补肾固冲法不同给药时间对大鼠甲状腺激素和性激素水平的影响*

李士瑾，刘方洲,张雪侠,郭晓燕

(河南省中医药研究院，河南 郑州 450004)

青春期异常子宫出血是青春期女性的常见病，发病率逐年提高，且发病年龄越来越小[1]。青春期女性特殊的生理特点使其治疗方法异于成年人[2]。我国青春期异常子宫出血的发病率为21.03%[3]，其发病原因多为性腺轴发育不成熟[4]。目前，西医疗法的副作用较多，故寻找一种安全有效的治疗方法迫在眉睫。中医学认为：青春期异常子宫出血的基本病机是肾气虚损、冲任不固，运用补肾固冲法治疗可取得较好的疗效[5-9]。根据该病的病因病机，治疗当以补肾健脾、固冲止血为主要治则，采用补肾固冲法，组以补肾健脾固冲方，方由熟地黄、生地黄、山萸肉、党参、炒白术、川续断、菟丝子、淫羊藿 、阿胶、生山药 、生白芍和鸡内金组成。本研究以未成年雌性幼鼠为研究对象，观察了补肾固冲法不同给药时间对大鼠甲状腺激素和性激素水平的影响，以期为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动 物

Wistar大鼠，SPF级，雌性，21 d 龄，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，实验动物生产许可证编号为SCXK(鲁)20140007，动物质量合格证号为37009200005897，河南省中医药研究院实验动物中心使用许可证编号为SYXK(豫)2019-0001。

1.2 药品与试剂

补肾固冲法方药组成：熟地黄20 g，生地黄6 g，山萸肉15 g，党参15 g，炒白术15 g，川续断12 g ，菟丝子20 g、淫羊藿 20 g，阿胶(烊化)12 g，生山药 30 g，生白芍15 g ，鸡内金9 g。由河南省中医药研究院制剂室制备，按临床剂量30倍取材，所得制剂生药质量分数约为1.5 g/mL，高温消毒后于4 ℃冰箱保存备用，使用时配成适当的质量分数。 右归丸，仲景宛西制药股份有限公司产品，批号151209。大鼠总三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA试剂盒、大鼠游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)ELISA试剂盒、大鼠总甲状腺激素(TT4)ELISA试剂盒、大鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒、大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒、大鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒、大鼠孕酮(P)ELISA试剂盒、促性腺激素释放激素(GnRH)、大鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒、大鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒均购自苏州卡尔文生物科技有限公司，批号均为E20180225A。

1.3 分组与给药

将未成年雌性幼鼠分为空白对照组，右归丸组，补肾固冲高、低剂量组，每组30只，空白对照组灌服去离子水，右归丸组灌服0.55 g/mL的右归丸溶液,补肾固冲高、低剂量组分别灌服中药药液1.5，0.75 g/mL ，每日灌胃给药1次。

1.4 检测指标

给药第15天、第30天、第60天，各组分别于给药后取材10只大鼠，取材前各组大鼠均禁食12 h。末次给药后2 h，以100 g/L的水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，留取血浆，检测TSH、TT3、TT4、FT3、FT4和GnRH、LH、FSH、E2、P的含量。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 不同给药时间补肾固冲法对大鼠TT3、TT4、FT3、FT4和TSH水平的影响

给药第15天，与空白对照组对比，右归丸组大鼠血清中TT4、FT4、TT3含量升高，TSH含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)；补肾固冲高剂量组大鼠血清中TT4、TT3含量升高，TSH含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 给药第15天各组大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平对比

给药第30天，与空白对照组对比，右归丸组大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量升高，TSH含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)；补肾固冲高剂量组大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量升高，TSH含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 给药第30天各组大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平对比

给药第60天，与空白对照组对比，右归丸组大鼠和补肾固冲高剂量组血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量均升高，TSH含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)；补肾固冲低剂量组血清中TT4、FT4含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 给药第60天各组大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平对比

2.2 不同给药时间补肾固冲法对大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平的影响

给药第15天，与空白对照组对比，右归丸组、补肾固冲高剂量组和补肾固冲低剂量组大鼠血清中LH、P、E2含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 给药第15天各组大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平对比

给药第30天，与空白对照组对比，右归丸组和补肾固冲高剂量组大鼠血清中LH、P、GnRH、E2含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)；补肾固冲低剂量组大鼠血清中LH、P、GnRH含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 给药第30天各组大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平对比

给药第60天，与空白对照组对比，右归丸组和补肾固冲高剂量组大鼠血清中P、LH、GnRH、E2含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)；补肾固冲低剂量组大鼠血清中P、LH、E2含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

表6 给药第60天各组大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平对比

3 讨 论

补肾固冲法选用熟地黄、山萸肉、川续断、生山药、菟丝子、淫羊藿，促使肾精充盛。用党参、炒白术益气健脾，以后天补先天，且脾主统血，有利于肾气固摄，脾为气血化生之源，脾气充足，有利于肾精充足。为兼顾青春期女性情志特点，选用白芍养血柔肝。全方充分体现了塞流与澄源并用、固本与治标相结合的特点。固摄止血中又兼顾到活血，使血止而不留瘀。阿胶养血止血，佐以鸡内金，防止诸药滋腻，又起化瘀作用。少年治肾，本方补肾的同时又兼顾肝脾，补肾健脾柔肝，使肾精充盛、天癸成熟，此是该法的一大特点。诸药合用，共奏补肾健脾、固冲止血之效。

现代药理学研究证明，补肾药可提高垂体对下丘脑的反应，改善内分泌调节功能及低雌激素环境，促进卵泡生长发育成熟；也可改善机体免疫功能[10-15]。有研究发现，甲状腺激素水平降低，可以使生殖能力受损，影响脑垂体分泌促性腺激素[16]。本研究发现，补肾固冲法可以促进未成年雌性幼鼠甲状腺激素和性激素水平的分泌，补肾固冲高剂量组在不同的给药时间时，可以不同程度地升高血清中TT3、TT4、FT3、FT4和P、LH、GnRH、E2水平；补肾固冲低剂量组的TT4、FT4含量在给药第60天时升高，性激素的水平在给药第15，30，60天时均不同程度提高。

综上所述，补肾固冲法治疗青春期异常子宫出血可能与调节机体甲状腺激素水平和性激素水平，促进性腺轴发育成熟相关，为临床治疗用药提供了理论依据。