慢性乙型肝炎病毒感染者外周血中γ-干扰素和转化生长因子-β的表达及其意义

李虓，王晓英，隋昕珂，赵晖，史丛宁，李文玉

(1.首都医科大学附属北京天坛医院检验科,北京 100070；2.战略支援部队特色医学中心消化内科)

乙型肝炎病毒感染为感染科常见疾病，研究表明[1]，慢性乙型肝炎病毒感染者中，有15%～25%的患者因乙型肝炎病毒感染所致肝病死亡，给予慢性乙型肝炎病毒感染者及时诊断与有效治疗尤其关键。机体免疫反应与慢性乙型肝炎发病之间存在关联，细胞因子为多肽类活性物质，来源于淋巴细胞及单核巨噬细胞，能在细胞之间传递信号[2]。γ-干扰素(IFN-γ)及转化生长因子-β(TGF-β)为辅助性T淋巴细胞在细胞免疫反应过程产生的[3]，参与免疫反应过程；为分析IFN-γ及TGF-β在慢性乙型肝炎病毒感染者中的表达情况及对疾病发生的影响，本研究对160例乙型肝炎病毒携带者、182例慢性乙型肝炎患者、190例慢性乙型肝炎所致的肝硬化患者、156例慢性乙型肝炎病毒携带者的肝癌患者及202名健康者展开研究，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 以2019年1月至12月首都医科大学附属北京天坛医院收治的160例乙型肝炎病毒携带患者作A组，其中99例(61.88%)男性，61例(38.12%)女性；年龄范围18～61岁，年龄(41.76±10.33)岁。以182例慢性乙型肝炎患者作B组，其中114例(62.64%)男性与68例(37.36%)女性；年龄范围19～63岁，年龄(42.09±14.51)岁。以190例慢性乙型病毒肝炎所致的肝硬化患者作C组，其中119例(62.63%)男性与71例(37.37%)女性；年龄范围20～63岁，年龄(42.16±13.47)岁。以156例肝癌患者为D组，其中97例(62.18%)男性与59例(37.82%)女性；年龄范围20～62岁，年龄(42.11±11.33)岁。四组患者符合《慢性乙型肝炎诊治指南》[4]中规定的诊断标准；以同期入院接受体检的202名健康者作对照组，其中127例(62.87%)男性与75例(37.13%)女性；年龄范围19～63岁，年龄(42.15±12.81)岁。本次研究已通过首都医科大学附属北京天坛医院医学伦理委员会审查，所有研究对象均签署了知情同意书。五组人群的基础资料具有可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)入组前未接受乙型肝炎相关治疗；(2)语言、认知功能均正常；(3)精神状态正常；(4)年龄18～65岁。排除标准：(1)病历资料不完整；(2)合并严重性心脑血管病症；(3)合并其他恶性肿瘤；(4)妊娠、哺乳期；(5)其他类型嗜肝病毒感染；(6)合并严重脏器功能障碍；(7)自身免疫性疾病。

1.3 方法

1.3.1 IFN-γ及TGF-β表达检测方法 取受试者4 mL空腹外周静脉血，常规离心后，提取血清，以酶联免疫吸附法对IFN-γ及TGF-β表达进行测定，严格按照试剂盒说明书进行，IFN-γ及TGF-β试剂盒均由南京建成生物科技有限公司提供。

1.3.2 乙型肝炎病毒DNA检测方法 取受试者空腹外周静脉血清，以实时荧光定量分析仪(购于美国ABI，7300型)进行基因扩增，对乙型肝炎病毒DNA载量进行测定，严格按照说明书进行。

1.3.3 外周血肝功能检测方法 取受试者空腹外周静脉血清，用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的全自动生化分析仪BS-2000进行测定，严格按照试剂盒说明书进行，AST、TBIL试剂盒均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。

1.3.4 纤维化指标检测方法 取受试者空腹外周静脉血清，用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的全自动化学发光分析仪CL-6000i进行测定，严格按照试剂盒说明书进行，HA、LN、CIV、PIIINP试剂盒均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。

