肉羊胚胎移植技术应用初探

何立雄 汪保 李胜 邱国斌 陈朝阳 吾山 杨浩可 阿力丁巴 韩广洲

（1，新疆兵团第四师畜牧兽医工作站 835000；2，可克达拉市创锦牧业有限公司 835216）

家畜胚胎移植技术是一项生物工程技术，即“借腹生子”是指一只母羊(供体)超数排卵发情，经过配种后，在一定时间内从其生殖道取出胚胎或由体外受精等技术获得的胚胎，然后把这些胚胎移植到另外一只与供体羊同期发情或情期相同，但未经配种的受体母羊生殖道相应部位，外来胚胎在受体子宫着床并继续发育成长，最后产下供体羊的后代。在家畜养殖业中，此项技术主要适用于牛羊等大家畜经济价值高、产仔数量少的家畜，达到快速扩群繁育的目的[1]。在优质肉羊繁育过程中，胚胎移植技术作为一种新的快速繁育纯种羊的方法被公认和接受[2]。为丰富伊犁垦区肉羊品种，促进肉羊产业发展，兵团第四师从2006 年开始，通过胚胎移植、购买种畜等形式引进了一定量的萨福克种羊。2018 年四师与种畜禽公司合作，在四师开展萨福克肉羊鲜胚移植工作。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供体羊及种公羊

试验选取从新疆某种畜公司购入纯种萨福克母羊（平均4岁）20 只、公羊4 只（平均3.5 岁），遗传性状稳定、系谱清晰，体型外貌达到品种标准，健康结实，膘情中等以上。公羊雄性特征明显，精液质量合格。准备期（前2 月）制定了科学的饲养管理方案，确保供体羊所需营养均衡。

1.1.2 受体羊

受体羊为本地哈萨克羊，无繁殖性疾病及传染病，检测布病呈阴性。3～5 岁经产母羊，体格健壮，平均体重40kg 以上，中等膘情以上。为受体羊佩戴耳标，制定免疫计划，分期进行免疫与驱虫工作，加强饲养管理，详细观察记录羊只情况，及时发现、剔除老、弱、病、残等不达标受体羊，最终选取100只健康本地哈萨克羊作为受体羊。

1.1.3 仪器设备

羊专用胚胎移植手术保定架、B 超、腹腔镜、体式显微镜、培养皿、检胚器、外科手术器械等相关器械设备。

1.1.4 所需药品

PG、PMSG、FSH 等激素均为宁波制品厂生产；冲胚液、培养液由新西兰公司生产；静松灵注射液、160 万单位青霉素、500 万单位链霉素、甲硝唑注射液等。

1.1.5 胚胎移植工作室

分为手术室和检胚室，要求温度在25℃以上，开始工作前进行彻底除尘、消毒和无菌处理。

1.2 试验方法

1.2.1 供体羊的超排处理

2018 年10 月对供体羊进行同期发情处理。首先对供体羊全群注射PG，每只2ml。在24～72h 做好发情观察，做好发情记录，按照发情先后顺序做好分组。发情后10～12d 开始超排，本次采用FSH 逐日递减法进行处理（表1）。供体羊采用上午发情下午配种，下午发情第二天早晨配种，每只羊配种3 次，每次间隔10～12h，首末次采用子宫颈口输精，中间采用腹腔镜子宫角输精。

附表 超排及同期发情处理（单位：ml）

1.2.2 受体羊处理

受体羊首次PG 处理与供体羊同步，第二次PG 处理比供体早12h，第2 次注射后24～72h 注意观察发情情况，做好记录，参见附表。

1.2.3 供体冲胚

供体羊配种后1 周，采用手术方法冲洗供体羊子宫内桑葚期到囊胚期胚胎。术前羊只麻醉、固定、术部消毒。用手术刀在乳房前腹中线切口，小心取出子宫、卵巢，观察卵巢发育情况，记录排卵点数量。在宫管结合部插入冲胚套管针，连接注射器，注入冲胚液，注入冲胚液的速度与力度应适中。在子宫分叉处的同侧子宫插入冲胚管，回收冲胚液[3]。冲完胚胎后，将子宫复原送入腹腔。为防止粘连和腹膜炎，向腹腔内注入34℃的0.9%的生理盐水250ml+160 万单位青霉素+500 单位链霉素与100ml 甲硝唑注射液。按常规处理，闭合腹腔。

