葵花盘不同产地、不同部位总黄酮含量的变化分析

刘吉爽，张雅蓉，徐 犇，李 纳，徐文慧，陈 新

（长春中医药大学，长春 130117）

葵花盘为菊科植物向日葵（Helianthus annuus L.）收取果实后的干燥盘状花序托。近年来，随着对葵花盘化学成分、功效的深入研究，逐渐应用于临床。葵花盘在《中药大辞典》中记载：向日 葵花盘，味甘、性寒，归肝经，功用清热平肝、止痛止血；主治高血压、头痛头晕、耳鸣、痛经、子宫异常出血、疮疹[1]。作为中成药玉盘消渴片组成成分之一，葵花盘药材标准收载于《上海市中药材标准》（1994年版），饮片炮制规范收载于《浙江省炮制规范》（1986年版）。

葵花盘主要含有黄酮、多糖、绿原酸、多肽等成分，其中黄酮类成分是其主要活性物质之一[2-8]。与大多含有黄酮类成分的中药相同，葵花盘具有明显的降血压、镇痛、抗肿瘤、抗氧化、抗菌等药理活性[9-10]。植物的次生代谢产物在体内的分布受基因和所处生境的影响，从生源合成角度而言，植物不同组织器官的生理功能不同，不同成分在不同部位的积累分布不同，药理活性也有一定的差异[11-12]。

目前，关于葵花盘有效成分及药理作用的报道相对较少，不同产地、不同部位总黄酮含量研究未见报道。葵花盘在全国广泛分布，作为一种新兴的中药，探讨不同产地葵花盘总黄酮的含量差异及药材主要药效成分含量的分布格局，为建立科学合理的质量控制方法提供依据，对葵花盘进一步研究、资源合理利用奠定坚实基础。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 T6紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司，型号：25-1650-01-1216）、TU-1810紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司，型号：CC25-ZY1）、UV 5100）紫外-可见分光光度计（上海元析仪器有限公司，型号：REI 107002）、HWS-12电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.1.2 试剂 芦丁对照品（中国食品药品检定研究院提供，含量为92.6%，批号100080-201610），氢氧化钠（北京化工厂，20111213），亚硝酸钠（天津市光复科技有限公司，20110519），硝酸铝（天津市光复精细化工研究所，20160513），无水乙醇（北京化工厂，分析纯），超纯水。

1.1.3 试药 葵花盘采集于吉林省白城市、大安市、长春市、洮南市等地区。

2 试验方法

2.1 对照品溶液制备 取适量的芦丁对照品精密称定，加入60%乙醇，超声处理使其溶解后放冷，补加60%乙醇溶液定容至刻度，摇匀制得每1 mL含0.2 mg的芦丁对照品溶液[13]。

2.2 供试品溶液制备 称取葵花盘粉末（50目）1 g，于100 mL的圆底烧瓶，加50 mL石油醚（60～90℃），加热回流脱脂处理2 h，滤过，将石油醚液弃去，药渣置水浴挥散溶剂，同滤纸一起移入圆底烧瓶，精密移取60%乙醇50 mL，称重，回流提取2 h，放冷至室温，补足失重，摇匀，滤过，即得。

3 结果

3.1 吸收波长的选择 取芦丁对照品溶液适量，按《中国药典》2015年版总黄酮含量测定方法显色，以相应试剂为空白，在200～800 nm进行扫描，对照品溶液在505 nm波长处显示有最大吸收，故选定检测波长为505 nm[13]。

3.2 显色方法优化 精密量取“2.2”项下溶液，照常用总黄酮测定方法显色[13]。实验发现显色后产生白色絮状物，连续测定多次，吸光度值差异大。取同一供试品溶液测定滤过前后吸光度，比较吸光度变化，结果续滤液的吸光度值基本稳定。

故将供试品显色优化为：精密量取供试品溶液2～5 mL，置25 mL量瓶中，加60%乙醇至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min。加氢氧化钠试液10 mL，再加60%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，滤过，续滤液，按相应方法测定吸光度。结果见图1。

图1 过滤前后样品1 min内测定结果

3.3 标准曲线的建立 照《中国药典》2015年版，依法进行试验，绘制标准曲线[13]。结果在7.526 5～45.159 2 µg/mL线性关系良好，计算得回归方程为Y=0.013 3X-0.017 8（r=0.999 5）。

3.4 仪器精密度 按《中国药典》2015年版试验，依法连续测定吸光度6次[13]，表明仪器精密度良好，RSD%为0.65%（n=6）。

3.5 中间精密度实验 同一样品，三个不同操作人员，三台不同型号的紫外-可见分光光度计，不同日期测定，得出其RSD值为0.94%。

3.6 稳定性 精密吸取“2.2”项下溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h测定吸光度[13]。结果显示供试品溶液稳定性良好，RSD%为1.34%（n=6）。

