酪氨酸激酶2、caspase3在结直肠癌中的表达及与临床特征的关系

俞淼，王艳平

北京市第一中西医结合医院检验科，北京 100026

结直肠癌是中国较常见的消化系统恶性肿瘤之一[1]，发病率和病死率呈逐年上升趋势。由于结直肠癌常伴随腹膜转移，术后5年生存率不足20%～25%[2]。研究结直肠癌的发病机制对其深化治疗具有重要意义。目前关于结直肠癌的发病机制阐述并不完全，有研究报道细胞凋亡调控失常是其中重要的分子学机制[3]。caspase 3是细胞凋亡通路中关键酶之一，可抑制细胞过度增殖分化，介导其凋亡[4]，关于caspase 3表达与结直肠癌发生发展和预后的关系目前仍有争议[5-6]。酪氨酸激酶2（tyrosine kinase 2，TYK2）是多细胞表达的非受体型酪氨酸激酶家族中的一员，参与酪氨酸激酶途径中多种细胞因子的调节，其表达异常可导致正常细胞因子信号途径功能紊乱，介导肿瘤的发生发展[7-8]。TYK2与结直肠癌发生发展的关系鲜有研究报道，本研究探讨caspase 3、TYK2与结直肠癌发生发展和预后的关系，旨在为结直肠癌的临床诊治提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年1月至2018年10月北京市第一中西医结合医院收治的结直肠癌患者的病历资料。纳入标准：①符合结直肠癌诊断标准[9]，并经病理学检查证实为结直肠癌；②年龄≤79岁。排除标准：①伴有其他部位的恶性肿瘤疾病；②具有放化疗史、免疫治疗史；③结直肠癌术后复发；④长期使用糖皮质激素、免疫抑制剂；⑤资料缺失，无法纳入统计分析。根据纳入、排除标准，共纳入86例结直肠癌患者，取其组织标本作为结直肠癌组，选取其中术后符合要求患者的43例癌旁组织作为对照组。结直肠癌组中，男性48例，女性38例；年龄43～78岁，平均（58.3±6.9）岁；体重指数（22.1±2.3）kg/m2；结肠癌57例，直肠癌29例；浸润达肌层41例，未达肌层45例；淋巴结转移45例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期37例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例；分化程度：高分化22例，中分化23例，低分化41例。对照组中，男性26例，女性17例；年龄48～75岁，平均（58.6±5.2）岁；体重指数（22.4±2.0）kg/m2；结肠癌30例，直肠癌13例。两组患者临床特征比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

1.2.1 免疫组化染色 采用免疫组化PV两步法：石蜡切片常规脱蜡至水，蒸馏水冲洗，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡5 min，微波微火抗原修复3 min，共2次，自然冷却至室温，3%过氧化氢甲醇封闭内源性过氧化酶活性，10 min，PBS冲洗，滴加一抗，4℃冰箱过夜，PBS冲洗，滴加通用型二抗（PV-6000），37℃温箱孵育40 min，PBS冲洗，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，自来水充分冲洗，苏木精复染，酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片，每批染色均设阳性对照和阴性对照。

1.2.2 免疫组化结果判定 caspase 3蛋白阳性染色表达于细胞质/细胞膜、TYK2蛋白阳性染色表达于细胞质。①根据染色程度评分：未染色为0分，淡黄色染色为1分，棕黄色染色为2分，褐色、黑色染色为3分。②根据阳性细胞所占百分比评分：≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色程度与阳性细胞所占百分比评分的乘积＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.3 统计学分析

采用SPSS 21.0软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 caspase3、TYK2蛋白阳性表达率的比较

结直肠癌组组织中caspase 3蛋白阳性表达率明显低于对照组组织，TYK2蛋白阳性表达率明显高于对照组组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 两组组织中caspase 3、TYK2蛋白阳性表达率的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征的结直肠癌患者的结直肠癌组织中caspase3、TYK2蛋白阳性表达情况的比较

不同年龄、性别、TNM分期、分化程度、浸润深度及是否发生淋巴结转移的结直肠癌患者的结直肠癌组织中caspase 3蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同年龄、性别的结直肠癌患者的结直肠癌组织中TYK2蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、低分化、浸润深度达到肌层、发生淋巴结转移的结直肠癌患者的结直肠癌组织中TYK2蛋白阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、浸润未达肌层、未发生淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（χ2=7.017、4.015、4.015、4.592，P＜0.05）。（表2）

