恒温扩增HPV检测技术对子宫颈癌的筛查作用

魏伟华，刘新海，丘创华

1.广东省深圳市龙岗区第三人民医院检验科，广东深圳518115；2.广东省深圳市第二人民医院检验科，广东深圳518035

宫颈癌为妇科常见恶性肿瘤，可严重危害女性身体健康，需引起临床重视。宫颈癌发生及发展较为漫长，从癌前病变发展至宫颈癌可需10～20年左右，期间采取有效手段对患者进行筛查及干预，可有效阻断癌前病变发展为宫颈癌，降低宫颈癌发病率及患者病死率[1]。目前临床对宫颈癌多采用细胞学技术检查，但其对技术及人员要求较高，在卫生资源有限的地区难以推广[2]。大量研究显示[3]，人乳头瘤病毒（HPV）为宫颈癌发生的必要条件，超过99.0%的宫颈癌患者可检测到HPV DNA，而HPV检测结果呈阴性者几乎不会发生宫颈癌，因此HPV检测技术在宫颈癌筛查中具有较高应用价值。该研究选取2017年6月—2018年7月该院收治的1 000名女性为研究对象，将Isotncga用于子宫颈癌检查中，旨在评价其筛查作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取进行宫颈癌筛查1 500名女性，年龄29～63岁，平均（46.78±2.78）岁。纳入标准：患者均宫颈完整，均有性生活史；所有患者均无盆腔放射治疗史、子宫切除史或手术史，所有患者均对该研究知情，且签订同意书，并通过医院伦理委员会的批准。排除标准：妊娠期或哺乳期女性；有检查禁忌证状者；对研究不同意者。

1.2 方法

所有患者均行Isotncga检查，检查前3 d不进行阴道冲洗，不应用阴道内药物，检查24 h内嘱患者严禁性生活，于月经期结束后3～7 d检查。以宫颈细胞采样刷收集宫颈脱落细胞，并保存于PreserCyt细胞保存液内，对细胞保存液内标本行预处理，对粘液、炎症细胞及血液与上皮细胞进行分离，制成薄层细胞涂片，以95%酒精固定后行巴氏染色。吸取1 mL标本高速离心10 min，取上清液后加入裂解液100μL，将其充分摇匀。将标本置入干湿恒温器（杭州奥盛）内以95℃的温度对其进行加热，时间15 min。取2μL处理好的标本放入反应液内，并加入阴性及阳性质控。放置反应管于荧光定量PCR检测系统内，将恒温反应程序设置为60℃、75 min。应用人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）对标本进行检测，严格按照说明书操作。分离提取DNA，随后应用荧光定量PCR扩增仪进行扩增。

病理学检查：将HPV检测呈阳性的女性行进一步阴道镜下可疑部位多点活检，于月经干净后行常规阴道镜检查，镜下仔细观察宫颈病灶形态、边界、血管、表面构型、颜色等征象，对病变最严重的部位行多点活检，若检查无异常现象，则取移行带第3、6、9、12点。病理检查结果分为慢性宫颈炎、轻度不典型增生（CINⅠ）、中度不典型增生（CINⅡ）、重度不典型增生（CINⅢ）、鳞状细胞癌（SCC）。

1.3 观察指标

对HPV分型检测结果进行观察，观察不同年龄段女性HPV阳性率差异，将病理诊断结果作为金标准，与HPV-DNA检测结果进行比较。阴性判定标准：标本在荧光检测通道扩增过程中，无明显指数增长的荧光信号，内参在VIC荧光检测通道循环制≤65 min。阳性判定标准：内参在荧光通道扩增过程中有或无明显呈指数增长的荧光信号。

1.4 统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用百分比（%）表示，进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV分型检测结果分析

该组1 000名行宫颈癌筛查的女性，HPV DNA检测出危险患者251名，检出率为25.10%，见表1。

表1 HPV分型检测结果分析Table 1 Analysis of HPV typing test results

2.2 不同年龄段HPV阳性率分析

30～39岁、40～49岁、50～59岁、＞60岁各年龄段HPV阳性率分别为26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49岁HPV阳性率最高，与其他各年龄段相比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2不同年龄段HPV阳性率分析Table 2 HPV positive rate analysis of different ages

2.3 HPV检测技术与病理检查结果比较

HPV检测技术检出慢性宫颈炎102例、CINⅠ52例、CINⅡ41例、CINⅢ29例、SCC27例，与病理检查结果相比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

3 讨论

宫颈癌为临床常见的一种恶性肿瘤，多项研究[4-5]表示该病发病病因与HPV感染相关，HPV-DNA检测为直接针对病因的检查手段，可有效对HPV感染女性进行筛查，及时发现并采取适当措施干预，利于降低宫颈癌发病风险，降低患者病死率。WHO指出，可将HPV-DNA检测作为宫颈癌早期筛查方法，其中16、18型为引发宫颈癌常见的类型，约76.58%的宫颈鳞癌可检测出HPV16，而7.51%可检测出18型[6]。我国临床宫颈癌筛选指南指出，对HPV检测为16、18型的患者需转诊阴道镜，其他感染患者不需转诊，只需定期复查[7]。理想的宫颈癌筛查手段需满足价格实惠、操作可行等需求，还需单独提供16、18型信息及其他高危型检测结果及内参检测信息，利于提升宫颈癌筛查效率，为临床诊治提供有力依据。

表3 HPV阳性与病理检查结果比较[n（%）]Table 3 Comparison of HPV positive and pathological examination results[n(%)]

以PCR为基础的HPV分型检测技术为临床筛查宫颈癌的主要手段，敏感性较高，在临床应用广泛，但其需反复热变性，要求设备精良，且操作过程中容易被污染，扩增反应时间较长，存在一定局限性。Isotncga检测技术为一种新型体外核酸扩增技术，具有高效、恒温、高特异性等优点，且不用借助精良昂贵的设备仪器，在临床逐渐应用广泛[8]。Isotncga为基于恒温DNA扩增原理的检查技术，为DNA提取、扩增一体化，可对HPV 16、18型进行特异性区分[9]。Isotncga取材方便，不仅可对已明确出现宫颈病变的女性进行检测，还可对可能患病的女性进行预测，便于临床尽早采取手段干预，阻断癌前病变发展为宫颈癌，降低患者患病率及病死率[10-12]。该次研究结果显示，30～39岁、40～49岁、50～59岁、＞60岁各年龄段HPV阳性率分别为26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49岁HPV阳性率最高，＞60岁年龄段HPV阳性率发病率最低，这与曹慧玲等[13]学者在相关研究中得出，在对女性宫颈癌的筛查过程中发现，各个年龄段中HPV阳性率发病率为30～39岁25.14%、40～49岁39.66%、50～59岁24.38%、＞60岁5.05%，最高发病率年龄段是40～49岁，与该文所得结果相近。HPV-DNA检测慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC与病理检查结果相比差异无统计学意义（P＞0.05），提示Isotncga在宫颈癌筛查中具有较高应用价值，可获得与病理诊断等同的结果。

综上所述，恒温扩增HPV检测技术在子宫颈癌中筛查作用理想，具有较高阳性率。