养任调冲汤改善更年期综合征大鼠糖脂代谢的机制研究❋

郭紫芬，周 琛，邹湘曼，向花花，肖正午

(1. 南华大学药物药理研究所，湖南 衡阳 421001； 2. 湖南省肿瘤微环境响应药物研究重点实验室，湖南 衡阳 421001)

更年期综合征除月经紊乱、情绪多变等为主要症状外，部分妇女还可出现糖脂代谢异常[1-2]。有研究表明，脂肪因子血清瘦素(leptin, LP)和脂联素(adiponectin, APN)可通过不同机制、不同途径影响机体糖脂代谢[3-4]。雌激素替代治疗更年期综合征虽疗效确切，但对患者调节血脂水平结论不一[5-6]，且有可能产生阴道不规则出血、诱发乳腺癌、子宫内膜癌的风险。而中医药治疗往往能取得比较好的疗效[7-8]。养任调冲汤具有调理冲任、滋养肝肾之功效[9]，为阐明其疗效机制，前期观察到养任调冲汤对更年期阴虚内热证模型大鼠神经内分泌功能的调节作用[10]。本研究继续观察其对糖脂代谢的影响，并进一步探讨其机制是否与调节脂肪因子LP、APN水平有关。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雌性SD大鼠，体质量180 g～220 g，由南华大学实验动物中心提供(合格证号SCXK(湘)-2009- 0002)。本实验已通过南华大学实验动物伦理委员会审查。

1.2 主要试剂

养任调冲汤冲剂(批号090316)购自江苏江阴天江药业有限公司；坤宝丸(国药准字Z11020185)购自北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂；血清瘦素放射免疫法检测试剂盒(批号10-1199-01)、胰岛素ELISA检测试剂盒(批号10-1250-01)均购自瑞典Mercodia公司；脂联素ELISA检测试剂盒(批号 A0135)购自武汉 USCNLIFE 公司；其他试剂均为进口或国产分析纯试剂。

1.3 造模方法

120只雌性SD大鼠普通饲料喂养7 d后按随机数字表法分为对照组与造模组，其中对照组20只，造模组100只。参照文献[11]，造模组大鼠用2%戊巴比妥钠腹腔麻醉(35 mg/kg)，腹位固定，切开皮肤及左右两肋腰肌，暴露卵巢及紧密相连的子宫角，摘除双侧卵巢。术后肌注庆大霉素5 d，第6天起逐只对去卵巢大鼠进行阴道涂片检查，连续5 d，以验证去势手术成功。术后第7天开始给大鼠按照体质量2 mL/100 g灌服热性中药(制附片25 g，干姜25 g，加水煎煮成100 mL)，连续灌服14 d。对照组大鼠只行腹部假手术，不摘除卵巢。造模成功后大鼠按随机数字表法分为5组各20只，分别为模型组、坤宝丸阳性对照组(0.16 g/kg)、养任调冲汤高剂量组(3.24 g/kg)、养任调冲汤中剂量组(1.62 g/kg)、养任调冲汤低剂量组(0.81 g/kg)。去势手术后第14天开始灌胃给药，每日1次，连续30 d。对照组与模型组均给予同体积生理盐水。

1.4 一般观察

观察大鼠给药前后毛发、舌质的变化，分别于造模前、治疗前及治疗后第30天检测24 h饮水量、直肠温度和大鼠体质量。

1.5 糖脂代谢指标测定

末次给药后大鼠禁食24 h，取空腹尾静脉血分离血清。酶比色法测定血清甘油三酯(triglycerides，TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)，氧化酶法测定空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)，放射免疫法测定空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)，并按以下公式计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance index, HOMAIR)：HOMAIR=空腹血糖(FBG，mmol/L)×空腹胰岛素(FINS, mIU/L) /22.5。采用放射免疫法测定血清LP，ELISA 检测APN水平。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 养任调冲汤对更年期综合征大鼠一般情况影响

表1示，去卵巢及给予热性中药造模后，大鼠表现出毛色枯燥不光滑、舌尖色红、24 h饮水量增加、肛温上升、体质量增长等阴虚内热证症状，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；给予养任调冲汤治疗30 d后，各剂量组大鼠的饮水量减少，肛温有所降低，体质量增长也呈剂量依赖性下降，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，与坤宝丸阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 养任调冲汤对阴虚内热证模型大鼠一般情况比较