3.7 重复性 取葵花盘药材粉末（50目）6份，按《中国药典》2015年版试验[13]，结果葵花盘总黄酮的含量均值0.94%，RSD%为1.96%（n=6），表明方法重复性良好。

3.8 加样回收率试验 精密称取葵花盘粉末（50目）6份，每份1 g，按“2.2”项下要求制备，每份加入芦丁对照品9.98 mg，按《中国药典》2015年版依法测定[13]。结果平均回收率100.92%，RSD%为2.59%（n=6），表明方法准确性良好。

3.9 不同产地含量测定 精密称取吉林省内11个不同地区的葵花盘药材粉末1 g，按“2.2”项下要求制备，“3.2”项下要求显色，测定并计算葵花盘样品中的总黄酮含量。结果采集于吉林省不同地区的葵花盘总黄酮的含量存在差异，结果见图2。

图2 葵花盘不同产地总黄酮含量

3.10 不同部位含量测定 取不同产地葵花盘苞片、膜质托片、花梗残基及海绵体粉末（50目）各1 g，按“2.2”项下的方法制备，“3.2”项下的方法显色，于505 nm波长处测定吸光度A，计算各部位总黄酮含量。结果葵花盘各部位均含黄酮类成分，不同部位的含量存在一定差异，膜质托片含量最高，是海绵组织的近2倍，总黄酮在葵花盘各器官中的分布格局为膜质托片>苞片>花梗残基>海绵组织，作为次生代谢的产物具有在特定部位积累的趋势。结果见表1、图3。

3.11 葵花盘总黄酮含量与不同部位的相关性分析 运用SPSS 23.0统计软件对总黄酮含量与不同部位（花梗残基、膜质托片、苞片、海绵体）的相关性进行统计分析。结果显示，膜质托片、苞片总黄酮含量与其他各部位存在显著性差异（P＜0.05），进一步表明总黄酮含量与部位有联系，葵花盘黄酮类成分在植物中的代谢生成和积累具有一定的部位选择性。

图3 不同部位总黄酮含量

表1 葵花盘不同部位总黄酮含量（n=2）（mg/g）

4 讨论

黄酮类成分广泛分布于各种生物体，具有多种药理作用，已成为质量控制的关键性指标成分和活性成分的重要组成。葵花盘具有清热平肝、止痛、止血等作用，其中起主要作用的为黄酮类成分。相关研究表明，葵花盘总黄酮作为一种强抗氧剂，可清除体内的氧自由基，阻止核酸氧化，降低嘌呤含量，促进尿酸代谢，具有良好的治疗痛风的作用[14]。以葵花盘为原料的相关产品具有广阔的应用前景，已成为医药和保健品的研发热点，但缺乏质量可控的标准。

本试验建立的含量测定方法简便、准确，可用于葵花盘总黄酮的含量测定，对葵花盘质量控制、保障临床用药安全有效具有现实意义和指导意义。葵花盘总黄酮含量测定显色时产生白色絮状物，且实验发现葵花盘果胶含量越高其絮状物越多，直接测定影响紫外透过率。因此，为保证测定数据的稳定、准确和可靠，测定吸光度前需过滤。葵花盘总黄酮显色与果胶提取原理极为相似[15]，分析此现象的产生可能为提取液中的果胶与硝酸铝形成铝盐，加入NaOH试液后形成絮状物。测定吸光度前滤过处理，可减少干扰，试验数据更为准确。

从本文结果看，不同产地葵花盘总黄酮含量有差异，其中白城洮河镇庆生村的样品含量最高，洮南市二龙乡仁义村最低，仅0.37%，二者总黄酮含量相差近8倍，可见其成分分布具有生境选择性。总黄酮在葵花盘四个部位分布有差异，其中膜质托片、苞片含量较高，海绵体含量最低，表明黄酮类成分在葵花盘不同部位的代谢积累有一定的选择性。植物的各器官在其生长发育过程中起到的作用不同，其生理代谢量不同，致使各器官化学成分的分布存在差异[16]。大量研究表明，植物果实及种子的形成过程中伴随黄酮类物质的产生[17]，膜质托片与向日葵果实生长发育密切相关，故黄酮类成分在此部位大量产生和积累。苞片作为向日葵光合作用的主要部位之一，是葵花盘中除膜质托片外总黄酮含量较高的部位，与相关文献报道的黄酮类成分多集中于光合作用部位的结论相一致[12]。不同产地、不同部位葵花盘总黄酮含量分布的研究，对保证葵花盘用药质量及资源的进一步开发和合理利用提供依据，为中药有效成分生源合成途径及成分分布提供参考。