板(郑州安图公司)置35 ℃，5%CO2培养箱培养，48 h后未见明显菌落，涂片革兰染色未见细菌。菌落直接涂布至靶板，然后加VITEK®MS-CHCA配套基质液1 μL直至自然干燥，接着将标本准备工作站输入标本信息并发送至数据采集工作站经VITEK®MS质谱仪检测，鉴定结果为Mh，置信度为99.9%。继续培养至96 h后，可见灰白色，直径约0.1～0.2 mm湿润菌落，见图1。涂片后革兰染色仍未查到细菌，菌落再次经VITEK®MS质谱仪鉴定为Mh，置信度为99.9%。2次血培养阳性菌株经VITEK®MS质谱仪鉴定的Mh的7个主蛋白质量峰值和置信度见表2，2株Mh相对分子质量的质谱图见图2。

表1 患者2019年不同时间段实验室检查结果与体温变化

图1 Mh哥伦比亚血琼脂培养96 h菌落

表2 2株Mh的 7个主蛋白质量峰值和置信度

注：A表示菌株1;B表示菌株2。

3 讨 论

Mh为泌尿生殖系统常见的定植菌，在一定条件下可引起泌尿生殖道感染，如尿路感染、宫颈炎、盆腔炎等，一般情况是无法穿透泌尿生殖道黏膜下层[2]。有研究报道，从约10%产后发热妇女的血标本中可分离到Mh，认为Mh可引起一些流产后或正常分娩后的妇女发热，而且也有Mh引起妇科及产科患者血流感染的报道，其他血流感染报道少见[3-5]。在常规细菌培养中检出的人源性致病性支原体，多数病例是偶然发现的，并非因怀疑支原体感染而作的针对性检测发现的。有研究指出，Mh也可通过穿透黏膜侵入血流并播散到全身各组织和器官，引起泌尿生殖道外的感染，除妇科、产科术后菌血症外，神经外科术后Mh血流感染、手术切口感染或咽炎等也有发生[2,6-7]。此外，国外有病例报道Mh可引起心肺移植术后感染导移植失败或神经外科术后脑膜炎等严重后果[8-9]。

本例患者6月3日行骨科“右侧股骨外科颈骨折及右侧股骨骨折切开复位内固定术”后开始出现高热，最高体温达39.8 ℃，PCT、白细胞、CRP指标升高,两套血培养需氧瓶中均检出Mh，手术切口渗出液普通细菌培养2 d未生长。而常规的细菌培养很可能在Mh生长所需的时间(4 d甚至更长)到达之前就已经把培养基丢弃了[3]。欧内玉[10]分析22株非生殖道标本中分离的Mh，其中12株为手术切口,包括脑外伤头部切口5株，骨折切口3株，妇产科手术切口4株。文献[6]报道的3株Mh致手术切口感染，其中2株分离自骨折术后创口分泌物。所以，本例患者不排除Mh经手术切口侵入血流。

本例患者初始给予美罗培南、万古霉素抗感染治疗后效果不佳，持续发热，6月6日炎症指标及体温达高峰。由于本室未开展支原体药敏试验，按照文献[5]的治理方案给予“头孢他啶+阿奇霉素”联合治疗，6月14日后未出现发热。

Mh分离培养困难，血平板上生长缓慢，至少需要培养48 h才可出现细小针尖样的不典型的小菌落，革兰染色菌体不着色，不能根据菌落形态或特殊的生化表型对其进行鉴定。MALDI-TOF MS是近年发展起来的一种新型软电离质谱技术，应用于微生物鉴定已经获得重大发展，在我国已经形成临床微生物质谱应用专家共识[11]。主要应用于临床常见细菌、念珠菌的鉴定，而对于其余病原微生物如支原体、分枝杆菌、丝状真菌鉴定的实际情况正处于探索阶段[12]。本文2株Mh经VITEK®MS质谱仪分析，其7个主蛋白质量峰值相似，置信度99.9%，虽未采用PCR技术对比，但有研究者应用MALDI-TOF MS技术对创伤口标本分离的Mh快速鉴定并与16SrRNA基因序列分析对比，结果一致[12-13]。

综上所述，Mh血流感染的临床特征无特异性，分离培养困难且革兰染色不着色，极易漏检，实验室应特别关注血培养报阳时较平缓的生长曲线，若患者有手术操作，相关感染指标升高、体温持续升高且广谱抗菌药物治疗效果不佳时，应考虑Mh感染的可能，延长标本培养时间，同时采用MALDI-TOF MS对菌落进行快速鉴定，有利于及早明确病原菌，指导临床合理用药。