2.2 养任调冲汤对阴虚内热证大鼠血脂水平影响

表2示，大鼠切除卵巢后TC、TG、LDL水平明显升高，HDL水平有所降低，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。给予药物治疗30 d后，养任调冲汤呈剂量依赖性升高大鼠血清HDL，降低LDL、TC、TG 水平，与模型组比较高、中剂量组差异有统计学意义(P<0.05)，与坤宝丸阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 养任调冲汤对阴虚内热证大鼠糖代谢影响

表3示，治疗30 d后，养任调冲汤药物高、中、低3种剂量对模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR水平影响不大，与模型组及坤宝丸阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示养任调冲汤对阴虚内热证模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR影响不大。

表2 养任调冲汤对阴虚内热证模型大鼠血脂水平的影响

表3 养任调冲汤对阴虚内热证模型大鼠血糖的影响

2.4 养任调冲汤对阴虚内热证大鼠血清脂联素和瘦素的影响

表4示，药物治疗30 d后，养任调冲汤呈剂量依赖性增加大鼠APN水平，与模型组比较，高、中剂量组差异有统计学意义(P<0.05), 与坤宝丸阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；同时，养任调冲汤也能明显降低大鼠LP水平，但与模型组及坤宝丸阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表4 养任调冲汤对阴虚内热证模型大鼠血清脂联素和瘦素的影响

3 讨论

女性更年期综合征是由于机体雌激素水平下降引起的内分泌系统调节紊乱，患者主要出现面红、潮热、盗汗、口干舌燥等一系列症状。另有Gast[12]等的研究显示，患者的心血管疾病风险随着更年期症状加重而增加，糖脂异常代谢可能是绝经妇女代谢综合征发病风险增高的关键因素。部分绝经后女性雌激素水平与胰岛素抵抗呈显著负相关，雌激素的下降及游离雄激素的相对增加可能影响内脏脂肪组织的堆积，直接导致胰岛素抵抗的发生。再者雌激素缺乏可引起血脂代谢障碍，可能是绝经导致血脂改变的主要原因。因此选择合适的措施干预更年期综合征糖脂代谢紊乱，对预防心血管疾病的发生，提高患者生活质量有重要意义。目前，雌激素治疗更年期综合征颇受争议，中医采用辨证施治治疗取得较好疗效。女性更年期综合征的中医临床辨证多属阴虚内热证。妇女届近绝经前后，肾气已衰，冲任亏虚，天癸将竭，精血不足，阴阳平衡失调，出现肾阴不足、阳失潜藏的阴虚内热证。养任调冲汤正是基于滋养肝肾、清热宁心安神而组方，女贞子、旱莲草、秦艽、鳖甲、地骨皮、菊花、丹参、酸枣仁、浮小麦、茯苓、淮山、淮牛膝与白芍等诸药配伍，起到调理冲任、滋养肝肾之功效。因此，本研究通过摘除大鼠卵巢建立更年期肾虚模型，在前期结果养任调冲汤能明显调节血清激素水平的基础上，继续观察养任调冲汤对模型大鼠糖脂代谢的影响并初步探讨其机制。

LP是肥胖基因编码的蛋白质类激素，能减少食物摄取并抑制脂肪合成，伴随着脂肪量的增加而升高。有研究显示，绝经期妇女血清LP水平显著高于正常月经周期女性[13]。APN是由脂肪组织特异性分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，可加快脂肪代谢并抑制脂肪合成。高松龄[14]研究显示，绝经妇女APN水平与肥胖程度密切相关，APN水平随着患者肥胖程度上升、体脂肪含量增加、血脂升高而下降。本文研究结果显示，养任调冲汤不但可改善更年期综合征模型大鼠阴虚内热证的饮水量、肛温、体质量增长等一般情况，而且能通过显著升高

HDL，下降LDL、TC、TG 水平，较好地干预脂质代谢紊乱，但对糖代谢影响不大。养任调冲汤主治更年期综合征阴虚内热证价值不仅与坤宝丸相当，且具有在医生辨证后可根据病情变化合理调整药味与药量的优点。结合研究室前期养任调冲汤可以调节血清激素水平的结果[10]进行分析，养任调冲汤可能是调节机体的雌激素水平，进而促进肝脏摄取LDL，抑制HDL分解代谢，从而增加HDL水平；也可能通过升高血清APN、降低LP水平调节更年期阴虚内热证模型大鼠血脂代谢。因此，养任调冲汤主治更年期综合征阴虚内热证，可能对预防心血管疾病的发生有重要意义。