病毒灭活血样对输血相容性检测的影响

段莉 王远杰 刘方久

此次全球流行的新型冠状病毒性肺炎（以下简称新冠肺炎），其病原体为新型冠状病毒（SARSCoV-2，简称新冠病毒），已造成全球逾千万人感染，数十万人死亡。新冠病毒传播途径为呼吸道飞沫、气溶胶、密切接触等。人感染该病毒后，潜伏期为3～24 d，平均14 d，潜伏期患者和无症状病毒携带者均具有传染性。已证实患者粪便、血液以及病房的环境样本中均可以检测到病毒[1]；部分危重症患者会出现病毒血症，其血液传播风险较大。目前尚无新冠肺炎特效治疗药物，治疗策略以支持治疗为主[2]。对于部分贫血或需要手术治疗的确诊或疑似患者，输血治疗不可或缺。输血相容性试验是患者输血的安全保障，但新冠病毒的传染性强，实验操作者面临较大的职业暴露风险。本试验通过对血液样本进行56℃ 30 min病毒灭活，探讨热灭活对红细胞部分血型抗原性和抗体效价的影响以及对相容性试验结果可靠性的影响。

对象与方法

1 研究对象 选取20例献血员血样（其中A、B、O、AB型RhD阳性样本各5例），收集不规则抗体筛查阳性患者样本6例（其中抗-M 2例，抗-Ec 2例，抗-D 1例，抗-E 1例）。

2 试剂与仪器 ABO正反定型及RhD血型定型试剂卡（美国Ortho公司，批号：ABR149J）、抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）检测卡（美国Ortho公司，批号：AHC117F），ABO反定型红细胞试剂（美国Ortho公司，批号：A315Z），谱细胞（上海血液生物医药有限责任公司，批号：2020006），不规则抗体筛选试剂（江苏力博医药生物技术股份有限公司，批号：202002008）。微柱卡专用恒温孵育器、专用离心机（美国Ortho公司），恒温水浴箱（上海博迅实业有限公司）。

3 方法 微柱凝集法检测血液样本ABO血型和血浆抗体效价，记录反应凝集强度，效价测定以1+的凝集为判定标准。血液样本加热灭活，温度56℃，时间30 min；灭活后的血液样本重复前述操作，记录检测结果。

结 果

1 热灭活对ABO血型抗原抗体的影响 20例样本热灭活前后血型正反定型反应格局无变化，微柱凝集卡上的凝集强度无变化。结果见表1。

2 热灭活对不规则抗体效价的影响 6例样本热灭活后抗体效价降低1～2个滴度。结果见表2。注：表中1+、2+皆是人为生理盐水稀释抗体至1+、2+的凝集强度，数字1～5皆为样本编号。

表1 热灭活前后20例样本血型的反应格局

表2 热灭活前后抗体效价变化

讨 论

新冠肺炎全球大流行，人群普遍易感，以30～79岁感染者居多，部分感染者病情进展较快。危重症病例约占15%，多为老年、肥胖和伴有高血压、心脏病等基础疾病。由于新冠病毒具较强传染性，输血相容性试验多个环节会产生大量气溶胶，造成实验室污染和操作者职业暴露[3]。我国已将新型冠状病毒肺炎纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并采取甲类传染病的预防、控制措施，属于最高级别传染病管理要求。由于输血科多未经历过大的传染病疫情，二级生物安全实验室多名不符实，普遍无生物安全柜，生物安全防护能力有待提升。血液样本离心、开盖、检测等环节气溶胶污染难以避免，操作者职业暴露风险巨大[2]，即使投入大量的防护装备并采取一系列保护措施，也易造成实验室环境污染与实验人员感染[3]。如何有效避免检测过程中的职业暴露，是各实验室亟待解决的问题。

国家卫生健康委员会制定的《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南》[4]要求，新型冠状病毒肺炎相关临床样本的血清学检测应在生物安全二级实验室开展，尽可能在生物安全柜中进行，同时采用生物安全三级实验室的个人防护[5]。

新冠病毒对75%酒精、含氯消毒剂、紫外线、高温等敏感，56℃ 30 min可以有效灭活病毒[6]。本次实验旨在降低操作者在检测过程中的职业暴露风险，比较热灭活病毒前后血型抗原性及抗体效价的变化，以及热灭活对输血相容性检测的影响。结果显示，20例样本热灭活前后，血型正反定型的反应格局、凝集强度均未发生改变。6例血清中含不规则抗体的样本，抗体效价降低1～2个滴度。56℃ 30 min热灭活法对ABO血型检测无影响，对效价≤4的不规则抗体会漏检，对效价＞4的不规则抗体的检出无影响，但效价会降低。若仅用于血型鉴定不受影响，但用于不规则抗体筛查及交叉合血时需考虑低效价抗体的漏检，防范输血不良反应的发生。

另外，热灭活过程中，血液样本在高于50℃时即会出现红细胞破坏，56℃ 30 min处理后，所有样本出现严重溶血，不利于观察试管法及聚凝胺法的实验结果。56℃ 30 min处理后大部分补体会丧失活性，若样本中存在补体依赖抗体，热灭活也会影响交叉配血的实验结果判读。

在输血相容性实验室生物防护条件有限的情况下，热灭活方法可有效降低实验室操作者的职业暴露风险、防止医源性感染。

本实验存在的局限性：①受限于样本，本实验的受检对象并不包括新型冠状病毒肺炎的确诊患者；②不规则抗体样本数量少，且均为效价较高的IgG型抗体；③由于IgG和IgM型不规则抗体特异性不同，其效价、亲和力、反应性存在差异，热灭活对其影响是否具有一致性。在后续实验中，将针对性地把这些问题纳入研究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突