3 讨论

结直肠癌是威胁中国人生命健康的常见恶性肿瘤之一，发病率和病死率较高且呈上升趋势。结直肠癌的生存率较低，早期诊断和治疗在结直肠癌的临床治疗中占有重要地位。确定某些肿瘤相关因子在结直肠癌组织中的异常表达水平对结直肠癌的诊断、术后化疗和预后评估等均可提供特异性强和灵敏度较高的指导依据，是结直肠癌病理学研究的重点和热点。

caspase 3是执行细胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶家族中的一员，caspase 3作为凋亡信号通路中最后的执行者，大多数细胞凋亡途径均通过其引发凋亡指令，其表达异常可能与多种肿瘤的发生发展关系密切[10]。有学者发现肝癌患者的肝癌组织中caspase 3的表达水平显著高于癌旁组织，且升高程度与肝癌组织的分化程度密切相关，高分化者caspase 3表达水平显著高于低分化者[11]。还有学者同样发现caspase 3在食管癌患者的食管癌组织中高表达（相较于癌旁组织）并提出caspase 3的高表达可作为食管癌发生和发展的重要预后评估指标[12]。但caspase 3表达水平与结直肠癌发生发展相关性的报道国内外文献中所得结论并不一致。有学者报道腺瘤中caspase 3的表达水平显著高于结直肠癌组织[13]。但也有学者报道结直肠癌组织中的caspase 3水平显著高于正常黏膜组织，且以右侧结肠为代表，其组织中caspase 3的表达水平还与肿瘤的复发有关[14]。本研究发现结直肠癌组织中caspase 3蛋白阳性表达率低于癌旁组织，提示caspase 3可介导肿瘤细胞的凋亡，在结直肠癌早期发展阶段发挥重要作用。本研究显示caspase 3在结直肠癌中阳性表达与患者的年龄、性别、分化程度、临床分期、浸润深度无关，说明caspase 3不能作为结直肠癌进展和预后的评估指标。但也有文献报道caspase 3与结直肠癌的分化程度呈正相关，结直肠癌组织分化程度越高，caspase 3表达水平越高，凋亡活性越强[15]。出现结果的不一致性可能与样本量的大小，纳入患者的种族、性别、年龄等差异或研究方法不同等有关。后期需扩大样本量进一步研究caspase 3与结直肠癌发生发展的关系以明确结直肠癌的发展机制。

表2 不同临床特征的结直肠癌患者的结直肠癌组织中caspase 3、TYK2蛋白阳性表达情况（n=86）

TYK2以信号传感器的角色通过将细胞外的信号传递到细胞内，参与非受体型酪氨酸激酶家族中调节细胞因子信号途径的功能。有学者报道敲除TYK2的小鼠虽然有活力且能生育，但其抗击感染因素和致癌因素的能力降低，缺乏肿瘤监视[16]。推测TYK2介导机体的炎性反应和免疫功能调节。大量文献报道TYK2具有明显的肿瘤促进作用，TYK2在宫颈癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织；且在乳腺癌组织中表达上调并与乳腺癌的远处转移密切相关[17-20]。本研究结果显示，TYK2蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织，提示TYK2表达上调可能与结肠癌的发生有关。本研究结果显示，TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、低分化、浸润深度达到肌层、发生淋巴结转移的结直肠癌患者的结直肠癌组织中TYK2蛋白阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、浸润未达肌层、未发生淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。提示TYK2表达水平可作为结直肠癌发生发展和预后的一个潜在生物学指标，其表达水平与结直肠癌的分化程度密切相关，TYK2在分化差的结直肠癌组织中的表达显著高于分化高的结直肠癌组织。

综上所述，结直肠癌组织中TYK2蛋白表达上调、caspase 3蛋白表达下调，TYK2蛋白与结直肠癌的发展有一定的关系。本研究在既往文献的基础上，不仅确定TYK2、caspase 3蛋白表达水平与结直肠癌发生发展的相关性，还确定二者与结直肠癌预后的关系，深化结直肠癌的发病机制研究，对结直肠癌的诊治具有重要的指导意义。