VEGF及sFIT-1血管相关因子与复发性流产相关性研究①

李爱香

(河南省人口和计划生育科学技术研究院，河南 郑州 450000)

复发性流产是指连续发生2次或2次以上的自然流产，目前国内外研究表明复发性流产与胎盘组织中血管增生平衡、内皮细胞增殖和胎儿血液供应不足有密切的关系[1]，而促进血管形成的增生调节因子最重要的因素就是血管内皮生长因子 (VEGF)，它是促进血管新生的最重要角色，它主要通过其受体来促进血管的形成[2]，VEGF受体的可溶性形式sFIT-1具有明显的抗血管生成作用，而目前VEGF、sFIT-1在复发性流产中的如何发挥作用尚不清楚[3]。本研究通过比较复发性流产妇女及对照组的血清及绒毛组织中VEGF和sFIT-1水平情况，探讨其与复发性流产的相关性进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018-01～2019-01就诊于计划生育门诊的孕期复发性流产患者100例为研究组，年龄22～35岁，平均(27.5±2.6)岁，孕周5～16周，平均(9.5±3.5)周，排除标准：无遗传、感染、免疫等其他因素；流产次数大于2次者。对照组为正常健康流产妇女100例，年龄24～34岁，平均(28.5±2.9)岁，孕周4～15周，平均(8.5±2.5)周，所有对照组及研究组是至少有一次妊娠史，且胚胎发育正常的妊娠、分娩的妇女，其均无不良妊娠史，两组孕妇的年龄、孕期分布均衡。

1.2 研究方法

1.2.1 主要试剂：VEGF ELISA试剂盒(Thermo Fisher #BMS268-3TEN)、sFIT-1 ELISA试剂盒(Thermo Fisher #BMS227-6TEN)。

1.2.2 实验方法：抽取研究组及对照组在清晨空腹时的非抗凝静脉血2mL，然后室温静置15min，1000rpm离心，将上层血清移至1.5mL EP管中，放置于-70℃的温度中保存，采用酶联免疫法严格按照ELISA试剂盒中的操作部说明书检测所有血清中的VEGF和sFIT-1的浓度水平。流产手术时采集所有研究对象的新鲜绒毛组织，使用无菌的生理盐水漂洗去除绒毛组织中所有的血细胞后，放在4%的甲醛液中24～48h至脱水状态，石腊包埋，切片后烤片脱腊，然后采用免疫组织化学二步法染色，观察所有标本组织中的VEGF和sFIT-1的的表达与分布情况。

1.3 免疫组织化学结果测定

当VEGF呈阳性时其表现为黄色、棕色；当sFIT-1呈阳性时其表现棕黄色颗粒状。免疫组织化学评分(IHS)=阳性细胞百分比×阳性细胞染色强度，当在显微镜下观察时，阳性细胞染色判定标准是：不显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分。阳性细胞百分比判定标准是：无阳性细胞显色为0分，阳性细胞显色<25%为1分，25%～50%为2分，阳性细胞显色>50%为3分。免疫组织化学评分(IHS)判定：HIS在0～2分判定为阴性(-)；HIS在3～5分判定为弱阳性(+)；HIS在6～8分判定为中度阳性()；HIS>9分判定为强阳性()。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组研究对象血清中VEGF及sFIT-1的表达

与对照组相比，研究组血清中的VEGF及sFIT-1的表达水平显著增高，且差异具有一定统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组研究对象血清中VEGF及sFIT-1的表达

2.2 两组研究对象绒毛组织中的VEGF及sFIT-1的表达

研究组绒毛组织中的VEGF及sFIT-1的阳性表达比例明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义，见表2。

表2 两组研究对象绒毛组织中的VEGF及sFIT-1的表达(n=100)

2.3 复发性流产妇女血清中VEGF及sFIT-1的相关性

Pearson相关性分析显示，孕期复发性流产妇女血清中，与VEGF及sFIT-1的表达水平具有明显相关性(r=0.870、r=0.003，P<0.05)，见表3。

表3 复发性流产妇女血清中VEGF及sFIT-1的相关性

3 讨论

复发性自然流产(RSA)是一种常见的妊娠并发症，发生率为10%～15%的孕妇。据估计，大约1%～2%的夫妇经历过三次或三次以上连续流产，大约5%的夫妇经历过两次流产，复发性流产的病因这些因素包括宫因素、染色体异常、内分泌功能障碍、血栓性疾病、免疫性疾病和获得性母体感染[4]。然而，在高达50%的复发性流产患者中，潜在的致病因素仍不确定。正常妊娠的发生和维持依赖于母体胎盘细胞和滋养细胞之间的多方面关系和相互作用，这些因素转化为多种有助于囊胚植入的调节因子[5]。

新生血管的形成是形成绒毛膜绒毛的关键步骤，胎儿早期的生命依赖于绒毛膜绒毛。任何影响这一重要步骤或影响内膜内皮活性的因素都可能导致血栓阻塞，如果机体本身清除血栓的能力降低，则可能导致胎儿早期死亡。妊娠是一种高凝状态，细胞因子、血管生成介质、激素以及促凝因子和抗凝因子之间的微妙平衡是在生殖各个阶段起关键作用的主要介质[6]。血管内皮生长因子(VEGF)是一种强有力的血管生成因子，被认为是内皮细胞增殖的主要调控因子，其对滋养细胞的增殖、胚胎血管系统乃至胎儿宫内循环的生长都至关重要。据报道，在自然流产的蜕膜内皮细胞中存在胎盘滋养层VEGF的减少，VEGF是由包括胎盘在内的多种细胞类型产生的一种多功能细胞因子[7]。VEGF调节生理和病理生理血管发育。多项研究表明，VEGF的生物学活性受可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFIT-1)调控，sFIT-1是VEGF的内源性抑制剂，可能在内皮功能障碍中发挥重要作用。过量循环的sFIT-1与VEGF具有高亲和力。三分之二流产的孕妇被认为是由于胎盘缺陷导致的，而胎盘缺陷与母体螺旋动脉缺乏生理变化有关。最近的一些研究表明，血管生成因子VEGF及其溶质受体sFIT-1的失调可能参与了流产的病理生理学。有趣的是，最近的其他研究表明，高水平的sFIT-1与子痫前期有关。在妊娠后期，循环sFlt-1在子痫前期和其他妊娠并发症中明显增加[8]。

本研究通过比较两组研究对象的血清绒毛组织中VEGF、sFIT-1的表达结果表明：研究组患者血清中的VEGF、sFIT-1表达水平大于对照组，研究组患者绒毛组织中的VEGF、sFIT-1阳性比例大于对照组，且差异有统计学意义，与相关的研究结果相一致。研究组的血清及绒毛组织中sFIT-1、VEGF水平显著高于对照组，Pearson相关性分析显示，VEGF、sFIT-1在复发性流产患者血清中的表达具有显著相关性(P<0.05)。在绒毛组织中sFIT-1 对VEGF的生物活性具有抑制作用。机体血管促进因子与抑制因子间表达及调节的失衡、细胞外基质合成与降解的失衡，最终致机体血管生成紊乱，胎盘绒毛血供异常，导致复发性流产的发生。综上所述，在孕期发生复发性流产与VEGF、sFIT-1呈正相关的关系，VEGF、sFIT-1水平升高可能是孕早期胎停孕的原因之一。