1.2.4 胚胎检查与保存

冲出的胚胎迅速送往检胚室，在带有保温装置的体式显微镜下迅速检出胚胎，移入培养液，对胚胎质量进行等级评定。胚胎分为A、B、C、D 4 个等级，其中A、B、C 级为可用移植的胚胎，放37℃培养箱中保存（4～5h），等待移植。

1.2.5 胚胎移植

选择与供体羊同时发情或晚24h 内发情的受体羊进行胚胎移植。手术方法基本与供体羊相同，轻轻引出卵巢，观察是否有排卵点，如有正常排卵点，用移胚器向有排卵点侧子宫移入胚胎1 枚。无排卵点或排卵点有异常的受体羊不移植。

1.2.6 供、受体羊的护理与管理

胚胎移植后供体、受体羊分群管理，1 周内观察伤口愈合情况，发现感染和其他症状及时处理。供体羊采胚后1 月，若发情即可配种。受体羊在术后2 周开始试情，连续试情2 个情期，如未发情可判为疑似妊娠羊，单独组群加强饲养管理。

1.2.7 妊娠检查

受体羊移植后48d，使用B 超进行妊娠检查，确定妊娠羊。

2 结果

2.1 供体羊超排效果

对20 只萨福克母羊进行超排处理，期间1 只发生消化系统疾病退出，其余19 只羊全部发情并配种，超排有效率100%。手术共冲出胚胎158 枚，平均8.3 枚/只，最高个体采配25 枚。158 枚胚胎经质量检查，可用胚胎89 枚，其中桑椹胚56 枚，A 级20 枚、B 级36 枚；囊胚33 枚，A 级31 枚、B 级2 枚。

2.2 受体羊发情效果

对100 只本地绵羊实施同期发情处理，仅有5 只未发情，其余在24h 内全部发情，同期发情率为95% （95/100）。

2.3 胚胎移植效果

89 枚胚胎移植给85 只受体羊（卵巢有正常排卵点）。根据受体羊移植后2 个情期的发情情况及B 超检查情况，确定妊娠母羊65 只，妊娠率为76.47%；实际产羔母羊38 只，产羔羊41 只，怀孕率为45.24%，产羔率48.24%。孕期肉眼可见流产母羊7 只。

2.4 供体羊的后续观察

19 只供体萨福克母羊，经过冲胚后仍然有一只羊妊娠，产下1 只健康的萨福克羔羊，其余18 只中有14 只后期相继自然发情，本交后产下健康的羔羊，4 只供体羊当年空胎。

3 结果分析与讨论

（1）萨福克羊采用PG+FSH 方法超数排卵和本地哈萨克羊两次肌肉注射PG 同期发情处理，超数排卵有效率100%，24h同期发情率95%，说明上述方法是有效可行，可以推广应用的。

（2）羊的胚胎移植妊娠率为76.47%，实际生产率为45.24%，产羔率为48.24%，实际生产率与妊娠率相差30%。查阅资料[3]，究其原因可能与胚胎早期吸收、流产和早期妊娠诊断的不准确有关。应进一步分析研究，改进相关工作方法，加强饲养管理，做好妊娠母羊养胎、保胎工作，提高产羔率。

（3）据相关报道，采用子宫冲胚法，可减少对输卵管和卵巢的刺激，延长供体母羊的使用时间。但这次冲胚完毕后仍然有供体羊妊娠并产羔，表明冲胚工作不彻底，在今后工作中需要进一步加强。

（4）羊胚胎移植技术是一项系统性很强的工作，包括羊只选择、饲养管理、超数排卵、同期发情、手术冲胚与移植、胚胎鉴定等多个关键技术环节，任何一个环节的微小失误都会导致整个胚胎移植的失败，需要不断的研究和提高，使移植效果更佳理想。

（5）本次移植工作，是畜牧兽医专业技术人员首次全程参与的移植工作。通过工作使我们认识到胚胎移植是快速繁育优质种羊最有效的方法，做好此项工作的关键在于建立一支技术过硬的畜牧兽医技术服务团队，打破过去畜牧与兽医各自为战片面思想，只有深度融合才能适应畜牧兽医体制改革后服务基层的新要求。