乳腺癌患者组织中PROX1的表达水平及与预后的相关性分析

李 聪 李 翠 杨美娇

中国医科大学附属盛京医院大连医院病理科，辽宁大连 116600

乳腺癌是威胁女性健康的主要恶性肿瘤之一，患者经手术治疗后，生存率仍不理想。目前认为复发和转移是影响乳腺癌患者预后的重要因素，但目前关于复发和转移的相关因素暂不明确，临床需要更为可靠的指标以评估患者预后[1]。Prospero相关同源异形盒蛋白1（PROX1）是一种调节蛋白，作为同源域转录因子家族成员，其在多器官及组织发育过程中发挥着关键性调节作用，并参与淋巴管生成[2-3]。有文献指出，PROX1参与肿瘤细胞的分化、增殖、迁移、凋亡及侵袭，但其与患者预后的关系暂不明确[4-5]。鉴于此，本研究回顾性分析70例乳腺癌患者临床资料，进一步探讨PROX1表达水平及其与预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析中国医科大学附属盛京医院大连医院2016年1月～2018年12月收治的70例乳腺癌患者的临床资料，年龄35～78岁，平均（57.8±6.4）岁；病程2～5年，平均（3.64±1.19）年；身体质量指数（BMI）18.7～ 25.9kg/m2，平均BMI（23.02±1.07）kg/m2；分化程度：低分化 33 例，中分化21例，高分化16例；TNM分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期31例，Ⅲ期20例；分子分型：LuminalA型39例，LuminalB型31例；肿瘤直径：35例为＜2cm，26例为2～5cm，9例为＞5cm。

1.2 入选标准

（1）纳入标准：①均为初次发病；②均实施手术治疗，经术后病理学检查确诊为乳腺癌；③临床资料完整。（2）排除标准：①合并凝血功能异常者；②合并严重器官功能衰竭者；③中途退出或转院者。

1.3 方法

术中采集患者乳腺癌组织，制成石蜡标本，切片，制成组织芯片，采用免疫组化染色法检测乳腺癌及癌旁组织中的PROX1表达水平，具体操作如下：二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，微波抗原修复，加入3%过氧化氢溶液，反应30min，加入山羊血清，封闭10min，一抗采用上海羽朵生物科技有限公司生产的鼠抗人PROX1单克隆抗体，于4℃下过夜，二抗采用上海碧云天生物技术有限公司生产的辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG，反应30min。二氨基联苯胺显色，苏木精复染，脱水、透明、封片，于显微镜下观察，用已知阳性玻片作为阳性对照组，用磷酸盐缓冲液作为阴性对照组。镜下随机选择5个高倍视野，计算阳性细胞数，阳性细胞数＞25%判定为阳性。随机选择3个高倍视野，采用北航CM2000B多功能真彩色病理图像分析系统对视野进行灰度测量，计算平均灰度值。用半定量评分法[6]评估染色情况：阳性细胞比例评分：＜5%（0分）、5% ～ 25%（1分）、26% ～ 50%（2分）、51%～75%（3分）、＞75%（4分）；阳性程度评分：无染色（0分）、浅黄色（1分）、棕黄色（2分）、棕褐色（3分）；将两者评分相乘，若乘积＞4判定为高表达，乘积≤4判定为低表达。

1.4 观察指标

（1）随访1年，比较PROX1低表达和高表达患者的分化程度、TNM分期及预后。（2）比较预后良好组与预后较差组的PROX1阳性率及平均灰度值。（3）评估两组患者预后，分析PROX1表达水平与预后的相关性。

1.5 统计学方法

采用SPSS24.0处理数据，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，PROX1表达水平对预后的影响采用线性回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PROX1表达水平

随访结果显示，70例乳腺癌患者中，有40例未复发，有26例复发，有4例死亡。将40例未复发患者划分为预后良好，将30例复发和死亡患者划分为预后较差；PROX1高表达患者中，中分化和高分化患者占比较高，TNM分期Ⅲ期患者占比较高，预后较差患者占比较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 PROX1在不同分化程度及TNM分期中的表达水平[n（%）]

2.2 预后良好组与预后较差组的PROX1阳性率及平均灰度值比较

预后良好组的PROX1阳性率及平均灰度值均低于预后较差组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 预后良好组与预后较差组的PROX1阳性率及平均灰度值比较（x ± s）

2.3 PROX1表达水平与预后的相关性

经线性回归分析发现PROX1表达水平与预后的线性回归方程：Y=0.783+0.483X，结果显示，PROX1表达水平可影响预后（P＜0.05）。见表3。

表3 PROX1表达水平与预后的线性回归检验结果

3 讨论

近年来，乳腺癌的早期诊治水平得到提升，治愈率提高。但乳腺癌发病机制较为复杂，其分子机制尚未得到全面合理的阐述，患者早期即可发生淋巴结转移，造成治疗后预后不佳，因此临床评估乳腺癌患者预后不能仅依据疾病分期或淋巴结转移，还需选择更为可靠的评估指标[7]。PROX1在淋巴管发育中起到一定作用，是高度保守的转录调节因子，其在胚胎形成中发挥着重要作用，并参与肝脏、眼、胰腺、神经系统、心脏及淋巴管等组织器官的生长发育[8-9]。在细胞中，PROX1参与神经干细胞及中间前体细胞的平衡调节，并与淋巴管内皮细胞发育、成熟密切相关，可反馈淋巴分化。而近年来的有关研究还发现，PROX1与恶性肿瘤细胞分化、增殖、侵袭有关，参与肿瘤淋巴结转移过程，其在胆囊癌、胆管癌、子宫内膜癌、结肠癌、胃癌、胶质瘤中均呈现高表达[10-13]。

目前有关PROX1在乳腺癌组织中的表达水平暂无较多文献报道，其高表达可能与乳腺癌淋巴转移、分化程度及TNM分期密切相关，提示PROX1参与乳腺癌恶性化过程。但目前对于PROX1的具体作用机制尚未明确，其与患者预后的关系有待进一步探讨。本研究结果显示，PROX1高表达患者中，中分化和高分化患者占比较高，TNM分期Ⅲ期患者占比较高，预后较差患者占比较高，预后良好组的PROX1阳性率及平均灰度值均低于预后较差组，经线性回归分析发现，PROX1表达水平与预后的线性回归方程：Y=0.783+0.483X，结果显示，乳腺癌组织中PROX1水平呈高表达，PROX1阳性率及平均灰度值与乳腺癌患者预后密切相关，可通过检测上述指标，制定针对性治疗方案，评估患者预后。究其原因在于，PROX1在肿瘤进展中具有多种作用机制：（1）可标记肿瘤干细胞，其表达水平升高可反馈肿瘤干细胞数量增加，癌细胞增殖和转移风险加剧；（2）可调控上皮间质转化，并可调节细胞的极性、黏附，促使癌症病情进展；（3）调节淋巴管生成，促进肿瘤转移[14-15]。总而言之，PROX1具有促癌作用，其与癌症进展密切相关，对患者预后有较大影响，可作为评估乳腺癌患者预后的重要指标。本研究选取例数较少，随访时间过短，且未对PROX1与患者年龄、病程、分子分型与肿瘤大小的相关性进行探讨，结论具有一定局限性，应扩大研究例数，延长随访时间，增加研究指标，以进一步分析乳腺癌患者组织中PROX1的表法水平与患者预后的相关性。

综上所述，乳腺癌组织中PROX1水平呈高表达，PROX1阳性率及平均灰度值与乳腺癌患者预后密切相关，可通过检测上述指标，制定针对性治疗方案，评估患者预后。