MMP-9、CD15s在乳腺癌组织中的表达及其相关性①

尹佳新，田 寅，葛忠耀，刘应红，徐 雷，于 娜

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤外科，黑龙江 佳木斯 154003)

女性乳腺癌发病率呈逐年升高。观察统计近年来女性乳腺癌发病情况，从地方范围到全国范围发病率均呈现逐年上升的趋势[1]。Jin[2]统计研究得出各个年龄段的乳腺癌发病率都有所增加,其中青年女性(24～35岁)增高比例最大。由以上数据可看出，女性乳腺癌发病率的增长已不容忽视,如何根据其临床病理学特点有针对性的制定综合治疗方案,从而提高患者的早期诊断成为了临床重点。

1 材料与方法

1.1 材料

收集佳木斯大学附属第一医院病理科2012-02～2018-09收捡的手术标本存档蜡块118例，依据其免疫组化染色结果分为阳性表达组(实验组)和阴性表达组(对照组)，所有标本均经术后病理证实为乳腺癌，年龄在22～68岁。

1.2 试剂

免疫组化s-p法鼠抗人 MMP-9 单克隆抗体、鼠抗人 CD15s 单克隆抗体、 DAB显色试剂盒等试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。文中主要涉及的仪器为倒置显微镜及显微镜照相系统,病理组织包埋机,免疫组化专用抗原修复架及修复盒。

1.3 方法

运用免疫组织化学技术检测乳腺癌患者组织中MMP-9、CD15s的表达情况，由两位经验丰富的病理医师进行双盲阅片。

1.4 结果判定

组织结构及背景清晰,MMP-9蛋白阳性表达为胞浆内出现棕黄色颗粒，CD15s抗原阳性表达为在腺腔缘、细胞膜和( 或) 细胞浆中信号呈棕黄色。无阳性染色细胞为“-”，阳性细胞数<25%为“+”，阳性细胞数25%～50%为“”，阳性细胞数>50%为“”。

1.5 统计学方法

采用 SPSS 22.0 统计软件进行数据分析。根据实验要求，标本的阳性率的比较采用χ2检验，分析MMP-9 及CD15s在乳腺癌组织中的表达是否具有相关性，采用Spearman 相关等级分析，P<0.05为有显著性的检验标准。

2 结果

2.1 病理结果

通过免疫组织化学方法对实验标本进行检测，结果显示MMP-9蛋白阳性表达为在细胞浆内出现棕黄色颗粒、CD15s抗原阳性表达为在细胞膜和细胞浆中呈棕黄色信号，本实验标本中MMP-9的阳性表达68例，CD15s阳性表达81例。见图1～4。

图1 MMP-9在乳腺癌组织中高表达(×400)

图2 MMP-9在乳腺癌组织中低表达(×400)

图3 CD15s在乳腺癌组织中高表达(×400)

图4 CD15S在乳腺癌中低表达(×400)

2.2 MMP-9、CD15s与相关临床参数

本组实验对118例乳腺癌组织进行免疫组化染色，其中MMP-9阳性表达组患者同侧腋窝淋巴结转移46例(67.6%)显著高于阴性表达组23例(46.0%)，有统计学差异(χ2=5.560，P=0.015)；MMP-9阳性表达组患者有脉管癌栓39例(57.3%)显著高于阴性表达组19例(38.0%)，差异具有统计学意义(χ2=7.408，P=0.006)；CD15s阳性表达组患者同侧腋窝淋巴结转移57例(70.4%)显著高于阴性表达组15例(40.5%)，有统计学差异(χ2=9.778，P=0.002)；CD15s阳性表达组患者有脉管癌栓45例(55.6%)显著高于阴性表达组11例(29.7%)，差异具有统计学意义(χ2=6.506，P=0.009)。按照癌症联盟委员会( AJCC) TNM分期标准进行分期，MMP-9阳性表达组I期、II期患者 48例、阴性表达组I期、II期患者42例，阳性表达组III期患者20 例，低表达组III患者 8例，两组数据相比较，MMP-9高表达III期患者比例高于阴性表达组，差异具有统计学意义(χ2=2.865 ,P=0.049)。CD15s阳性表达组I期、II期患者60 例、阴性表达组I期、II期患者 30 例，阳性表达组III期患者19 例，阴性表达组III患者9 例，两组数据相比较，CD15s阳性表达组III期患者比例高于阴性表达组，差异具有统计学意义(χ2=6.145,P=0.015)。见表1。

表1 MMP-9、CD15s与临床参数分析

2.3 MMP-9、CD15s与相关病理参数

MMP-9高表达组患者ER阳性表达26例显著低于低表达组36例，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；MMP-9阳性表达组患者PR阳性表达32例(47.5%)显著低于阴性表达组34例(68.0%)，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；MMP-9阳性表达组Ki67值>14%为46例(61.8%)高于阴性表达组27例(54.0%)但统计学分析并无明显差异(P﹥0.05)；.MMP-9阳性表达组HER-2高表达33例(48.5%)显著高于阴性表达组16例(30.6%)，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；CD15s阳性表达组ER阳性表达35例(43.2%)阳性表达率显著低于阴性表达组25例(67.6%)，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；CD15s阳性表达组PR阳性表达35例(43.2%)其与阴性表达组19例(51.3%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05)；CD15s阳性表达组KI67值>14%为55例(67.9%)显著高于阴性表达组14例(37.8%)，差异具有统计学意义(P﹤0.05)；CD15s阳性表达组HER-2高表达45例(55.6%)显著高于阴性表达组15例(40.5%)，差异具有统计学意义(P﹤0.05)。见表2。