1.4 乙型肝炎病毒DNA结果判定标准及乙型肝炎病毒载量分组 乙型肝炎病毒DNA测定结果≥102IU/mL时，即为阳性[5]。乙型肝炎病毒DNA测定结果为102～104IU/mL者作低载量组，乙型肝炎病毒DNA测定结果为105～106IU/mL者作中载量组，乙型肝炎病毒DNA测定结果≥107IU/mL者作高载量组。

2 结果

2.1 五组外周血病毒DNA载量与IFN-γ及TGF-β表达水平的比较 A、B、C及D组患者外周血病毒DNA载量差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C及D组患者外周血中IFN-γ及TGF-β表达均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 五组外周血中IFN-γ及TGF-β表达的比较

2.2 慢性乙型肝炎患者不同乙型肝炎病毒载量者的IFN-γ及TGF-β表达比较 乙型肝炎病毒DNA检测结果表明，慢性乙型肝炎患者中，79例患者为乙型肝炎病毒低载量，61例为乙型肝炎病毒中载量，42例为乙型肝炎病毒高载量，且乙型肝炎病毒高载量患者的IFN-γ及TGF-β表达最高，同时乙型肝炎病毒低载量患者的IFN-γ及TGF-β表达比乙

型肝炎病毒中载量患者高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 慢性乙型肝炎患者不同乙型肝炎病毒DNA载量细胞因子对比

2.3 五组患者肝功能及肝纤维化水平比较 A、B、C及D组患者肝功能指标和肝纤维化水平指标均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；从乙型肝炎病毒携带者组、慢性乙型肝炎患者到慢性乙型肝炎病毒所致的肝硬化患者，肝纤维化指标表达逐渐升高，于慢性乙型肝炎病毒所致的肝硬化组的患者中达到最高值，而肝癌组有所下降。见表3。

表3 五组患者肝功能及肝纤维化水平比较

3 讨论

乙型肝炎病毒感染者具有临床转归差异大的特征，研究表明[6-8]，患者的免疫功能对乙型肝炎病毒感染的发生、进展及转归起着决定性作用，此过程为细胞免疫过程，辅助性T淋巴细胞参与较多的免疫反应[9-11]。

本研究对慢性乙型肝炎病毒携带患者、慢性乙型肝炎患者、慢性乙型肝炎所致肝硬化患者及慢性乙型肝炎所致肝癌患者。外周血中IFN-γ及TGF-β表达在肝硬化患者最高，提示外周血中IFN-γ及TGF-β表达是反映机体肝细胞受损程度的重要指标，与肝炎患者病情程度具有密切相关性，可能参与慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的疾病发展[12-14]，本研究结果也表明随着病情进展，肝功能指标和肝纤维化也呈上升趋势，ALT在肝癌中处于最高，肝纤维化指标在肝硬化组中处于最高状态。这是符合临床表现的。

本研究对慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒DNA载量进行测定，结果发现慢性乙型肝炎患者病毒高载量患者的IFN-γ及TGF-β表达最高，乙型肝炎病毒低载量患者的IFN-γ及TGF-β表达比乙型肝炎病毒中载量患者高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示IFN-γ能使机体自身的抗病毒机制激活，并对乙型肝炎病毒 DNA复制进行有效抑制，而乙型肝炎病毒 DNA持续存在，则会加重肝实质细胞组织的受损程度，导致肝星状细胞持续活化，加快肝纤维化的进展。乙型肝炎病毒DNA侵入至正常肝脏中，通过诱导细胞因子，使肝星状细胞活化，加快TGF-β分泌速度，增加其分泌量，表明高浓度乙型肝炎病毒能促使慢性乙型肝炎转化为肝纤维化[15]。

综上所述，慢性乙型肝炎病毒感染者肝脏受损过程中，IFN-γ及TGF-β均可能参与，且外周血中IFN-γ及TGF-β表达与乙型肝炎病毒载量之间存在一定的关联。但病毒载量并不是其唯一影响因素，可进一步深入研究。