表2 MMP-9、CD15S与病理参数的分析

2.4 MMP-9、CD15s与年龄因素的影响

染色分析比较年龄≤40岁患者乳腺癌组织中MMP-9的染色强度()比例显著高于>40岁患者,差异具有统计学意义(P﹤0.05)；年龄≤40岁患者乳腺癌组织中CD15S的染色强度()比例显著高于>40岁患者,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。见表3。

表3 年龄与MMP-9、CD15s表达强度的关系

3 讨论

乳腺癌的发生、发展是一个多因素、多环节影响的十分复杂的过程。区分良性肿瘤和恶性肿瘤最重要的特征是恶性肿瘤细胞可以相对无限地浸润、增殖和转移。如何控制肿瘤转移是癌症治疗中的重难点。

本研究结果认为同侧腋窝淋巴结情况随MMP-9的表达增高而增高。Yang证实了MMP-9的高表达能影响乳腺癌的生物学行为并与其淋巴结受累有关，与本实验结果相一致。研究表明Basal-like型乳腺癌患者MMP-9 阳性者淋巴结转移率显著高于非Basal-like型[3]。结果提示MMP-9阳性表达组患者ER、PR阳性表达率显著低于阴性表达组，研究认为雌激素在大部分组织中都表现出对MMP-9的抑制效应,在不同的组织器官中可能会通过不同的途径对MMP-9进行调控。本研究认为MMP-9的高表达与雌激素的作用紊乱相关，可能与某种调节机制解除了雌激素对MMP-9的抑制作用有关，有待进一步研究，本组数据显示MMP-9阳性表达组患者有脉管癌栓显著高于阴性表达组，国外学者研究认为MMP- 9在乳腺侵袭性导管癌中高表达，与组织学分级和总的生存率密切相关[4]。

本实研究结果认MMP-9的染色强度与年龄及乳腺癌的侵袭性相关。与Cepeda[5]研究结果认为MMP-9在乳腺癌中的表达强度越高其预后越差的报道相一致。Liang[6]研究通过COX 多因素回归分析发现年龄、淋巴结转移数是影响总生存的独立危险因素。研究表明MMP-9可以通过增强血管内皮因子和其受体的结合体功能，从而促进血管和淋巴管的生长。另外，MMP-9通过能加工GTGF，阻止其与VEGF结合释放血管内皮因子，从而促进血管新生的过程，肿瘤组织内丰富的血管网为肿瘤细胞的增殖、生物侵袭提供所需的营养物质。

本组实验数据显示CD15s阳性表达组患者同侧腋窝淋巴结转移率显著高于阴性表达组同侧腋窝淋巴结转移率。与Renkonen研究结果相同认为乳腺癌组织中E-选择素和其配体CD15s同时表达,肿瘤细胞具有更高的侵袭性。此外Wata[7]通过监测小细胞肺癌患者术前的血清唾液酸路易斯酶X值来预测患者术中的淋巴结转移情况和术后的生存率，结果认为CD15s的检测对于术前评估及预后有重要临床价值。研究认为PR是除肿瘤大小、淋巴结转移情况外另一个重要的预后指标, PR阳性患者较ER阳性患者更能从内分泌治疗中获益。PR阴性导致癌细胞在增殖过程激素受体表达减少造成对内分泌治疗反应差或无反应, 加之HER-2过表达, 因此多数患者需要行化疗及靶向治疗。

有研究认为肿瘤细胞表面CD15s表达量与肿瘤侵袭转移、预后密切相关。其表达强度与患者预后生存期呈负相关性。有研究发现选择素配体CD15s在乳腺癌组织中浓度增加，其远处转移的患者血浆中增加显著。Dong[8]研究认为SLeX表达状况与乳腺癌转移潜能有关且SLeX阳性患者复发率较高，发现年龄为影响其表达的因素，无淋巴结转移属于保护性因素, 而较小的年龄是复发的危险因素。

尚培中等[9]在胃癌中进行的MMP-9与CD15s实验分析，其结果认为共同表达组胃癌微血管密度高于单表达组胃癌的微血管密度,共同表达组的临床分期、组织学分级均高于对照组。认为MMP-9降解细胞外基质消除了基质中抑制内皮细胞增殖的物质, 给CD15s促进内皮细胞的增殖表达CD62创建了条件，CD62与其配体CD15s相结合在肿瘤细胞中发挥特定的生物学作用，通过将编码人类α1,2-岩藻糖基转移酶基因的一部分cDNA转染到卵巢癌中，建立了组成型表达Lewis抗原的稳定细胞系RMG-1，发现RMG-1-hFUT细胞显示出比对照组更高的侵袭能力，认为Lewis抗原可以下调MMPs抑制剂TIMP-1、2从而上调MMP-9是Lewis抗原促进细胞侵袭的机制之一。MMP-9、CD15s在肿瘤细胞中协同发挥作用促进肿瘤细胞的浸润及转移[10]。揭示了MMP-9和CD15s在恶性肿瘤中的相互协调促进作用。

本研究认为MMP-9在女性乳腺癌中的表达随着同侧淋巴结处转移的增多、脉管癌栓、HER-2过表达发生率的逐渐增高，CD15s的表达也随之升高。本实验表明MMP-9、CD15s的表达与乳腺癌肿瘤细胞的侵袭转移密切相关，可作为联合检测的相关指标。但是本实验样本量较小，其结果具有一定局限性,尚需进一步实验研究。